免疫考點知識點學習

1、十一章1固相膜免疫分析技術的概念：以微孔膜為固相載體，包被已知抗原或抗體，加入待測樣本后，經微孔膜滲濾作用或毛細管虹吸作用使樣本中的抗體或抗原與膜上包被的抗原或抗體結合，再通過膠體金標記物或酶標記物與之反應形成肉眼可見的顯色結果2膠體金的概念：是由金鹽被還原成原子金后形成的金顆粒懸液。膠體金顆粒由一個基礎金核和包圍在外雙離子構成。由于靜電作用，金顆粒之間相互排斥而形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負電的疏水膠溶液。 膠體金的特性：（1）膠體特性（2）呈色性和光吸收性（3）穩(wěn)定性3免疫層析實驗原理：以硝酸纖維素膜為固相載體，樣品溶液借助毛細作用在層析條上泳動，同時樣品中的待測物與層析材料上待測物的受

2、體（抗原或抗體）發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應，層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域（檢測帶），通過檢測標記物膠體金顆?；驘晒馑氐龋诙虝r間內（20min)聚集而得到直觀的試驗結果（顯色） 。包括雙抗體夾心法、競爭法、間接法4免疫滲濾實驗原理：是將抗原或抗體點加在固相載體硝酸纖維素薄膜上，制成抗原或抗體包被的微孔濾膜并貼置于吸水材料上，依次在膜上滴加樣品、免疫膠體金及洗滌液等試劑并與硝酸纖維素膜上的相應抗原或抗體發(fā)生反應，起到親和層析的濃縮作用，達到快速檢測的目的。抗原抗體反應后，形成大分子膠體金復合物，從而使陽性結果在膜上呈現紅色斑點。包括雙抗體夾心法、間接法5斑點酶聯免疫

3、吸附實驗：樣品中的抗體或抗原與預先包被在nc膜上的抗原或抗體發(fā)生抗原-抗體反應，然后再加入相應的酶標二抗進行反應，反應結束后，通過酶催化底物，形成有色的沉淀物，產生顯色反應，根據染色條帶或斑點的有無或深淺，對抗體或抗原進行檢測。6免疫印記原理：是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析技術相結合的技術，具有分析容量大、靈敏度高、特異性強等優(yōu)點，是檢測蛋白質特性、表達與分布的一種最常用的方法。十二章1免疫組化的概念：是指用標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項免疫檢測方法。 方法：酶免疫組織化學技術、熒光免疫組織化學技術、免疫金（

4、銀）組織化學技術、親和組織化學技術、免疫標記電鏡組織化學技術2酶免疫組織化學技術：直接法、間接法、酶橋法、PAP（過氧化物酶抗過氧化物酶）法、雙橋PAP、APAAP（堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶）3親和素的種類：植物凝集素、生物素、葡萄球菌蛋白A（SPA）等4免疫標記電鏡技術：酶免疫電鏡技術、免疫膠體鐵化學染色法、免疫膠體金染色法5抗原的修復法：酶消化法、鹽酸水解法、微波法、高壓鍋法、煮沸法十三章1流式細胞術的概念：是基于流式細胞儀的一項快速、精確、高通量針對微粒（細胞）的特征或功能進行多參數定性、定量分析和分選的新型技術。 特點：（1）速度快（2）精度高（3）準確性好（4）多參數量，可以同時對一個

5、微粒作物理、化學和生物特性的多參數測量。2經典流式細胞儀和分選儀的基本結構書：（1）液流系統（2）光學系統（3）信號檢測及光電轉換系統（4)分選系統（5)計算機系統PPt:液流系統、信號檢測、轉換及放大系統、計算機分析系統分選儀多了一個：分選系統：熒光激活細胞分選系統（FACS）3數據的顯示與分析： 流式細胞檢測結果的縮寫：散射光信號：前向散射光FSC、側向散射光（垂直散射光）SSC熒光信號：平均熒光強度（MFI）或相對熒光強度（RFI） 異硫氰酸熒光素（FITC）藻紅蛋白（PE） 前向散射光意義：是與細胞切線方向小角度散射光，其能反映細胞形狀和體大小。其強度與細胞體積大小成正比。 側向散射光

6、意義：激光照射到細胞內容物時，可以產生方向不同和強弱不等的散射光，垂直方向散射光對細胞膜、胞質、核膜的折射率更為敏感，可反映被檢測細胞內精細結構和顆粒信息。細胞越不規(guī)則，細胞表面的突起越多，細胞內能夠引起激光散射的細胞器或者顆粒性物質越多，其SSC值就越大。4熒光補償的概念：是指不同的熒光素由于發(fā)射光譜重疊，因此在檢測的時候有串色現象，通過減去重疊部分的光，使檢測器檢測到的光能量是真正的某一熒光素產生的光能量。5結果顯示方法：？單參數：（單參數直方圖）橫軸：熒光或散射光，縱軸：細胞數量構成，用于FSC、SSC和熒光（FL1FLn）等單參數的數據顯示。 雙參數：（二維點圖、二維登高）兩個獨立參數

7、與細胞相對數之間的關系，橫坐標和縱坐標分別代表與細胞有關的兩個獨立參數，平面上每一個點表示具有相應坐標值的細胞。雙熒光：CD分子：分區(qū)分為：雙陽、雙陰、x陽y陰、x陰y陽。雙散射光：小細胞、小顆粒度的細胞群是淋巴細胞群，T細胞、B細胞和NK細胞都位于此中細胞、中顆粒度的細胞群是單核細胞群，大細胞、大顆粒度的細胞群是中性粒細胞群。 設門分析技術：在某一張選定參數的直方圖或散點圖上，根據圖中細胞群分布特征，選定其中想要分析的細胞群，從而對該群細胞進行單參數或多參數分析。6常用熒光燃料和熒光蛋白：不同通道選不同燃料的搭配原則：流式細胞儀根據熒光素的最大吸收光譜確定該熒光素在流式細胞儀上由哪種激光器激

8、發(fā)，并根據最大發(fā)射波長確定其接收通道。？十五章1免疫細胞的分離方法和功能檢測：(看一下） 怎么標記特定細胞：T細胞：CD3+CD4+CD8-輔助性細胞ThCD3+CD4-CD8+細胞毒性細胞Tc or CTLCD4+CD25+ Foxp3+調節(jié)性細胞Tr or Treg B細胞：CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等B1（CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-) NK細胞：至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94、CD96、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多種抗原。目前多以CD3-、CD16+、CD56+ 作為NK細胞的典型標志。 十六章1

9、細胞因子測定方法：4種：酶聯免疫吸附試驗、化學發(fā)光酶免疫試驗、流式細胞術酶聯免疫斑點實驗特性1 ：免疫學測定法檢測的是細胞因子或黏附分子的蛋白含量，具有特異性高、 操作簡便、重復性好，實驗結果穩(wěn)定，測定影響因素較少等特點。 特性2：細胞因子作用特點：低分子量的多肽或糖蛋白，大部分為單體，半衰期短。具有高效性、多效性、重疊性、網絡性、協同性和拮抗性。十七章1冷球蛋白的概念：又稱冷免疫球蛋白，是血清中一種病理性蛋白質。該蛋白在04°發(fā)生沉淀，420°凍膠狀或沉淀，37°溶解。今天講的？二十二章1超敏反應檢測方法：1型：體內：皮膚實驗、激發(fā)試驗 體外：血清總IgE檢測、

10、特異性IgE檢測、IgG4檢測、細胞脫顆粒測定 2型：抗血細胞抗體檢測、自身抗體檢測、抗球蛋白試驗即Coombs試驗。 3型：免疫復合物 4型：皮膚實驗二十四章1免疫增殖病的損傷機制：（1） 漿細胞異常增殖（2） 正常體液免疫抑制（3） 異常免疫球蛋白增殖所造成的病理損傷（4） 溶骨性病變2常見免疫球蛋白增多?。?、 多發(fā)性骨髓瘤2、 原發(fā)性巨球蛋白血癥3、 重鏈病4、 輕鏈?。貉宓鞍纂娪編缀鯚oM帶，但尿蛋白電泳顯示M帶，位于區(qū)間5、 良性單克隆免疫球蛋白病6、 淀粉樣變性3：M蛋白的概念：一類免疫球蛋白或免疫球蛋白片段（輕鏈或重鏈）的異常增多，但多無免疫活性。形式：完整Ig (IgG, I

11、gA, IgM) 輕鏈（鏈, 鏈) 重鏈（鏈，鏈，鏈）書上：是漿細胞或B淋巴細胞單克隆大量增殖產生的一種異常免疫球蛋白，其氨基酸組成及排列順序十分均一，空間構象、電泳特征也完全相同，本質為免疫球蛋白或其片段（重鏈、輕鏈等）。它產生于單一克隆，又常出現于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、惡性淋巴瘤病人的血或尿中，故稱M蛋白。4：本周蛋白概念： 當輕鏈合成超過重鏈時，輕鏈游離于血清中，由于分子量較小，容易通過腎小球從尿中排出，而在尿中檢出。（輕鏈?。?檢測方法：1血清區(qū)帶電泳 2免疫電泳3免疫固定電泳4血清免疫球蛋白定量6異常免疫球蛋白檢測的應用原則： 一般采用兩種以上的方法互相驗證。初篩試驗：血清區(qū)帶

12、電泳分析、免疫球蛋白定量檢測或尿本-周蛋白定性檢測；對于陽性者要作定量分析及免疫球蛋白分類鑒定：免疫電泳或免疫固定電泳、免疫球蛋白亞型定量和血清及尿中輕鏈定量及比值計算；鑒別良性還是惡性增生：良性者輕鏈與重鏈增高比為1：1,惡性者輕鏈與重鏈比值明顯增高改變；臨床診斷還要結合相關實驗室資料：骨髓檢查、影像學及病理學結果等綜合考慮做出正確診斷。1抗原抗體結合反應的原理：（1） 抗原抗體結合力：靜電引力、范德華引力、氫鍵、疏水作用力。（2） 抗原抗體結合力的親和力：抗體單價Fab片段與單價抗原表位的結合能力（3） 親和力：多價抗體與抗原分子之間的結合能力背：2抗原抗體結合反應的特點：（1） 特異性：

13、交叉反應：若兩種不同抗原分子表面的部分抗原表位相同或類似，則可與 與彼此相應的多克隆抗體發(fā)生交叉反應。（2） 可逆性：抗原抗體是分子表面的非共價鍵結合，形成的復合物不穩(wěn)定，在一定條件下可以解離為游離抗原和抗體。這種結合特性稱為可逆性。（3） 比例性：前帶：抗體過剩、等價帶：比例合適的范圍、后代：抗原過剩（4） 階段性：特異結合階段（肉眼不可見，數秒數分鐘內完成）反應可見階段（凝集和沉淀現象）3影響抗原抗體結合反應的因素（1） 本身因素：抗原：理化特性、表位數目 抗體：來源、特異性和親和力 抗原抗體的比例：影響最大（二）反應基質因素：干擾反應但與分析物本身無關的非特異性2因素：蛋白、鹽、補體、抗

14、免疫球蛋白抗體、藥物等（三）實驗環(huán)境因素：電解質：抗原等電點：PH35，抗體等電點：PH56 酸堿度：反應一般在PH68進行 溫度：最常用室溫，其次43°和28°一定溫度范圍，速度隨升溫加快，但過高反應物失活。4抗血清保存：短期4°保存、冰凍5年，-80°，避免反復凍融，真空保存更久。5McAb單克隆抗體制備：雜交瘤技術：在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞（有HGPRT但無組織培養(yǎng)的增值能力）與具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞(缺乏HGPRT)融合為B細胞雜交瘤。 運用HAT培養(yǎng)基：H黃嘌呤、A氨基喋呤、T胸腺嘧啶核苷 細胞DNA合

15、成途徑：主要途徑：糖和氨基酸作為原料，葉酸作為要輔酶。 應急（彌補）途徑：在H和T存在的情況下，HGPRT、TK 催化合成 過程：融合、選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)、抗原特異性雜交瘤細胞篩選抗體雜交瘤細胞陽性保存：液氮：慢凍-70°，快融：34-40°，定期檢查染色體數和抗體產生能力背6基因工程抗體：又稱重組抗體，是指利用重組DNA及蛋白質工程技術對編碼抗體按不同需要進行加工改造和重新裝配，經轉染適當受體細胞表達的抗體分子。7免疫凝集實驗抗原稱為：凝集原，抗體稱為：凝集素8玻片凝集試驗：定性：1菌種診斷或分型鑒定2檢測病人血清中的抗體3血型ABO血型鑒定9試管凝集試驗：（半定量）定量抗原

16、與倍比稀釋受檢血清混合反應。 效價：產生明顯凝集顯現的血清最高稀釋度 肥達實驗、外-斐實驗、交叉配血實驗10間接免疫凝集抑制實驗：檢測標本中是否存在與和致敏抗原相同的抗原， 先將標本和抗體試劑結合，再加入致敏載體抗原，出現凝集現象，表示無相同抗原（陰性）11間接Coombs實驗：用于檢測游離在血清中的不完全抗體。將受檢者與正常人O型紅細胞混合，如受檢者血清中有不完全抗體，則可吸附于紅細胞上，形成致敏紅細胞，再加入抗人球蛋白抗體，與致敏紅細胞表面的不完全抗體結合，使紅細胞凝集。12自身紅細胞凝集試驗：用于檢測全血中的抗體或抗原，運用抗人O型紅細胞單克隆抗體與另一種特異性抗體或抗原連接形成雙功能抗

17、體，該抗體能和任意血型紅細胞結合，不出現凝集現象，可以利用全血的紅細胞檢測相應抗原或抗體。13透射免疫比濁實驗：指可溶性抗原與相應抗體在一定緩沖液中結合形成免疫復合物，使反應濁度發(fā)生改變，在一定波長的光線通過反應液時，被其中免疫復合物反射、吸收而引起透射光減少，可用吸光度表示，吸光度與免疫復合物含量成正比，在保持抗體過量條件下，吸光度與抗原量成正比。14散射免疫比濁實驗：抗原抗體在液相中特異性結合后產生一定大小的免疫復合物，一定波長的光通過通過反應液遇到免疫復合物發(fā)生散射現象，光的強度與免疫復合物含量和散射夾角成正比，與入射光波長成反比。保持散射角度和波長一定，光強與免疫復合物含量成正比，保持

18、抗體過量，免疫復合物與抗原含量成正比。15單向免疫擴散實驗：是先將一定量的抗體混于瓊脂凝膠中，使待測的抗原溶液在瓊脂內從局部向周圍自由擴散，在一定區(qū)域內形成可見的沉淀環(huán)。16雙向免疫擴散實驗：是將抗原和抗體加在同意瓊脂板對應孔中，各自向對方擴散，在濃度比例恰當處形成沉淀線，觀察沉淀線的位置、形狀及對比關系，可對抗原或抗體進行定性分析。（測定抗體的效價：出現沉淀線最高的抗體稀釋度）17免疫電泳技術：是電泳分析與免疫沉淀實驗相結合的產物，是直流電場作用下的凝膠擴散實驗，是將抗原-抗體反應的高特異性與電泳技術的高分辨率及快速、微量等特性相結合的一種免疫化學技術。1加快沉淀反應速度2抗原抗體擴散方向固定集中，提高靈敏度3可以分離不同蛋白后再與抗體反應。 對流免疫電泳：將雙向免疫擴散和電泳相結合在直流電場中定向加速的免疫擴散技術?？乖入婞c較低，帶負電向正極移動，抗體等電點偏高，向負極移動。（濃度最適比出形成沉淀線）對流只是對部分抗體而言18免疫電泳：亦稱免疫區(qū)帶電泳-免疫雙擴散實驗，是區(qū)帶電泳與雙向免