牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制與滅菌

1、1 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制與滅菌 方月琴2一、復(fù)習(xí)二、實(shí)驗(yàn)：配培養(yǎng)基與滅菌三、斜面的劃線培養(yǎng)四、倒平板的操作五、平板劃線培養(yǎng)3一、復(fù)習(xí)一、復(fù)習(xí)45微生物培養(yǎng)與檢驗(yàn)主要課程內(nèi)容微生物培養(yǎng)與檢驗(yàn)主要課程內(nèi)容1.微生物營養(yǎng)需求2.微生物形態(tài)3.微生物純化、分離4.微生物培養(yǎng)、篩選與保存5.微生物檢驗(yàn)LOGO6課程內(nèi)容課程內(nèi)容微生物吃什么？微生物吃什么？1微生物長的什么樣？微生物長的什么樣？2如何得到微生物？如何得到微生物？3如何保存微生物？如何保存微生物？4我很愛吃熟食（豬頭肉），但是聽我很愛吃熟食（豬頭肉），但是聽說熟食微生物超標(biāo)，這是怎么檢測說熟食微生物超標(biāo)，這是怎么檢測的？的？57規(guī)則：規(guī)則

2、：1.上課不遲到：第1、5節(jié)課，提前10min到教室 2.下課前，自己的實(shí)驗(yàn)物品歸類，該清洗的清洗，該收拾的收拾 3.值日生負(fù)責(zé)擦黑板、掃地、擦桌；為大家做好服務(wù)工作 4.上課時(shí)間請(qǐng)不要玩手機(jī) 8安全操作與標(biāo)準(zhǔn)操作安全操作與標(biāo)準(zhǔn)操作9（一）微生物培養(yǎng)基的制備（二）微生物的消毒滅菌（三）認(rèn)識(shí)微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備微生物吃什么？微生物吃什么？110（一）微生物培養(yǎng)基的制備（一）微生物培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基：是人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長發(fā)育的水分、C，N，生長因子，P，S，Na，Ca等適宜的酸堿度、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位，合適的滲透壓11根據(jù)物理

3、狀態(tài)劃分根據(jù)物理狀態(tài)劃分培養(yǎng)基分 液體、半固體和固體 3種液體液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細(xì)菌細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)；半固體半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細(xì)菌固體固體培養(yǎng)基含15%20%瓊脂，主要用于分離細(xì)分離細(xì)菌菌12培養(yǎng)基的配制原則培養(yǎng)基的配制原則1.選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)實(shí)驗(yàn)室中常用：132.營養(yǎng)物質(zhì)的濃度及配比合適3.控制pH條件 細(xì)菌和放線菌：pH7.07.5 酵母菌和霉菌：pH4.56.04.控制氧化還原電位5.原料來源的選擇盡量利用廉價(jià)且易獲得的原料作為培養(yǎng)基成分146.滅菌處理避免雜菌污染，要對(duì)所用器械及工作場所進(jìn)行消毒與滅菌培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基0

4、.1MPa，121.3 1530min15（二）微生物的消毒滅菌（二）微生物的消毒滅菌16消毒滅菌方法：消毒滅菌方法：（一）干熱滅菌法（二）濕熱滅菌法（三）過濾除菌（四）紫外線殺菌（五）藥物殺菌17（一）干熱滅菌法（一）干熱滅菌法1.火焰滅菌法2.熱空氣滅菌法14016023h18（二）濕熱滅菌法（二）濕熱滅菌法1.高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法121 2030min2.常壓蒸汽滅菌法3.常壓間歇滅菌法19（三）過濾除菌（三）過濾除菌薄膜濾菌器0.22m和0.45m20（四）紫外線殺菌（四）紫外線殺菌240280nm波段紫外線殺菌力較強(qiáng)多以253.7nm作為紫外線殺菌波長特點(diǎn)：穿透力弱穿透力弱超

5、凈工作臺(tái)：超凈工作臺(tái)：21（五）藥物殺菌（五）藥物殺菌1.酒精2.新潔爾滅22（三）認(rèn)識(shí)微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備（三）認(rèn)識(shí)微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備1.培養(yǎng)平板232.試管與棉塞243.接種環(huán)，涂布棒254.高溫高壓蒸汽滅菌鍋26p42 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌請(qǐng)回顧滅菌鍋的操作方法271）用之前檢查水位及水質(zhì)。若水質(zhì)不好，需換水2）放置滅菌物品，勿過滿；瓶子滅菌，瓶蓋擰松3）蓋上鍋蓋，相對(duì)的兩個(gè)螺帽一起擰4）啟動(dòng)加熱，同時(shí)打開放氣閥；檢查安全閥是否關(guān)上。調(diào)整溫度時(shí)間121 15min。5）待排氣閥冒出大量熱氣并持續(xù)約25min后排盡冷空氣后，再將其關(guān)閉；6）滅菌結(jié)束，待壓力下降至0，可打開放氣

6、閥，之后開蓋。注意防止?fàn)C傷7）固體物品可進(jìn)行干燥；液體物品冷卻后擰緊。盡量避免二次污染。285.鼓風(fēng)干燥箱296.超凈工作臺(tái)30每次使用前，先用75%酒精（或新潔爾滅）擦洗臺(tái)面，并提前用紫外線滅菌燈照射1530min處理凈化工作區(qū)內(nèi)積存的微生物；關(guān)閉滅菌燈后應(yīng)啟動(dòng)風(fēng)機(jī)使之運(yùn)轉(zhuǎn)2min后再進(jìn)行培養(yǎng)操作；工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品，以保持潔凈氣流流型不受干擾；使用完畢應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)面上的物品并用酒精擦拭臺(tái)面使之始終保持潔凈。317.7.微量移液器的使用微量移液器的使用32今天的工作：今天的工作：1.固體物品的滅菌固體物品的滅菌2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌3.學(xué)習(xí)倒平板學(xué)習(xí)倒平板

7、4.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作5.超凈臺(tái)的準(zhǔn)備超凈臺(tái)的準(zhǔn)備6.劃線接種劃線接種7.滅菌效果檢查滅菌效果檢查33開始實(shí)驗(yàn)開始實(shí)驗(yàn)1.固體物品：固體物品：1）平皿（6只/組）2）試管與棉塞/塑料封口（6只/組）的包扎3）滅菌藍(lán)色、黃色和白色槍頭將以上物品放入滅菌鍋中進(jìn)行滅菌121 20min342.培養(yǎng)基：培養(yǎng)基分 液體、半固體和固體 3種液體液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細(xì)菌細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)；半固體半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細(xì)菌固體固體培養(yǎng)基含15%20%瓊脂，主要用于分離細(xì)分離細(xì)菌菌35牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaC

8、l 5g 瓊脂 15-20gpH 7.4-7.6，加水至1 000mL；若需分裝，需先融化，搖若需分裝，需先融化，搖勻后分勻后分于121高壓滅菌1520min備用用途：普通細(xì)菌常用的培養(yǎng)基（1）固體培養(yǎng)基配置36請(qǐng)大家配制：請(qǐng)大家配制：請(qǐng)大家查看“營養(yǎng)瓊脂”的成分與配制說明，每組配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基150mL于錐形瓶中請(qǐng)大家先寫出1L的配方，然后再寫出150mL的配方37配制完畢，將配制好的培養(yǎng)基裝入錐形瓶內(nèi)，瓶口塞上棉塞，用牛皮紙/報(bào)紙包扎瓶口，標(biāo)注好組別，進(jìn)行高溫高壓蒸汽滅菌38（2）液體培養(yǎng)基）液體培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基中不含瓊脂牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液 牛肉膏 3g 蛋白

9、胨 10g NaCl 5gpH 7.4-7.6，加水至1 000mL于121高壓滅菌1520min備用用途：普通細(xì)菌常用的培養(yǎng)基39請(qǐng)大家查詢LB培養(yǎng)基配方每組配置LB液體培養(yǎng)基50mL于錐形瓶中，包扎好瓶口（紗布+牛皮紙/報(bào)紙）后滅菌請(qǐng)大家先寫出1L的配方，然后再寫出50mL的配方401.固體物品的滅菌固體物品的滅菌 2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌 3.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作4.學(xué)習(xí)倒平板學(xué)習(xí)倒平板5.超凈臺(tái)的準(zhǔn)備超凈臺(tái)的準(zhǔn)備6.劃線接種劃線接種7.滅菌效果檢查滅菌效果檢查413.如何倒平板如何倒平板（1）超凈工作臺(tái)的準(zhǔn)備）超凈工作臺(tái)的準(zhǔn)備將超凈工作臺(tái)臺(tái)面用酒精棉

10、球擦干凈；關(guān)上門后，紫外燈打開，滅菌15-30min滅菌結(jié)束，打開風(fēng)機(jī)422.加熱融化培養(yǎng)基加熱融化培養(yǎng)基（若為剛滅菌結(jié)束未凝固的培養(yǎng)基，則略）將培養(yǎng)基放入微波爐內(nèi)加熱融化，注意觀察，不要加熱時(shí)間過長或溫度過高，以免液體濺出。434.倒平板倒平板超凈工作臺(tái)滅菌完畢，關(guān)紫外燈，打開風(fēng)機(jī)；超凈工作臺(tái)門不能開太高，約約20cm即可即可；用新潔爾滅棉球擦拭工作臺(tái)和手；將酒精燈瓶外擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺(tái)；將已融化的培養(yǎng)基瓶身擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺(tái)；待培養(yǎng)基冷卻至50C左右（不燙手為原則，但是不可冷卻過度不可冷卻過度），倒平板。44平板要求：平板平整，無凸起；平板無“掛壁”；培養(yǎng)基布滿整個(gè)平皿倒平板操作視頻4

11、5平板倒制結(jié)束，靜置，待凝固使用464.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作取無菌試管，倒入1/3高度的培養(yǎng)基，塞上蓋子，斜靠，使得斜面長度34cm，待凝固后使用47請(qǐng)大家先制備4個(gè)試管的斜面培養(yǎng)基，然后將剩余培養(yǎng)基用于制備平板481.固體物品的滅菌固體物品的滅菌 2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌 3.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作 4.學(xué)習(xí)倒平板學(xué)習(xí)倒平板 5.超凈臺(tái)的準(zhǔn)備超凈臺(tái)的準(zhǔn)備 6.滅菌效果檢查滅菌效果檢查7.劃線接種劃線接種496.滅菌效果檢查50生化培養(yǎng)箱生化培養(yǎng)箱為微生物培養(yǎng)提供恒溫設(shè)備（固體培養(yǎng)基）517.平板劃線法：平板劃線法：取一接種環(huán)細(xì)菌，左手持平皿將蓋口微開，用沾有細(xì)菌的接種環(huán)在瓊脂平板上劃直線；接種環(huán)火焰滅菌，待冷卻，再用接種環(huán)在頂端邊緣劃線處沾取標(biāo)本繼續(xù)劃線，如此劃45次，劃畢加蓋。并用蠟筆在皿底玻璃上寫明接種菌名。于37培養(yǎng)1824h觀察，注意平皿表面生長各菌落的大小、形態(tài)、邊沿、表面結(jié)構(gòu)、透明度和顏色等特征。52四區(qū)劃線53 圓形、突起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、有光澤，不透明菌落，直徑12mm54請(qǐng)大家劃線接種大腸桿菌、金黃色