多克隆抗體的制備及抗體效價測定PPT課件

1、多克隆抗體的制備及抗體效價測定 目的要求目的要求 掌握多克隆抗體制備的基本原理。掌握多克隆抗體制備的基本原理。 掌握多克隆抗體制備的操作步驟。掌握多克隆抗體制備的操作步驟。 掌握肥達反應的實驗原理、操作流程和結果判掌握肥達反應的實驗原理、操作流程和結果判斷。斷。 熟悉熟悉ELISA的實驗原理、操作流程和結果判斷。的實驗原理、操作流程和結果判斷。 了解細菌抗原和病毒抗原免疫程序上的異同。了解細菌抗原和病毒抗原免疫程序上的異同。 了解免疫動物的選擇原則。了解免疫動物的選擇原則。原理1、克隆、克隆(clone)： 是指無性繁殖細胞系，是由單一是指無性繁殖細胞系，是由單一個祖先細胞分裂繁殖而形成的一簇

2、細胞純系。在個祖先細胞分裂繁殖而形成的一簇細胞純系。在這個家族的所有成員中，如無突變發(fā)生，其基因這個家族的所有成員中，如無突變發(fā)生，其基因是完全相同的。是完全相同的。2、多克隆抗體（、多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）：用）：用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，可刺一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，可刺激機體激機體多個多個B細胞克隆細胞克隆產生針對產生針對多種抗原表位多種抗原表位的的不同抗體。所獲得的免疫血清實際上是含有不同抗體。所獲得的免疫血清實際上是含有多種多種抗體的混合物，即多克隆抗體抗體的混合物，即多克隆抗體。 3、單克隆抗體（、單克隆抗體（mono

3、clonal antibodies, mAb）：由一個）：由一個識別一種抗原表位識別一種抗原表位的的B細細胞克隆產生的同源抗體。高度均一、特異胞克隆產生的同源抗體。高度均一、特異性強、效價高、少或無交叉反應性。性強、效價高、少或無交叉反應性。 抗體的制備技術經歷了三代抗體的制備技術經歷了三代： 第一代抗體是傳統(tǒng)的抗體制備方法即利用第一代抗體是傳統(tǒng)的抗體制備方法即利用抗原免疫動物后獲得抗體，稱為多克隆抗抗原免疫動物后獲得抗體，稱為多克隆抗體（體（polyclonal antibody）；）； 第二代抗體是通過雜交瘤技術制備出針對第二代抗體是通過雜交瘤技術制備出針對抗原中某一抗原決定簇的抗體稱為單

4、克隆抗原中某一抗原決定簇的抗體稱為單克隆抗體抗體(monoclonal antibody, McAb)； 第三代抗體是利用基因工程技術制備而來，第三代抗體是利用基因工程技術制備而來，稱為基因工程抗體稱為基因工程抗體(genetic engineering antibody)。Ab1Ab3Ab4單克隆抗體單克隆抗體抗原抗原Ab1抗血清抗血清Ab1Ab2Ab3Ab4Ab2Ab3Ab4普通抗血清（多克隆抗體）普通抗血清（多克隆抗體）脾脾B細細胞胞骨髓瘤小鼠骨髓瘤小鼠取腹水取腹水骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞HAT培養(yǎng)，培養(yǎng)，稀釋稀釋單單克克隆隆抗抗體體和和多多克克隆隆抗抗體體產產生生區(qū)區(qū)別別示示意意圖圖雜交瘤

5、細胞雜交瘤細胞+ PEG, 融合融合Ab2 多克隆抗體制備流程多克隆抗體制備流程 （一）免疫原的制備（一）免疫原的制備 （二）免疫動物（二）免疫動物 （三）免疫血清的收集（三）免疫血清的收集 （四）免疫血清的鑒定（四）免疫血清的鑒定 （五）免疫血清的保存（五）免疫血清的保存操作步驟操作步驟一、免疫原的制備一、免疫原的制備免疫原免疫原（immunogen）指能刺激機體免疫）指能刺激機體免疫系統(tǒng)產生特異性抗體或致敏淋巴細胞的抗系統(tǒng)產生特異性抗體或致敏淋巴細胞的抗原最重要的性質是原最重要的性質是免疫原性免疫原性（immunogenicity）免疫原免疫原天然抗原、人工天然抗原、人工 合成抗原；合成抗

6、原； 蛋白質、多糖、脂類、核酸抗原；蛋白質、多糖、脂類、核酸抗原； （一）細胞性抗原制備：（一）細胞性抗原制備： 綿羊紅細胞（綿羊紅細胞（SRBC）- 溶血素；溶血素； 細菌細菌- 抗菌抗體（動物免疫血清）抗菌抗體（動物免疫血清）（二）可溶性抗原制備：（二）可溶性抗原制備： 指蛋白質、多糖和脂類等。指蛋白質、多糖和脂類等。1）細胞的破碎（物理法、化學法）細胞的破碎（物理法、化學法） 反復凍融法反復凍融法 超聲破碎法超聲破碎法 自溶法自溶法 酶處里法酶處里法 表面活性劑處理法表面活性劑處理法 2）提取與純化：）提取與純化：超速離心分離超速離心分離是一種根據(jù)分離物質的是一種根據(jù)分離物質的比重特點，

7、通過差速或梯度密度離心，比重特點，通過差速或梯度密度離心，將分子大小不同的抗原顆粒分開的方法，將分子大小不同的抗原顆粒分開的方法，只適宜少數(shù)大分子物質的分離。只適宜少數(shù)大分子物質的分離。選擇性沉淀選擇性沉淀選擇某抗原理化特性，采用相應沉選擇某抗原理化特性，采用相應沉淀劑或溶液環(huán)境。淀劑或溶液環(huán)境。 核酸去除核酸去除 鹽析沉淀法鹽析沉淀法 有機溶劑沉淀法有機溶劑沉淀法 高分子聚合物沉淀法高分子聚合物沉淀法例：例： 50%50%飽和硫酸銨鹽溶液可沉淀析出學清球蛋；飽和硫酸銨鹽溶液可沉淀析出學清球蛋； 8%8%12%PEG600012%PEG6000可沉淀可沉淀IgGIgG。 鹽析法沉淀抗原的機理鹽

8、析法沉淀抗原的機理 超濾法超濾法利用孔徑大小不同的特制薄膜對利用孔徑大小不同的特制薄膜對不同分子大小的抗原物質進行濾篩。不同分子大小的抗原物質進行濾篩。層析法層析法 凝膠過濾凝膠過濾 離子交換離子交換 親和層析親和層析電泳電泳（略）（略） 凝膠過濾層析凝膠過濾層析( 分子篩分子篩)的作用機理的作用機理 親和層析的作用機理親和層析的作用機理3）鑒定：）鑒定： 鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、 純度以及免疫學活性。純度以及免疫學活性。 蛋白的含量蛋白的含量定氮（紫外光定氮（紫外光280nm等）等） 分子的質量分子的質量電泳、質譜電泳、質譜 蛋白的純度蛋白的純

9、度電泳等電泳等 免疫學活性免疫學活性免疫雙擴散、免疫印跡免疫雙擴散、免疫印跡 抗原性質分析結果抗原性質分析結果（三）半抗原性免疫原的制備（三）半抗原性免疫原的制備1.載體選擇載體選擇 常用載體：蛋白質、多肽聚合物、大分子聚合物。常用載體：蛋白質、多肽聚合物、大分子聚合物。（1）蛋白質類：常用的有人血清白蛋白、牛血清白蛋）蛋白質類：常用的有人血清白蛋白、牛血清白蛋白、血蛋白等，其中以牛血清白蛋白最為常用。白、血蛋白等，其中以牛血清白蛋白最為常用。（2）多肽類聚合物：是由人工合成的多肽聚合物，也）多肽類聚合物：是由人工合成的多肽聚合物，也是一類良好的載體，常用的有多聚賴氨酸。是一類良好的載體，常用

10、的有多聚賴氨酸。（3）大分子聚合物：聚乙烯吡咯烷酮（）大分子聚合物：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、羧甲）、羧甲基纖維素基纖維素(CMC)等皆可與半抗原結合，加入福氏完等皆可與半抗原結合，加入福氏完全佐劑可誘導動物產生良好的抗體。全佐劑可誘導動物產生良好的抗體。2.連接方法連接方法 半抗原與載體的連接有物理法和化學法。半抗原與載體的連接有物理法和化學法。 物理法物理法 是用物理吸附法將載體與半抗原連是用物理吸附法將載體與半抗原連接，其原理是通過電荷和微孔來吸半抗原，接，其原理是通過電荷和微孔來吸半抗原，吸附載體主要有吸附載體主要有PVP和和CMC等；等； 化學法化學法 是利用某些功能基團把半抗原連接

11、是利用某些功能基團把半抗原連接到白質類或多肽類聚合物載體上。不同的半到白質類或多肽類聚合物載體上。不同的半抗原應選用不同的方法進行連接。抗原應選用不同的方法進行連接。 根據(jù)半抗原擁有的化學基團不同，連接方根據(jù)半抗原擁有的化學基團不同，連接方法主要有以下幾類：法主要有以下幾類：帶游離氨基或羧基以及二種基團皆有的半抗原：帶游離氨基或羧基以及二種基團皆有的半抗原：羧基可用混合酸酐法和碳二亞胺法與載體氨基羧基可用混合酸酐法和碳二亞胺法與載體氨基形成穩(wěn)定的肽鍵，帶氨基的半抗原則可與載體形成穩(wěn)定的肽鍵，帶氨基的半抗原則可與載體羧基縮合。羧基縮合。帶有羥基、酮基、醛基的半抗原：不能直接與帶有羥基、酮基、醛基

12、的半抗原：不能直接與載體連接，需要用化學方法如琥珀酸酐法、載體連接，需要用化學方法如琥珀酸酐法、O-（羧甲基）羥胺法等方法將之轉變?yōu)閹в恤然燃谆┝u胺法等方法將之轉變?yōu)閹в恤然陌肟乖苌锖蟛拍芘c載體連接。的半抗原衍生物后才能與載體連接。帶有酚基的半抗原，可用一氯醋酸鈉法或重氮帶有酚基的半抗原，可用一氯醋酸鈉法或重氮化的對氨基苯甲酸法，生成帶有羧基的半抗原化的對氨基苯甲酸法，生成帶有羧基的半抗原衍生物。衍生物。（四）免疫佐劑（四）免疫佐劑 某些物質與抗原一起或先于抗原注入某些物質與抗原一起或先于抗原注入機體，可機體，可增強機體對該抗原的特異性增強機體對該抗原的特異性免疫應答免疫應答或或改

13、變免疫應答類型改變免疫應答類型，此類，此類物質稱為免疫佐劑物質稱為免疫佐劑(immunoadjuvant)，簡稱佐劑。簡稱佐劑。 1. 佐劑的種類佐劑的種類 佐劑一般包括以下幾類：佐劑一般包括以下幾類：無機佐劑：無機佐劑： 如氫氧化鋁、明釩等如氫氧化鋁、明釩等生物性佐劑：生物性佐劑： 如結核分枝桿菌、卡介苗、小棒狀桿如結核分枝桿菌、卡介苗、小棒狀桿菌、百日咳桿菌、革蘭陰性桿菌內毒素、霍亂毒素菌、百日咳桿菌、革蘭陰性桿菌內毒素、霍亂毒素的的B亞單位、胞壁酰二肽和細胞因子等；亞單位、胞壁酰二肽和細胞因子等；人工合成佐劑：人工合成佐劑： 如雙鏈多聚肌苷酸：胞苷酸（如雙鏈多聚肌苷酸：胞苷酸（poly

14、I：C）、雙鏈多聚腺苷酸：尿苷酸（）、雙鏈多聚腺苷酸：尿苷酸（poly A：U）；）；油劑：如弗氏完全佐劑、花生油乳劑等；油劑：如弗氏完全佐劑、花生油乳劑等；納米佐劑納米佐劑 弗氏佐劑（弗氏佐劑（Freunds adjuvant）,分為分為弗氏不完全佐劑和完全佐劑兩種：弗氏不完全佐劑和完全佐劑兩種： 前者是由油劑（礦物油或花生油）和乳化前者是由油劑（礦物油或花生油）和乳化劑（羊毛脂或吐溫劑（羊毛脂或吐溫-80）按）按1：11：5比例比例混合而成；混合而成； 后者由弗氏不完全佐劑加卡介苗組成。在后者由弗氏不完全佐劑加卡介苗組成。在免疫動物時，先將弗氏佐劑與抗原等比混免疫動物時，先將弗氏佐劑與抗原

15、等比混勻，制成勻，制成“油包水油包水”乳化液。乳化液。 佐劑與抗原混合乳化的方法：佐劑與抗原混合乳化的方法： 研磨法研磨法 攪拌混合法攪拌混合法 2. 佐劑的免疫生物學作用佐劑的免疫生物學作用增強抗原免疫原性：使無或微弱免疫原性的增強抗原免疫原性：使無或微弱免疫原性的物質變成持久或強的免疫原；物質變成持久或強的免疫原；增強機體對抗原刺激的反應性，提高初次應增強機體對抗原刺激的反應性，提高初次應答和再次應答所產生的抗體滴度；答和再次應答所產生的抗體滴度；改變抗體類型，使產生抗體由改變抗體類型，使產生抗體由IgMG型轉變型轉變?yōu)闉镮gG型；型；引起或增強遲發(fā)性超敏反應。引起或增強遲發(fā)性超敏反應。3

16、. 佐劑的作用機制佐劑的作用機制 佐劑的作用機制歸納起來主要有如下幾種：佐劑的作用機制歸納起來主要有如下幾種： 可增強抗原的表面積和改變抗原活性基團構型，可增強抗原的表面積和改變抗原活性基團構型，從而增強抗原的免疫原性。從而增強抗原的免疫原性。 佐劑與抗原混合一起注入機體，可改變抗原的物佐劑與抗原混合一起注入機體，可改變抗原的物理性狀，形成抗原儲存庫，延長抗原在局部組織的理性狀，形成抗原儲存庫，延長抗原在局部組織的滯留時間，有利于抗原的緩慢釋放。滯留時間，有利于抗原的緩慢釋放。 增強吞噬細胞的吞噬作用（被佐劑吸附的抗原易增強吞噬細胞的吞噬作用（被佐劑吸附的抗原易被吞噬細胞吞噬），促進對抗原的處

17、理，刺激淋巴被吞噬細胞吞噬），促進對抗原的處理，刺激淋巴細胞增生，從而增強和擴大免疫應答的效應。細胞增生，從而增強和擴大免疫應答的效應。 二、動物免疫（一）免疫動物的選擇（一）免疫動物的選擇 選擇動物時應考慮以下因素：選擇動物時應考慮以下因素：抗原來源與動物種屬的關系。抗原的來源與免疫抗原來源與動物種屬的關系。抗原的來源與免疫動物種屬差異越遠，其免疫源性越強，免疫效果動物種屬差異越遠，其免疫源性越強，免疫效果越好，而同種系或親緣關系越近，免疫效果越差。越好，而同種系或親緣關系越近，免疫效果越差。動物個體的選擇。適齡、健康、體重符合要求的動物個體的選擇。適齡、健康、體重符合要求的正常動物（以雄性

18、為佳）；抗體需要量少時，選正常動物（以雄性為佳）；抗體需要量少時，選用家兔、豚鼠和雞等小動物；抗體需要量大時，用家兔、豚鼠和雞等小動物；抗體需要量大時，可選用綿羊、山羊、馬、驢等大動物?？蛇x用綿羊、山羊、馬、驢等大動物?？乖再|與動物種類抗原性質與動物種類（二）免疫方法（二）免疫方法 選定動物后，在免疫過程中應考選定動物后，在免疫過程中應考慮免疫劑量、免疫途徑、免疫次數(shù)、慮免疫劑量、免疫途徑、免疫次數(shù)、免疫間隔等因素。免疫間隔等因素。 (1) 免疫原的劑量：免疫原的接種劑免疫原的劑量：免疫原的接種劑量按免疫原性的強弱、動物的個體狀量按免疫原性的強弱、動物的個體狀態(tài)和免疫時間來確定。首次免疫時，

19、態(tài)和免疫時間來確定。首次免疫時，劑量不宜過大，以免產生免疫麻痹。劑量不宜過大，以免產生免疫麻痹。 (2) 免疫途徑與免疫間隔時間免疫途徑與免疫間隔時間 免疫途徑通常有皮內、皮下、肌肉、靜脈、免疫途徑通常有皮內、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、淋巴結等，視不同的免疫方案而異。腹腔、淋巴結等，視不同的免疫方案而異。對于不易獲取的寶貴抗原可采用淋巴結免對于不易獲取的寶貴抗原可采用淋巴結免疫法。疫法。 免疫間隔時間是影響抗體產生的重要因素，免疫間隔時間是影響抗體產生的重要因素，其中首次與第二次免疫的間隔時間尤為重其中首次與第二次免疫的間隔時間尤為重要，一般以要，一般以1020天為佳，二次后間隔時天為佳，二次后

20、間隔時間一般為間一般為710天，若間隔時間太長，則刺天，若間隔時間太長，則刺激減弱，抗體效價不高。激減弱，抗體效價不高。 常規(guī)制備痢疾致賀菌、傷寒桿菌抗血清的免疫方案 日期（天）16/711/1416/2121/2726/34途徑皮內靜脈靜脈靜脈靜脈靜脈抗原熱殺死菌熱殺死菌活菌活菌活菌活菌劑量（mL）1.00.50.20.51.02.0常規(guī)制備NDV、VSV抗血清的免疫方案日期（天）16/711/1416/2121/2726/34途徑皮內靜脈靜脈靜脈靜脈靜脈抗原弗氏完全佐劑 單純抗原單純抗原單純抗原單純抗原單純抗原劑量（mL）1.00.50.20.51.02.0三、動物采血三、動物采血采集免疫

21、血清前，要預先測試抗體效價測定，采集免疫血清前，要預先測試抗體效價測定，若效價達到要求，應在末次免疫后一周及若效價達到要求，應在末次免疫后一周及時采血，否則抗體效價會下降。時采血，否則抗體效價會下降。 (1) 頸動脈采血法頸動脈采血法 (2)心臟采血法心臟采血法 (3)靜脈采血法靜脈采血法 頸動脈分離圖頸動脈分離圖 四、免疫血清的鑒定四、免疫血清的鑒定 1. 效價的測定：顆粒性抗原可采用凝集試效價的測定：顆粒性抗原可采用凝集試驗，可溶性抗原常用雙向免疫擴散試驗、驗，可溶性抗原常用雙向免疫擴散試驗、ELISA等方法。等方法。 玻片凝集試驗 肥達試驗（微量法）：肥達試驗（微量法）：(Widals

22、test ) ELISA 肥達試驗（肥達試驗（Widal test）是用已知）是用已知的傷寒桿菌的傷寒桿菌O、H抗原和甲、乙型副傷寒抗原和甲、乙型副傷寒桿菌桿菌H抗原抗原與病人血清做定量凝集試驗，與病人血清做定量凝集試驗，以測定患者血清中有無相應抗體，根據(jù)抗以測定患者血清中有無相應抗體，根據(jù)抗體含量的多少以及增長情況，可幫助診斷體含量的多少以及增長情況，可幫助診斷傷寒及副傷寒。傷寒及副傷寒。 【原理【原理】 1抗原：傷寒桿菌抗原：傷寒桿菌“O”、“H”及甲、乙型副及甲、乙型副傷寒菌液。傷寒菌液。 2待檢血清（須經待檢血清（須經5630min滅活）。滅活）。 3生理鹽水、生理鹽水、24孔細胞反應

23、板、中號試管、孔細胞反應板、中號試管、吸管、水浴箱等。吸管、水浴箱等。【材料【材料】 1取小號試管取小號試管1支，加生理鹽水支，加生理鹽水3.8ml，用吸，用吸管吸取患者血清管吸取患者血清0.2ml加入其中混勻，即為加入其中混勻，即為1：20稀稀釋血清，總量為釋血清，總量為4ml。 2取取1塊塊24孔細胞培養(yǎng)板，每排第孔細胞培養(yǎng)板，每排第1孔分別標孔分別標上上“O”、“H”、“PA”、“PB”符號。符號。 3. 第第1排第排第2孔至第孔至第5孔各加孔各加0.4 mL生理鹽水。生理鹽水。每排第每排第6孔為對照孔，各加生理鹽水孔為對照孔，各加生理鹽水0.1mL。 【操作步驟【操作步驟】 4. 第第

24、1排第排第2孔至第孔至第5孔各加孔各加0.4 mL生理鹽水。每生理鹽水。每排第排第6孔為對照孔，各加生理鹽水孔為對照孔，各加生理鹽水0.1mL。 5. 每排第每排第1孔各加孔各加1：20的血清的血清0.1 mL。 6. 第第1排的第排的第2孔加孔加1：20的血清的血清0.4 mL，從第，從第2孔孔開始按倍比稀釋法稀釋血清，即第開始按倍比稀釋法稀釋血清，即第2孔吹吸混勻后取孔吹吸混勻后取0.4 mL至第至第3孔，再從第孔，再從第2孔依次取孔依次取0.1mL至第至第2、3、4排的第排的第2孔，第孔，第3孔混勻后取孔混勻后取0.4以此類推直至第以此類推直至第5孔孔孔，從第孔，從第5孔棄去孔棄去0.4

25、mL。 這樣各排第這樣各排第1孔至第孔至第5孔的血清稀釋度為孔的血清稀釋度為1：20、1：40、1：80、1：160、1：320。 6. 按按H、O、PA、PB標記符號，第標記符號，第1排排1-5孔孔加入加入“O”型傷寒桿菌實驗菌液，第型傷寒桿菌實驗菌液，第2排各孔加入排各孔加入“H”型傷寒桿菌實驗菌液，第型傷寒桿菌實驗菌液，第3排加入甲型副傷排加入甲型副傷寒桿菌實驗菌液，第寒桿菌實驗菌液，第4排加入乙型副傷寒桿菌實驗排加入乙型副傷寒桿菌實驗菌液，每孔均加入實驗菌液菌液，每孔均加入實驗菌液0.1mL。 7. 輕輕振搖反應板，使其混勻，置輕輕振搖反應板，使其混勻，置37恒溫恒溫箱箱23小時觀察結

26、果。小時觀察結果。 肥達反應稀釋法示意表肥達反應稀釋法示意表試驗管（每管試驗管（每管0.2ml） 對照管對照管 123456血清稀釋度血清稀釋度1:20 1:401:801:1601:320（NS 0.5ml） 1“O”抗原抗原 0.20.20.20.20.20.22“H”抗原抗原0.20.20.20.20.20.23PA抗原抗原0.20.20.20.20.20.24PB抗原抗原0.20.20.20.20.20.2血清最終稀釋度血清最終稀釋度 1:40 1:80 1:160 1:3201:640-【結果【結果】 各孔凝集程度的判斷以肉眼可見：孔內上清液完各孔凝集程度的判斷以肉眼可見：孔內上清液

27、完全清亮，細菌全部形成凝塊記為全清亮，細菌全部形成凝塊記為“+ + + +”；孔內；孔內上清液透明度達上清液透明度達75%，大部分細菌形成明顯可見的，大部分細菌形成明顯可見的凝集塊為凝集塊為“+ + +”；孔內上清液透明度達；孔內上清液透明度達50%，約，約50%細菌形成明顯可見的凝集塊為細菌形成明顯可見的凝集塊為“+ +”；孔內上；孔內上清液透明度只達清液透明度只達25%；僅有小部分細菌形成小凝塊；僅有小部分細菌形成小凝塊為為“+”，孔內液體均為混濁；無凝集塊，細菌沉于孔，孔內液體均為混濁；無凝集塊，細菌沉于孔底呈白色圓點狀，邊緣清晰為底呈白色圓點狀，邊緣清晰為“”。（圖示）。（圖示）肥達反

28、應結果圖肥達反應結果圖 血清的凝集效價血清的凝集效價（滴度）：是指能與一定量（滴度）：是指能與一定量的抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集（即的抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集（即“+”凝集）凝集）的血清最高稀釋倍數(shù)。血清效價代表血清中抗體的血清最高稀釋倍數(shù)。血清效價代表血清中抗體的含量，血清效價越高，所含抗體的量愈多。一的含量，血清效價越高，所含抗體的量愈多。一般認為，傷寒沙門菌般認為，傷寒沙門菌“O”抗體凝集效價在抗體凝集效價在1：80以上，以上，“H”抗體在抗體在1：160以上，甲、乙型副傷以上，甲、乙型副傷寒沙門菌凝集效價在寒沙門菌凝集效價在1：80以上才有診斷價值。以上才有診斷價值。操作步驟ELISA2. 特異