巴氏小體實驗報告

1、高熹 168615140001 2016年10月17日人體性染色質(zhì)體的觀察實驗報告一、實驗?zāi)康?、掌握人體性染色質(zhì)的檢測方法； 2、觀察人體性染色質(zhì)的形態(tài)特征及存在部位；為進一步研究人體染色體的畸變與疾病提供參考條件；3、了解雌性哺乳動物X染色體失活假說和劑量補償效應(yīng)的機制。二、背景知識二十世紀六十年代，M.L.Barr等研究發(fā)現(xiàn)雌貓神經(jīng)細胞核膜內(nèi)凝縮的深染小體性染色質(zhì)體(sex-chromatin body)或巴氏小體(Barr body)，而雄性個體細胞中則沒有。進一步研究發(fā)現(xiàn)：所有哺乳類雌體細胞中都可以見到這一結(jié)構(gòu)。此后研究發(fā)現(xiàn)這種與性別有關(guān)的兩型現(xiàn)象在有袋類、食肉類和靈長類等動物的多數(shù)

2、組織細胞中存在，而在嚙齒類中在少數(shù)組織中可以觀察到。三、實驗原理在雌性個體的細胞中的2條染色體，在間期，有一條呈松散狀態(tài)，參加細胞生理活動；另一條保持異固縮狀態(tài)，我們稱之為Barr小體。由于Barr小體是處于失活狀態(tài)，所以一般位于細胞核內(nèi)邊緣。形狀多樣（微凸形、三角形、卵形、短棒形等）。一般，在正常女性細胞中可能出現(xiàn)一個Barr小體，正常男性細胞中不可能出現(xiàn)Barr小體；（正常女性口腔粘膜細胞中約3050%有一個Barr小體。在不同實驗室中計數(shù)的差別較大，而在男性中則僅只偶爾可見不典型者這是環(huán)境引起代謝的暫時現(xiàn)象，約2%以下）。對于性染色體畸變的個體。 Barr小體數(shù) = 細胞內(nèi)X染色體數(shù)1。

3、Barr小體特征及位置：它是處于失活狀態(tài)的X染色體，一般位于細胞核膜內(nèi)側(cè)邊緣的一個深染區(qū)（較細胞核要?。?，形狀多樣。劑量補償效應(yīng)：是指XY型性別決定的生物，由X染色體上的基因決定的性狀在兩性的表現(xiàn)幾乎相同。即X染色體上的基因的表達產(chǎn)物在雌、雄細胞中是等量的。 哺乳動物 X染色體隨機失活或父源X染色體失活有袋動物 父源X染色體失活黑腹果蠅 雄性個體X染色體基因表達水平加倍秀麗線蟲 雌性個體兩條X染色體基因表達水平減半補償?shù)膶崿F(xiàn)途徑： X染色體轉(zhuǎn)錄速率的差異性，雄性細胞中的X染色體轉(zhuǎn)錄速率雌性細胞中2條X染色體的轉(zhuǎn)錄速率；雌性細胞中有一條染色體失活。四、實驗器材、材料和試劑1、器材：生物顯微鏡、鑷

4、子、漱口杯、牙簽、載玻片、蓋玻片、染色缸、解剖針。2、實驗材料：實驗者的口腔黏膜或帶有毛囊的頭發(fā)。3、試劑：50%，70%，95%乙醇、二甲苯、5mol/LHCL、1%硫堇水溶液、蒸餾水、封固劑、乙醚、醋酸地衣紅燃料或45%乙酸。五、實驗步驟1、取材1）口腔黏膜材料載玻片用去污劑徹底清洗，蒸餾水徹底沖洗后再經(jīng)過70%乙醇沖洗，在火焰上烘干保存?zhèn)溆?。以防操作過程中上皮細胞脫落。取材前，自來水漱口三次，去除口腔中的細菌和已經(jīng)退化的黏膜上皮細胞。防止口腔中的細菌被硫堇溶液染色與細胞發(fā)生混淆。取材時，張開嘴，用牙簽輕輕刮面頰內(nèi)壁，將掛下來的細胞在絕對結(jié)晶的載玻片上涂成一個占較大面積的薄層，空氣中干燥3

5、0min后進行染色。2）毛囊材料取發(fā)根細胞：拔取一根帶有毛囊的頭發(fā)，置于載玻片上，滴加固定液于毛囊上，固定1min左右，空氣干燥。2、染色1）口腔黏膜材料將涂片依次放入95%、70%、50%乙醇和蒸餾水的染色缸中，每種濃度的溶液浸泡2min。涂片自蒸餾水中取出后，放入5mol/LHCL染色缸中，大約5s。將酸解的涂片放入蒸餾水的染色缸中10-15s去算，最好重復(fù)一至兩次，PH會影響染色效果。在1%的硫堇水溶液染色缸處理10-15min。染色后經(jīng)蒸餾水洗后一次在下列酒精溶液中脫水：50%乙醇30s，70%乙醇30s，95%乙醇30s，無水乙醇30s。在二甲苯中透明1min，然后取出多余的二甲苯。

6、2）發(fā)根細胞去下毛囊，棄發(fā)干，加一滴醋酸地衣紅染液后蓋上蓋玻片，然后文火微熱，靜置5min后蓋一濾紙壓片。或者在材料上滴一滴45%乙酸或5mol/LHCL解離5min后吸掉多余乙酸。用潔凈的解剖針針頭將毛囊的組織分散均勻，待晾干后將載玻片放入硫堇溶液中染色20min。取出載玻片移入75%乙醇中作用30s。取出載玻片晾干待鏡檢。六、實驗結(jié)果及分析1、鏡檢制片時，先用低倍鏡找到細胞，再用高倍鏡觀察并計數(shù)性染色質(zhì)體。應(yīng)該注意核質(zhì)是網(wǎng)狀或細顆粒狀分布；核膜清晰、核無缺損；染色適度；周圍無雜菌。2、性染色質(zhì)體位于核膜的內(nèi)驗，應(yīng)為深藍色，直徑大于1um。在口腔黏膜上皮細胞中很難辨認非邊緣X染色質(zhì)體。3、性

7、染色質(zhì)體偶爾也在雄性細胞中觀察到，概率很小。七、注意事項1、刮口腔上皮細胞前要漱口。2、涂片略干再加改良苯酚口紅。3、染色時間不要太長，否則核質(zhì)著色深，X染色質(zhì)體不易區(qū)分。4、毛囊細胞要充分解離，壓片前可先用解剖針敲片，使細胞解離。八、思考題1、掌握概念：巴氏小體、性染色質(zhì)、X小體、劑量補償效應(yīng)。巴氏小體：在哺乳動物體細胞核中，除一條X染色體外，其余的X染色體常濃縮成染色較深的染色質(zhì)體，此即為巴氏小體。又稱X小體，通常位于間期核膜邊緣。性染色質(zhì)：性染色質(zhì)指高等哺乳動物體細胞核內(nèi)的一種可被堿性染料染成深色的小體，性染色質(zhì)檢查可初篩性染色體病及鑒別性別，對兩性畸形可輔助診斷。X小體：緊貼細胞核膜內(nèi)

8、面的團塊狀結(jié)構(gòu)，直徑約1um，染色程度較其他染色質(zhì)深。劑量補償效應(yīng)：使細胞核中具有兩份或兩份以上基因的個體和只有一份基因的個體出現(xiàn)相同表型的遺傳效應(yīng)。一個細胞核中某一基因的數(shù)目稱為基因劑量。在以性染色體決定性別的動物中，常染色體上的基因劑量并無差別，因為雌雄兩性動物的常染色體的形態(tài)和數(shù)目都相同。但是對于性染色體來講，包括人類在內(nèi)的哺乳動物雌性個體的每一體細胞中有兩條X染色體，所以在X染色體上的基因劑量有兩份，而雄性個體只有一條 X染色體，基因劑量只有一份。2、查閱文獻指出巴氏小體研究的新進展。羊水脫落細胞巴氏小體探究文獻記載口腔黏膜細胞中， 巴氏小體百分率男性5%，18%女性42%。本試驗結(jié)果中男胎巴氏小體3%有22 例， 8%女胎36%有15例，女胎巴氏小體明顯低于文獻，從表中可以看出男女巴氏小體百分率仍呈現(xiàn)出明顯分界線，說明羊水脫落細胞巴氏小體與胎兒性別密切相關(guān)3，準確率達92.5%，只是與口腔黏膜細胞判斷標準不一樣。尤其兩者中間出現(xiàn)的3%巴氏小體8%過渡值，其間男胎女胎均有，此區(qū)間不可以作為判斷的依據(jù)。出現(xiàn)以上差異，有可能與實驗對象及材料不同有關(guān)，其次鏡檢者的實際經(jīng)驗，對可數(shù)細胞的認定不一樣，也可出現(xiàn)差異，口腔間期細胞較多，羊水脫落細胞退化程度較高，間