HBV的變異及其耐藥的診治PPT課件

1、HBV 的變異及其耐藥的診治上海瑞金醫(yī)院 陸志檬教授變異是病毒重要生物學(xué)特征之一 慢性慢性HBV感染者體內(nèi)每天可產(chǎn)生感染者體內(nèi)每天可產(chǎn)生101113個病毒體個病毒體 復(fù)制過程中復(fù)制過程中DNA多聚酶可發(fā)生錯誤導(dǎo)致病毒多聚酶可發(fā)生錯誤導(dǎo)致病毒DNA中中出現(xiàn)核苷錯誤配對出現(xiàn)核苷錯誤配對 HBV DNA每個復(fù)制循環(huán)中每每個復(fù)制循環(huán)中每10,000個堿基對可發(fā)生個堿基對可發(fā)生1個核苷錯誤，因而形成個核苷錯誤，因而形成HBV突變株：突變株：可能改變了宿主對病毒的免疫反應(yīng)可能改變了宿主對病毒的免疫反應(yīng)可能增強了病毒的復(fù)制能力可能增強了病毒的復(fù)制能力1Carman WF, London: Churchill

2、 Livingstone, 1998;141-172變異株 突變株（variantvariant）（）（mutantmutant） HBV變異株變異株 是指在自然環(huán)境中發(fā)生變化的病毒株 HBV基因型、HBsAg血清型和亞型 HBV突變株突變株 是指在宿主體內(nèi)自發(fā)產(chǎn)生或者在治療壓力或其它壓力下發(fā)生改變的病毒株 HBV自發(fā)性前核心區(qū)/核心區(qū)和核心啟動子(BCP)突變與HBV基因型密切相關(guān)1Lok AS, Gastroenterology, 2001; 120:1828-1853病毒感染的持久性及耐藥性病毒感染的持久性及耐藥性病病 毒毒肝細(xì)胞肝細(xì)胞病毒多聚酶病毒多聚酶缺乏矯正功能缺乏矯正功能CCC

3、DNA半衰期長半衰期長受染細(xì)胞受染細(xì)胞半衰期長半衰期長宿宿主主n選擇性壓力選擇性壓力n免疫應(yīng)答免疫應(yīng)答 病毒感染的病毒感染的持久性持久性 對耐藥突變株的選擇對耐藥突變株的選擇1Zoulim F,Semin Liver dis,2002;22S1:23-32 2Zoulim F,Antivir Chem Chemother,2001,12:131-142病毒高復(fù)制病毒高復(fù)制高變異率高變異率耐藥分析 耐藥基序耐藥基序 （Drug resistance motifs） HBV表型耐藥表型耐藥 （Phenotypic resistance） 臨床耐藥臨床耐藥 （Clinical resistance）

4、三者相關(guān)，但不完全等同三者相關(guān)，但不完全等同 HBV polymerase(wild-type)Lamivudine and wild-type HBV(一一) Nucleotides ss (-) DNAhighaffinity Y M D D Lamivudine and wild-type HBV(二)HBV polymerase (wild-type) NucleotideshighaffinityLamivudineinhibitionss (-) DNA Y M D D Lamivudine and YMDD variant HBV YV/I D DNucleotidesreduc

5、edaffinityLamivudineweak inhibitionss (-) DNAHBV polymerase(variant)病毒耐藥性的診斷n表型耐藥在治療期間血清病毒DNA水平上升n基因型耐藥病毒多聚酶基因出現(xiàn)突變 1Nafa S, Hepatology,2000;32:1078-1088 2Stuyver L, J clin Microbiol,2000;38;702-707耐藥變異的檢測方法 Sequences analysis Line probe assay PCR-RFLP analysis(Restriction fragment length polymorphis

6、m) Real-time PCR Molecular beacons DNA chipLightCycler Detection Formats l Mutation AnalysisMutation AnalysisTemperatureTemperaturelowlowmediummediumhighhighMismatchMismatchPerfectPerfect MatchYMDD變異檢測結(jié)果變異檢測結(jié)果YMDD基序變異發(fā)生后的臨床影響lEmergence of YMDD variants does not necessarily equate to clinical resista

7、nceYMDD變異檢測結(jié)果變異檢測結(jié)果00020153017510002000002146511068.720213100181013.603192100231010.511171變異株百變異株百分比分比(%)(%)YVDDYVDDYIDDYIDDYMDDYMDD變異株百變異株百分比分比(%)(%)YVDDYVDDYIDDYIDDYMDDYMDD治療治療4848周周治療前治療前編號編號張欣欣等 瑞金醫(yī)院YMDD變異對臨床的影響變異對臨床的影響張欣欣等 瑞金醫(yī)院YMDD變異對臨床的影響變異對臨床的影響張欣欣等瑞金醫(yī)院CountryMethodNumber of PatientsPercents

8、of Detection of YMDD mutant in untreated patientsChinaClone Analysis580% (4/5)Japan1PCR ELISA & mini-sequence method1828% (5/18)Japan2Peptide nucleic acid (PNA) mediated polymerase chain reaction clamping1822% (4/18)GermanyLine- probe-assay86 Of the patients who developed resistance, 32% had YMD

9、D mutants pretreatment. Of those who did not develop resistance, 59% had YMDD mutants pretreatment.Therefore, YMDD pre-treated doesnt predict treatment failure. Japan1: Satsuki Kobayashi, Tatsuya Ide, Michio Sata Japan2: Toshihiko Kirishima, Takeshi Okanoue, Yukiko Daimon, et al. 對拉米夫定耐藥株的治療對拉米夫定耐藥株

10、的治療不明不明部分活性部分活性不明不明LFd4C不明不明不明不明不明不明LdC不明不明不明不明不明不明LdT不明不明無無不明不明Clevudine不明不明無無不明不明Emtricitabine有有部分活性部分活性無報道無報道恩替卡韋恩替卡韋有有有有無報道無報道阿地福韋阿地福韋無無無無有有: : 25%/1y;50%/2y拉米夫定拉米夫定有有尚未研究尚未研究有有: : 75%的患者的患者干擾素干擾素 對拉米夫定耐藥株的活性對拉米夫定耐藥株的活性 體外體外 體內(nèi)體內(nèi)耐藥性耐藥性抗病毒藥物 1Nafa S, Hepatology,2000;32:1078-1088 2Delaney Wet, Ant

11、imicrob Agents Chemother,2001;45:1705-17132002.4. 西班牙 Adefovir 治療治療CHB 及及對對LAM耐藥變異的體內(nèi)外試驗?zāi)退幾儺惖捏w內(nèi)外試驗 Inhibition of lamivudine-Resistant HBV by Adefovir in Cell Culture Assay Fold Increase in IC50 Mutation Lamivudine Adefovir Wide type 1 1 V521L 1.4 1.9 L528M 3.5 1.9 M552I 380 3.2L528M + M552V 2080 2.5

12、V521L + L528M + M552V 1666 0.7L528M & V521L: compensatory mutations enhancing replication fitness Viral Load Suppression in Patients Treated with ADV for Up to 72 Weeks Median Decrease in Duration of ADV No. of HBV DNA Therapy patients* (Log10 c/ml ) 24 weeks 106 - 3.6 48 weeks 46 - 4.4 72 weeks

13、 14 - 4.7Genotyped patients with both baseline and post-treatment HBV DNA data available 對拉米夫定耐藥的預(yù)防針對病毒針對病毒l 拉米夫定拉米夫定+ +泛昔洛韋泛昔洛韋l 拉米夫定拉米夫定+ +阿地福韋阿地福韋 ( (或或+ +恩替卡韋恩替卡韋,LdT)l 拉米夫定拉米夫定+ +干擾素干擾素 ( (或或IFN 續(xù)貫治療續(xù)貫治療) )針對宿主針對宿主l恢復(fù)特異性抗恢復(fù)特異性抗HBV CD4/CD8免疫應(yīng)答免疫應(yīng)答l誘導(dǎo)持續(xù)病毒抑制誘導(dǎo)持續(xù)病毒抑制lHBV DNA疫苗疫苗l細(xì)胞因子細(xì)胞因子 1Gish RG,

14、Antimicrob Agents Chemother, 2002;46:1734-1740 2Santantonio T, J Hepatol, 2002;36:799-804患者用拉米夫定前后的病情演變拉米夫定拉米夫定 100mg 干擾素干擾素HBeAg+ HBeAb-HBeAg- HBeAb+HBsAg-102日達(dá)仙日達(dá)仙 1.6mg TIW104103105106107108DNAALT男性，男性，36歲歲展望 治療拉米夫定耐藥株的新藥已在臨床試驗之中，其中治療拉米夫定耐藥株的新藥已在臨床試驗之中，其中阿地福韋對拉米夫定耐藥株具有較強的活性阿地福韋對拉米夫定耐藥株具有較強的活性 發(fā)展新的方法確定病毒載量、檢測耐藥株、評估發(fā)展新的方法確定病毒載量、檢測耐藥株、評估CCC DNA對監(jiān)測治療進(jìn)而改變治療終點非常重要對監(jiān)測治療進(jìn)而改