林木病害普查主要技術(shù)流程與技術(shù)

1、林木病原生物普查山東農(nóng)業(yè)大學 劉振宇第一部分 林木病原生物普查的主要技術(shù)流程第二部分 林木病原生物普查的重要技術(shù)第三部分 主要林木病原生物及其所致病害介紹第一部分 林木病原生物普查的主要技術(shù)流程一、 普查內(nèi)容、目標和任務(wù)（一）普查的對象與范圍調(diào)查各轄區(qū)范圍內(nèi)森林、濕地和荒漠三大生態(tài)系統(tǒng)的防護林、用材林、經(jīng)濟林、薪炭林、特種用途林，觀賞樹木(名木古樹)和四旁綠化樹木以及花卉、苗木、種實、果品、木材及其制品的生產(chǎn)和經(jīng)營場所等所存在的由病原生物侵染引起的植物病害，重點放在可能造成危害的種類和已經(jīng)造成危害的種類。由不適宜環(huán)境引起的非侵染性病害不在調(diào)查范疇。山東省內(nèi)國家級和省級自然保護區(qū)、重點生態(tài)區(qū)、沿

2、海地區(qū),以及國內(nèi)外引種數(shù)量較大的地區(qū)為重點調(diào)查區(qū)域。（二）普查內(nèi)容每種普查對象包括以下內(nèi)容：（1）林業(yè)有害生物種類（包括亞種和株系）（2）寄主植物：指有害生物危害的植物種類（含轉(zhuǎn)主寄主）。（3）危害部位：指寄主植物的干部、枝梢部、葉部、根部、種實等。（4）分布范圍和發(fā)生范圍：分布范圍指某種林業(yè)有害生物的分布區(qū)域。發(fā)生范圍指某種林業(yè)有害生物的發(fā)生危害區(qū)域。（5）發(fā)生面積和成災(zāi)面積：發(fā)生面積指林業(yè)有害生物達到輕度及以上統(tǒng)計標準的面積。（6）傳入地和發(fā)現(xiàn)時間：對于14種全國林業(yè)檢疫性有害生物以及2003年以來發(fā)現(xiàn)的從國（境）外或省級行政區(qū)外傳入山東省的林業(yè)有害生物，調(diào)查其傳入地、發(fā)現(xiàn)時間、傳入途徑，

3、以及對當?shù)亟?jīng)濟、生態(tài)、社會影響等。（三）普查的目標任務(wù)掌握林木病害的種類、分布、危害情況，獲得標本和病害影像資料，提交相關(guān)報告。1. 市、縣級任務(wù)（1）完成并提交本級林業(yè)有害生物普查報告。包括工作總結(jié)和技術(shù)報告。（2） 建立和充實各級林業(yè)有害生物標本室（包括影像資料）。所有的林業(yè)有害生物標本和影像資料，每種一套上交至市站，匯總上交至省站。（3）完成并提交風險評估報告。（4）完成并提交本級行政區(qū)重要林業(yè)有害生物分布圖。（5）完成并提交匯總表。包括：山東?。ㄊ?、縣）林業(yè)有害生物普查匯總表，山東?。ㄊ?、縣）種實、果品、花卉、木材及其制品有害生物普查匯總表，山東?。ㄊ小⒖h）國（境）外或省級行政區(qū)外傳入

4、的林業(yè)有害生物普查匯總表，山東?。ㄊ?、縣）國（境）外或省級行政區(qū)外傳入的種實、果品、花卉、木材及其制品有害生物普查匯總表。調(diào)查原始數(shù)據(jù)圖表要妥善保存。調(diào)查原始數(shù)據(jù)圖表原始件送交省站保存，復(fù)印件縣市級單位保存?？h級匯總表、重要林業(yè)有害生物分布圖、工作總結(jié)和技術(shù)報告報市站，市站上報省站。2. 省級任務(wù)（1）完成山東省林業(yè)有害生物普查報告。（2）豐富山東省林業(yè)有害生物數(shù)據(jù)庫（包括統(tǒng)計和影像數(shù)據(jù)）。（3）充實山東省省級林業(yè)有害生物標本室。（4）完善重要林業(yè)有害生物種類風險評估。（5）完成山東省重要林業(yè)有害生物分布圖。（6）編制山東省林業(yè)有害生物普查成果匯編。（7）編制山東省主要林木病害圖冊和山東省主要

5、林業(yè)害蟲圖冊。二、 普查的工作流程資料收集工作方案形成踏查標準地調(diào)查抽樣方法確定標準地設(shè)置照片采集標本采集調(diào)查表格填寫調(diào)查成果數(shù)據(jù)處理標本鑒定評估報告種類分布圖標本照片調(diào)查報告各類報表潛在種類預(yù)測當?shù)貧v史資料山東省林業(yè)病害普查程序示意圖調(diào)查對象初步確定調(diào)查內(nèi)容與方法確定圖上標點調(diào)查表格準備調(diào)查工具準備照片采集、標本采集調(diào)查表格填寫普查的工作流程細解：林木病原生物調(diào)查分為外業(yè)調(diào)查和內(nèi)業(yè)整理兩部分。(一) 總體工作方案形成(二) 單次踏查工作方案形成1. 本底資料搜集：根據(jù)歷史文字記載、及近期調(diào)查情況，對調(diào)查地發(fā)生林木病害種類、發(fā)病程度、分布情況進行初步摸底。2. 調(diào)查對象與目標設(shè)計：根據(jù)本底資料

6、，對照附件1、附件6、附件7，明確次踏查的主體內(nèi)容，包括：調(diào)查重點病害對象的大致種類、及寄主的種類，以及所涉及到的重點對象的分布、危害等需要調(diào)查的重點內(nèi)容。3. 踏查路線設(shè)計：根據(jù)調(diào)查內(nèi)容，結(jié)合調(diào)查地實際和調(diào)查工作量實際，確定本次調(diào)查路線，及踏查時間設(shè)計。(三) 踏查工具準備：1. 采集箱包、測繩、卷尺、胸徑尺等；采集袋、標本紙、標本夾、高枝剪、鋸、鏟等。2. 相機、錄像機3. 海拔儀、定位儀等(四) 踏查表格準備：1. 調(diào)查表格：見附表1、2、3、4、5、6。2. 標本采集記錄本和標簽等。(五) 踏查：1. 路線調(diào)查：即沿路調(diào)查，適時、適當深入。2. 為害狀發(fā)現(xiàn)：非正常林分特征發(fā)現(xiàn)，及非正常

7、林木特征發(fā)現(xiàn)。3. 癥狀觀察與病害診斷：見重點技術(shù)。4. 影像記錄：全面記錄病害發(fā)生狀況，包括：典型癥狀、危害特征、立地環(huán)境；發(fā)病不同部位的特征；整體林分危害特征，單株危害特征等；寄主種類特征的記錄；宏觀遠拍，近距離照相等。5. 標本采集：每種病害的標本采集10份以上。不能確定種類的，標本采集數(shù)量適當增加并保證標本的完整性。具體見重點技術(shù)。6. 采集記錄：嚴格、規(guī)范、標準化采集記錄，注意填寫標簽。具體見重點技術(shù)。7. 踏查點基本資料落實：經(jīng)緯度、海拔，林分情況，寄主生長特征等。8. 踏查記錄表填寫：將每條踏查路線發(fā)現(xiàn)的全部林業(yè)有害生物填入踏查記錄表（附表1）。9. 標準地設(shè)置與調(diào)查：如果根據(jù)病

8、害發(fā)生情況，分析認為應(yīng)該設(shè)立標準地，隨即建立標準地，編號，調(diào)查。10. 注重輕度受害植物病害種類的發(fā)現(xiàn)：根據(jù)危害程度界定標準，>0%的種類均需重視，不可忽視。細膩觀察，嚴謹思考。11. 除填寫踏查記錄表外，建議個人依據(jù)自己的情況，做出每個踏查點的調(diào)查記錄12. 切實注意安全。(六) 標準地調(diào)查：1. 標準地設(shè)置標準：踏查中發(fā)現(xiàn)本地區(qū)未記錄或未監(jiān)測的病害種類，及時設(shè)置標準地調(diào)查，并可結(jié)合后期進一步設(shè)計標準地開展調(diào)查。2. 標準地面積：人工林原則上累計面積不應(yīng)少于有害生物寄主面積的3；天然林不少于0.2。3. 調(diào)查內(nèi)容：詳細調(diào)查其發(fā)生面積、危害程度等。4. 葉部、枝梢、果實病害調(diào)查：每塊標準

9、地面積3畝左右，標準地內(nèi)寄主植物至少30株，每塊標準地隨機調(diào)查30株以上。以枝梢、葉片、果實為單位，隨機抽取一定數(shù)量的枝梢、葉片、果實，統(tǒng)計枝梢、葉片、果實的感病率。5. 干部、根部病害調(diào)查：每塊標準地面積3畝左右，標準地內(nèi)寄主植物至少30株，每塊標準地隨機調(diào)查30株以上。對于樹木死亡或生長不良而地上部分又沒有明顯癥狀的，應(yīng)挖開根部進行調(diào)查。在標準地上，通常以植株為單位進行調(diào)查，統(tǒng)計健康、感病和死亡的植株數(shù)量，計算感病率。6. 標準地調(diào)查記錄表填寫：見附表3.(七) 生產(chǎn)和經(jīng)營場所調(diào)查：對生產(chǎn)經(jīng)營場所，要單獨設(shè)計調(diào)查任務(wù)，進行林木病原生物調(diào)查。1. 木材有害生物調(diào)查對于木材及其制品的生產(chǎn)和經(jīng)營

10、場所，采用隨機抽樣法或機械抽樣法抽取樣品。重視檢疫性有害生物。調(diào)查結(jié)果填入附表5。2. 種實、果品、花卉有害生物調(diào)查對于種實、果品、花卉的生產(chǎn)和經(jīng)營場所（如種實庫、果品庫、花卉交易市場），采用隨機抽樣法或機械抽樣法抽取樣品。重視檢疫性有害生物。調(diào)查結(jié)果填入附表5。3. 苗圃（花圃）有害生物調(diào)查根據(jù)苗圃（花圃）面積種類設(shè)計取樣方法和取樣量，調(diào)查結(jié)果填入附表6。具有苗木發(fā)展優(yōu)勢的地區(qū)，可列為重點調(diào)查項目。(八) 室內(nèi)病害鑒定：1. 在野外病害調(diào)查診斷基礎(chǔ)上，室內(nèi)進一步嚴格落實病害種類鑒定。2. 查找文獻資料，對照進行病害種類鑒定。使用專業(yè)資料，和使用專業(yè)網(wǎng)站，如國家網(wǎng)絡(luò)森林醫(yī)院平臺（http: /

11、 / ）和山東省網(wǎng)絡(luò)森林醫(yī)院（http:/ /slyy/Web_Page/home.aspx）進行鑒定。3. 病原物檢查，坎實病害種類。見重要技術(shù)部分4. 未明確種類，及時與專家組溝通。病害主體技術(shù)負責：劉振宇，山東農(nóng)業(yè)大學，Email：cosmosliu；電話QQ號5. 可能的新病害種類，妥善保存標本，送交專家組鑒定。主體技術(shù)負責：劉振宇。6. 重點種類，及時上報省站與專家組。7. 進一步整理野外調(diào)查記錄，修改野外調(diào)查記錄的錯誤。(九) 標本整理：1. 采集后需要干制的標本及時晾曬，整

12、平；或者盡快浸漬保存。2. 準確鑒定。3. 標簽進一步整理：修訂、補充、完善野外調(diào)查的標本采集記錄本和標簽等，達到嚴格規(guī)范要求。具體見重點技術(shù)。4. 規(guī)范、標準編號：采用13位數(shù)編號法，嚴格規(guī)范標準編號。見技術(shù)方案，行政區(qū)代碼見附件“鄉(xiāng)鎮(zhèn)級行政區(qū)代碼”。5. 整理，保存。6. 準備3份，匯總后提交省站。(十) 影像資料整理：1. 每次調(diào)查結(jié)束，及時整理影像資料。2. 及時整理，照片初步命名，命名包含影像基本信息。3. 準確鑒定病害種類。4. 影像資料再整理，保留規(guī)范、完整的圖像資料。5. 影像資料規(guī)范命名、編號：命名格式為：“有害生物名稱(蟲害要求注明蟲態(tài))-寄主植物-采集省縣鄉(xiāng)-年月日-拍攝

13、人-123”。6. 建立文件夾備存。匯總后提交省站。(十一) 縣市級數(shù)據(jù)整理：1. 調(diào)查記錄表補充、勘誤。2. 縣級調(diào)查記錄表數(shù)據(jù)匯總。相關(guān)有害生物名稱、學名嚴格按照附件1規(guī)范填寫。3. 縣級填寫匯總表，見附表11、12、13、14。4. 重點病害風險評估：根據(jù)調(diào)查基本數(shù)據(jù)，結(jié)合風險分析指標體系參見附件5，進行風險評估報告撰寫。5. 提交市級森保站。(十二) 市級數(shù)據(jù)整理：1. 市級森保站綜合縣級森保站提交數(shù)據(jù)表格，并進一步核實、規(guī)范，填報相關(guān)匯總表，見附表15、16、17、18。2. 市級森保站綜合縣級森保站風險評估報告，凝練提升，進行風險評估報告撰寫。第二部分 林木病原生物普查的重要技術(shù)第

14、一節(jié) 植物病害的診斷與鑒定技術(shù)一、診斷與鑒定的意義根據(jù)自然發(fā)病情況及癥狀特征，判斷病害種類，并進一步確定其病原種類，即為診斷鑒定。診斷是從癥狀等表型特征來判斷其病因，確定病害種類。鑒定則是將病原物的種類和病害種類同已知種類比較異同，確定其科學名稱或分類上的地位。植物病害診斷與鑒定，是保證本次林木病原生物普查工作科學性、正確性和準確性的基礎(chǔ)和核心。堅決摒棄診斷不當或失誤(誤診)。采取調(diào)查單元自我診斷，結(jié)合專家組診斷鑒定，保障林木病害診斷和林木病原生物鑒定的準確性。二、診斷的程序?qū)Σ≈参镞M行診斷的程序，應(yīng)該是從癥狀入手，全面檢查，仔細分析，下結(jié)論要留有余地。首先是仔細觀察病植物的所有癥狀，尋找對診

15、斷有關(guān)鍵性作用的癥狀特點，如有無病征?是否大面積同時發(fā)生?等等。其次是仔細分析，包括詢問和查對資料在內(nèi)，要掌握盡量多的病例特點，結(jié)合鏡檢、剖檢等全面檢查。因此，診斷的程序一般包括 (1)癥狀的識別與描述；(2)調(diào)查詢問病史與有關(guān)檔案；(3)采樣檢查(鏡儉與剖檢等)；(4)專項檢測；(5)逐步排除法得出適當結(jié)論。三、柯赫氏法則(Kochs Rule) ：柯赫氏法則又稱柯赫氏假設(shè)(Kochs postulates)，通常是用來確定侵染性病害病原物的操作程序。如發(fā)現(xiàn)一種不熟悉的或新的病害時，就應(yīng)采取柯赫氏法則的四步來完成診斷與鑒定。該部分工作由專家組主體執(zhí)行，在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)疑似新病害，及時上報，由專家

16、組執(zhí)行該工作，調(diào)查單元輔助執(zhí)行?？潞帐戏▌t常用來診斷和鑒定侵染性病害，共4條:（1）在病植物上常伴隨有一種病原生物存在；（2）該微生物可在離體的或人工培養(yǎng)基上分離純化而得到純培養(yǎng)；（3）將純培養(yǎng)接種到相同品種的健株上，表現(xiàn)出相同癥狀的病害；（4）從接種發(fā)病的植物上再分離到其純培養(yǎng)，性狀與原來的記錄相同。如果進行了上述四步鑒定工作得到確實的證據(jù)，就可以確認該微生物即為其病原物。四、植物病害的診斷要點（一）區(qū)分侵染性病害和非侵染性病害：植物病害的診斷，首先要區(qū)分是屬于侵染性病害還是非侵染性病害。許多植物病害的癥狀有很明顯的特點，一個有經(jīng)驗或觀察仔細的植病工作者是不難區(qū)分。兩者關(guān)鍵區(qū)別點在于：侵染性

17、和傳染性特征的區(qū)別。侵染性病害： 病原生物侵染所致的病害特征是，病害有一個發(fā)生發(fā)展或傳染的過程；在特定的品種或環(huán)境條件下，病害輕重不；在病株的表面或內(nèi)部可以發(fā)現(xiàn)其病原生物體存在（病征），它們的癥狀也有一定的特征。大多數(shù)的真菌病害、細菌病害和線蟲病害以及所有的寄生植物，可以在病部表面看到病原物，少數(shù)要在組織內(nèi)部才能看到，多數(shù)線蟲病害侵害根部，要挖取根系仔細尋找。有些真菌和細菌病害，所有的病毒病害和原生動物的病害，在植物表面沒有病征，但癥狀特點仍然是明顯的。非侵染性病害：從病植物上看個到任何病征，也分離不到病原物。一般在田間是同時普遍發(fā)生的，沒有逐步傳染擴散的現(xiàn)象等，與地形、土壤、栽培、品種和氣候

18、等條件有關(guān)，是就地觀察、調(diào)查和分析，適當時候采取特定措施檢查鑒定。下列幾點可以幫助診斷其病因：1、病害突然大面積同時發(fā)生，發(fā)病時間短，只有幾天，大多是由于大氣污染、三廢污染或氣候因素如凍害、干熱風、日灼所致。2、病害只限于某一品種發(fā)生，多為生長不宜或有系統(tǒng)性的癥狀致的表現(xiàn)，多為遺傳性障礙所致。3、有明顯的枯斑、灼傷，且多集中在某一部位的葉或芽上，無既往病史，大多是由于使用農(nóng)藥或化肥不當所致。4、明顯的缺素癥狀，多見于老葉或頂部新葉。非侵染性病害約占植物病害總數(shù)的13，植病工作者應(yīng)該充分掌握對生理病害和非侵染性病害的診斷技術(shù)。只有分清病因以后，才能準確地提出防治對策，提高防治效果。（二）真菌病害

19、的診斷和鑒定 真菌病害的鑒定主要是根據(jù)癥狀特征和病原真菌的形態(tài)特征。不同的真菌和其他病原物可引起相似的癥狀，因此應(yīng)以病原真菌的鑒定為依據(jù)。 1、癥狀觀察 觀察癥狀時，先注意病害對全株的影響（如萎凋、萎縮、畸形和生長習性的改變等），然后檢查病部。觀察斑點病害，要注意斑點的形狀、數(shù)目、大小、色澤、排列和有無輪紋等；觀察腐爛病，要注意腐爛組織的色、味、結(jié)構(gòu)（如軟腐、干腐）以及有無蟲傷等。放大鏡和解剖鏡在檢查病癥時很有用，注意有無病癥，即真菌產(chǎn)生孢子和子實體等。大多數(shù)真菌病害在病部產(chǎn)生病征，或稍加保濕培養(yǎng)即可慶出子實體來。特別值得提出的是，鑒定時常常會遇到許多非侵染性病害

20、，它們的癥狀有的與病毒病、線蟲病或有些真菌病害很相似，甚至在上面還能檢查到真菌，當然，這些真菌一般是后來在上面生長的腐生性真菌。要區(qū)分這些子實體是真正病原真菌的子實體，還是次生或腐生真菌的子實體，因為在病斑部、尤其是老病斑或壞死部分常有腐生真菌和細菌污染，并充滿表面。較為可靠的方法是從新鮮病組織的邊緣作鏡檢或分離，選擇合適的培養(yǎng)基是必要的，一些特殊性診斷技術(shù)也可以選用。按柯赫氏法則進行鑒定，尤其是接種后看是否發(fā)生同樣病害是最基本的，也是最可靠的一項。2、病原菌鑒定 癥狀對鑒定不是絕對可靠，不同的病原物可以產(chǎn)生相似的癥狀，而一種病害的癥狀可能因寄主和環(huán)境條件而變化，因此，標本的顯微鏡檢

21、查非常重要。真菌病害標本或培養(yǎng)的真菌，應(yīng)因材料的不同而采取不同的方法檢視。各調(diào)查單元在有條件的情況先，建議每種病害進行顯微病原檢查。以下介紹的方法簡單易行，一架顯微鏡即可執(zhí)行。2.1 菌絲體和子實體的挑取檢視標本或培養(yǎng)基上的菌絲體或子實體，一般是直接用針挑取少許，放在加有一滴浮載劑的載玻片上，加蓋玻片在顯微鏡下檢視。2.2葉面真菌的粘貼檢視葉面真菌的粘貼檢視可用透明膠、醋酸纖維素、火棉膠或其他粘貼劑等。目的是為了檢查葉片表面的真菌如白粉菌和其他霉菌等。2.3組織整體透明檢視組織透明后的整體檢查，不但可以看清表面有病菌，還可以觀察組織內(nèi)部的病菌，透明的方法很多，最常用的是水合氯醛。水合氯醛透明：

22、為了觀察病葉表面和內(nèi)部的病菌，可將小塊葉片在等量的酒精（95%）和冰醋酸的混合液中固定24h，然后浸泡在飽和的水合氯醛水溶液中，待組織透明后取出用水洗凈，經(jīng)稀苯胺藍的水溶液染色，用甘油浮載檢視。 2.4真菌的玻片培養(yǎng)檢視瓊膠培養(yǎng)基表面的真菌，直接挑取檢視往往會破壞真菌的結(jié)構(gòu)，故玻片培養(yǎng)是很好的檢視方法。 2.5瓊膠培養(yǎng)基中真菌的檢視瓊膠培養(yǎng)基表面下的真菌機構(gòu)，可以從平板上切取小塊帶菌的瓊膠培養(yǎng)基、放在載玻片上，加蓋玻片擠壓后檢視。 2.6真菌細胞核和染色體的觀察真菌細胞核和染色體的觀察對了解真菌致病性和變異是非常重要的，有時需要對真菌染色體的變化或細胞核進行觀察。

23、細胞核染色方法很多，通常使用蘇木精染色或4,6Diamido-2-phenylindol(DAPI)熒光染料染色。 2.7組織浸離檢視組織浸離就是將根、莖、樹皮等組織用藥處理，除去中膠層，是細胞分離，以觀察單個細胞的形態(tài)。 2.8徒手切片檢視 徒手切片很有用，不需要特殊設(shè)備，操作方便，是日常用的最多的真菌檢視方法。（三）細菌病害的診斷和鑒定 大多數(shù)細菌病害的癥狀有一定持點，初期有水漬狀或油漬狀邊緣，半透明，病斑上有菌膿外溢，斑點、腐爛、萎蔫、腫瘤大多數(shù)是細菌病害的特征，部分真菌也引起萎蔫與腫瘤。切片鏡檢有無噴茵現(xiàn)象是最簡便易行又最可靠的診斷技術(shù)，要注意制

24、片方法與鏡檢要點。 1、癥狀觀察植物細菌病害表現(xiàn)各種類型的癥狀，不同屬的細菌侵染植物后引起的癥狀有所不同，如棒形桿菌屬細菌主要引起萎蔫，假單胞菌屬細菌主要引起葉斑葉葉枯（少數(shù)枝枯、萎蔫和軟腐），黃單胞菌屬細菌主要引起葉斑和葉枯，土壤桿菌屬細菌主要引起腫瘤，歐文氏菌屬細菌主要引起軟腐等，許多細菌性病害的病斑還帶有水漬狀，有時可以作為診斷的特征，植物病部有時還有菌膿排出，也可以作為植物細菌病害診斷特征。2、病原菌鑒定21顯微鏡觀察顯微鏡檢查對診斷是非常重要的，細菌侵染引起的病害受害部位的維管束或薄壁細胞組織中一般都有大量的細菌，用顯微鏡觀察組織有無細菌流出（噴菌現(xiàn)象）。 22

25、病原細菌分離鑒定 植物病原細菌一般都用稀釋分離法。病原細菌在組織中的數(shù)量很大，稀釋培養(yǎng)可以使病原細菌與雜菌分開，形成分散菌落，容易分離得到純培養(yǎng)，對病原細菌的識別和鑒定有很大幫助。病原細菌的鑒定通常需要進行生理生化測定和致病性測定。（四）線蟲病害的診斷和鑒定1、癥狀觀察 植物受到線蟲為害后，可以表現(xiàn)各種癥狀，有的表現(xiàn)為癭瘤、葉斑、壞死或整株枯死等，通常可以在病變部位找到病原線蟲，但是多數(shù)線蟲病表現(xiàn)為變色、褪綠、黃化、矮縮和萎蔫等癥狀，這多半是根部危害造成的。各屬線蟲為害不同，根結(jié)線蟲在新生的支根或側(cè)根上寄生后引起根結(jié)，滑刃線蟲主要危害植物的地上部分，可以傳染植物病毒的長針線

26、蟲、劍線蟲和毛刺線蟲等，在根外寄生。2、病原鑒定 直接觀察分離：寄生線蟲，可在解剖鏡下用挑針直接挑取蟲體觀察，或者經(jīng)分離后檢查，放在凹穴玻片上的水滴中，觀察和處理。（五）病毒病害的診斷和鑒定 植物的病毒病是植物的重要病害，但在林木中表現(xiàn)不多。原因是對它的了解和掌握不夠。一般幾乎每種植物有一種、幾種甚至十幾種病毒病害。對于病毒病害，首先要注意它的病理現(xiàn)象，有助于病毒病害的鑒別。 1、癥狀觀察 病毒病的癥狀以花葉、矮縮、壞死為多見。無病征。植物病毒必須經(jīng)過一定的傷口才能侵入寄主植物的細胞和組織，例如，葉片經(jīng)磨擦接種病毒后，在接種點可形成局部斑點，有壞死褪綠、

27、黃花等不同顏色，大小也可以不同。植物病毒從侵入點擴散，一般可以擴散到全株，表現(xiàn)各種外部癥狀，植物病毒病的外部癥狀一般可以歸為五種類型：花葉、變色、環(huán)斑和環(huán)紋、壞死、矮縮、矮化和畸形。植物病毒病的內(nèi)部癥狀包括組織與細胞的變化和內(nèi)含體的變化兩個方面。 2、病毒形態(tài)觀察：需進行電子顯微鏡觀察。在電鏡下可見到病毒粒體和內(nèi)含體。采取病株葉片用汁液摩擦接種或用蚜蟲傳毒接種可引起發(fā)??；用病汁液摩擦接種在指示植物或鑒別寄主上可見到特殊癥狀出現(xiàn)。用血清學診斷技術(shù)可快速作出正確的診斷。必要時作進一步的鑒定試驗。（六）植原體病害的診斷和鑒定植原體病害的特點是植株矮縮、叢枝或扁枝，小葉與黃化，少數(shù)出現(xiàn)花變?nèi)~

28、或花變綠。如棗瘋病、泡桐叢枝病等。只有在電鏡下才能看到植原體。注射四環(huán)素以后，初期病害的癥狀可以隱退消失或減輕。對青霉素不敏感。第二節(jié) 林木病害癥狀鑒別癥狀是林木病害表觀表現(xiàn)的異常特征，也是病害的表觀“身份”特征。了解林木病害癥狀，對田間調(diào)查中發(fā)現(xiàn)病害，及初步診斷病害，具有重要意義。一、林木病害癥狀的概念1. 癥狀：植物在發(fā)病部位表現(xiàn)出的不正?，F(xiàn)象。分為外部癥狀、內(nèi)部癥狀。內(nèi)部癥狀：植物體內(nèi)細胞形態(tài)或組織結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，顯微鏡觀察。外部癥狀：植物外表變化，肉眼觀察。2. 病狀：是指發(fā)病植物本身所表現(xiàn)出來的反?，F(xiàn)象。3. 病征：是指病原物在植物體上表現(xiàn)出來的特征性結(jié)構(gòu)。二、林木病害的癥狀類型（一）

29、、病狀類型常見的病害癥狀有很多種，其中病狀類型很多歸納起來只有5類，即變色、壞死、萎蔫、腐爛和畸形。1、 變色(discoluration)  病植物的色澤發(fā)生改變。大多出現(xiàn)在病害癥狀的初期，尤其是病毒病中最為常見。整個葉片或者葉片的一部分均勻地變色，主要表現(xiàn)為褪綠和黃化(yellowing)。褪綠是由于葉綠素的減少而使葉片表現(xiàn)為淺綠色。當葉綠素的量減少到一定程度就表現(xiàn)為黃化。另一種形式是葉片不是均勻地變色，如常見的花葉(mosaic)是由于形狀不規(guī)則的深綠、淺綠、黃綠或黃色部分相間而形成不規(guī)則的雜色，不同變色部分的輪廓是很清楚的。有時變色部分的輪廓不很清楚，這種癥狀就稱作斑駁(mo

30、ttle)。斑駁癥狀在果實上也是常見的。此外，田間還偶爾發(fā)現(xiàn)葉片不形成葉綠素的白化苗，這多半是遺傳性的。變色包括：均勻變色（黃化）、不均勻變色（mosaic)和明脈。2. 壞死(necrosis)壞死的概念：細胞和組織死亡，不保持細胞水分。變色類型：斑點、葉枯、猝倒和立枯(一般發(fā)生在幼苗上)斑點：圓形斑、輪斑、環(huán)斑、不規(guī)則壞死斑、角斑、梭形斑、蝕紋、線紋、穿孔、瘡痂、潰瘍等。3腐爛(rot) 腐爛：細胞和組織死亡，并伴隨有組織消解。腐爛類型：干腐 、濕腐和軟腐4萎蔫(wilt)萎蔫的概念：由于寄主維管束組織受損或堵塞，導致水分和養(yǎng)分輸送不暢，而使植物表現(xiàn)萎垂。分為全株性、局部性（半邊瘋）與生理

31、性萎蔫。5畸形（malfomation）畸形的概念：過度生長，生長減少及變態(tài)類型：縮葉、叢枝、腫瘤或癌腫、矮化，小 葉，小果及果不對稱、惡苗（徒長）和變態(tài)。 6、流脂或流膠（resinosis）：針闊葉被害后，樹干或枝條流出數(shù)值或膠液。如：紅松流脂潰瘍病和杏流膠病。（二）、病征類型1. 霉層：霜霉、綿霉、灰霉、黑霉等。2. 粉狀物：黑粉、白粉、銹粉。3. 粒狀物：各種真菌形成的繁殖體和菌核等。4. 線狀物：菌索等。5. 傘狀物：擔子菌產(chǎn)生的子實體。6. 膿狀物：細菌所特有的菌膿。（三）、 癥狀的變化林木病害在發(fā)生發(fā)展過程中，會表現(xiàn)多種變化特征，對病害診斷和鑒定造成混淆。掌握林木病害可能存在的變

32、化特征，對正確診斷病害具有重要意義。1典型癥狀一種病害在不同階段或不同抗病性的品種上或者在不同的環(huán)境條件下出現(xiàn)不同的癥狀，其中一種常見癥狀成為該病害的典型癥狀。2綜合癥有的病害在一種植物上可以同時或先后表現(xiàn)兩種或兩種以上不同類型的癥狀，這種情況稱謂綜合癥。例如稻瘟病在芽苗期發(fā)生引起爛芽，在株期侵染葉片則表現(xiàn)枯斑，侵染穗部導致穗莖枯死引起白穗。3并發(fā)癥當兩種或多種病害同時在一株植物上混發(fā)時，可以出現(xiàn)多種不同的類型的癥狀，這種現(xiàn)象稱為并發(fā)癥。有時會發(fā)生彼此干擾的拮抗現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)加重癥狀的協(xié)生作用。4隱癥現(xiàn)象 病害癥狀出現(xiàn)后，由于環(huán)境條件的改變，原有癥狀逐漸減退直至消失。隱癥的植物體內(nèi)仍有病原物

33、存在，一旦環(huán)境恢復(fù)，隱癥的植物還會重新顯癥。第三節(jié) 林木病害標本的采集和制作技術(shù) 林木病害標本是林木病害及其分布的實物性記載，有了標本即可在室外觀察的基礎(chǔ)上，開展室內(nèi)各方面的研究工作，特別是病害診斷和病原物的分類鑒定工作，沒有合格的標本就將無從做起。另外，標本也是重要的檔案資料。本次林業(yè)有害生物普查工作中，林木病害標本采集與制作是重要工作內(nèi)容之一。既是林木病害診斷與鑒定的基本材料，又是重要的持續(xù)保存的檔案資料。因此，標本采集和制作技術(shù)是必須掌握的基本技術(shù)之一。一、標本的采集（一）采集常用工具：標本夾、吸水紙、塑料袋、紙袋、標簽、鉛筆、記號筆、小刀、枝剪、手鋸。（二）采集時間與要求：1. 采集時

34、間：隨機采集： 結(jié)合踏查和專項調(diào)查工作，田間活動隨時分散采集，隨調(diào)查隨采集常年活動。集中采集：對重點對象，集中時間段或者地點，集中采集。2. 要求：為提高標本的使用價值，對所采標本特提出如下要求。(1) 癥狀應(yīng)具典型性：符合三點：既有病狀又有病征，中后期發(fā)病時間的癥狀特征，有的病害不同時間的癥狀截然不同，應(yīng)有不同階段的典型癥狀。有的病害發(fā)病部位較多，則要采集各個發(fā)病部位的材料。(2) 真菌病害要采集帶有子實體的標本，因為不同的病原菌所致病狀，有時是很相似，單憑病狀是不夠的，因此必須鑒定病原菌才能作出最后的診斷。沒有子實體的標本，有時是毫無意義的。    (3) 每

35、種標本上的病害種類一定要單一，以便正確鑒定和使用標本，因此對所采集的標本要經(jīng)嚴格挑選。 (4) 采集時要作必要的記載，以輔助標本的不足，記載的主要內(nèi)容有：寄主名稱、發(fā)病情況、環(huán)境條件、以及采集日期、地點、采集者姓名，為了采集方便，可印刷成“采集記載本”，按采集順序編號使用。 3. 采集注意事項 (1) 對不認識的寄主植物，應(yīng)注意采集供鑒定用的枝、葉、花、果等部分，以便鑒定寄主。 (2) 適于干制的標本，尤其容易干燥卷縮的標本，如穗葉，要注意及時壓制，否則葉片失水卷縮后無法展平。 (3) 腐爛的果實標本及柔軟的肉質(zhì)類標本，應(yīng)先以標本紙分別包裹后，再放在標本箱中，并且不能裝得太多，以免污染和擠壓。

36、 (4) 黑粉病類標本，也應(yīng)以紙袋分裝或用紙包好后，再放采集箱中，以免混雜。 (5) 標本的采集應(yīng)有一定的復(fù)份，一般應(yīng)在5份以上，以便用于鑒定，保存和交流等。(三) 室外采集 1病葉 用剪刀剪取病植物上的發(fā)病葉片，裝入采集夾中。盡量剪取整個病葉，同時，對于每一片葉上的病斑，在顏色、大小以及形狀方面都應(yīng)是較為一致的。2. 病枝 用剪刀剪取發(fā)病枝干，或者手鋸獲取枝干發(fā)病部位。3病果 用剪刀剪取病果，裝入采集筒中。對于此類標本，特別是對于多汁的病果，要特別加以注意，應(yīng)先以標本紙分別包裹后，置于采集筒(箱)中，以防相互擠壓而變形。4病根 用鐵鏟挖取線蟲病的病根以及根癌病的病根等，裝入采集筒中。在挖取此

37、類病害的標本時，要注意挖取點的范圍要比較大一些，以保證取得整個根部。提示：在植物病害標本的采集和制作過程中，應(yīng)對癥狀的變化情況給以特殊的注意。例如，癥狀可能表現(xiàn)為典型癥狀，也可能表現(xiàn)為非典型癥狀，在采集時，均應(yīng)加以注意。一種病害，在同一種植物上，可以同時表現(xiàn)出多種不同類型的癥狀（如樹脂病等）；在植物生長發(fā)育的不同時期，也可以先后表現(xiàn)出多種不同類型的癥狀。標本一般都用干燥法或浸漬法保存，要求是能盡量保持原來的性狀。在采集病斑類的葉片標本時，一個葉片上應(yīng)只有一種類型的病斑。尤其是在各種病害混合發(fā)生時采集標本，更需進行仔細的選擇；對于真菌病害，標本應(yīng)帶有子實體，無子實體在回到室內(nèi)后，鑒定將非常困難。

38、一般情況下，各種病害的標本最好采集10份以上。對于較薄的較易失水的葉片，如小麥和水稻的葉片，在采集時應(yīng)隨時攜帶吸水紙或廢舊的書，隨采隨壓，以免葉片迅速干縮卷曲而不易展開。(四) 采集記錄 采集時，要隨時作標記。臨時標簽上一般應(yīng)記錄相關(guān)項目內(nèi)容（詳見病害調(diào)查、標本采集記載表）。寄主名稱：俗名和學名都有時，應(yīng)同時記下。采集時間：一般應(yīng)記錄年、月、日。采集地點：一般記錄到省、市(縣)即可，需要時也可記錄到鎮(zhèn)(鄉(xiāng))等。海拔高度：按海拔儀指示記錄。生態(tài)環(huán)境：按照山坡地、平坦地、沼澤地；砂質(zhì)土、肥沃土等記錄。采集序號：一般按照采集時間的先后順序記錄。提示：寄主名稱如有不清楚的，能及時向當?shù)厝藛柮鞲?；如?/p>

39、能，應(yīng)記下采集地的位置以及寄主的一些主要性狀（如花、果、葉等），以備鑒定時參考。(五) 標本攜帶田間采集后，莖或葉片類的標本裝入采集袋中，每一種病葉放入一個小袋內(nèi)之后，最好再放入一個大一點的采集袋內(nèi)；對于根或果實類的標本，各種標本在裝入采集筒之前應(yīng)分別用小采集袋裝好密封或用紙包裹好，然后，再裝入采集筒中。對于黑粉類、銹病類的標本，要特別注意，標本間不要相互接觸沾污，否則，對于病原的鑒定和病害的診斷會有影響，腐爛類的標本(如梨、蘋果實炭疽、輪紋和褐腐病害)等應(yīng)避免擠壓，損壞標本。(六) 標本整理在完成田間采集的過程之后，需及時進行標本的取舍和初步的整理。對于同一種病害的標本，應(yīng)盡量保留帶有典型癥

40、狀的標本。同時，對于真菌性病害，在發(fā)病部位應(yīng)帶有子實體，葉片或果實要保持完整。在整理時，應(yīng)使其形狀盡量恢復(fù)自然狀態(tài)。對于采集到的比較稀少的標本，如癥狀不典型，或暫時觀察不到子實體，也不要舍棄。應(yīng)該同樣制作成標本，以備日后采取措施進行鑒定。如果外出采集，每天晚上都要將當天采集的標本進行整理、壓制，以后要勤換紙和晾曬，以防霉變。特別提出： 如果是一些不能識別的病害，需要專家組鑒定。一定要保證采集標本的新鮮度，以及不同發(fā)病時期的癥狀標本，和具有病征的標本。并及時與專家組聯(lián)系，獲取標本，及時進行常規(guī)鑒定，以及必要的分離培養(yǎng)鑒定。因此：一定要采集不同階段的典型癥狀的標本，對正確識別病害非常重要。 二、標

41、本的制作 采集的標本要及時處理制作，制作方法不外干制和液浸兩種。干制法適用于一般莖、葉、花及去掉果肉的果皮等水分含量較少的植物材料；浸漬法用于根莖及果實等多汁液的器官。1. 干制法 通常所說的蠟葉標本就是經(jīng)干制法制成的標本，干制法簡便易行，方法是將適于壓制的標本分層壓在標本夾中，一層標本，一層標本紙(每層34張)，以吸收標本中的水分，每個標本夾總厚度以3寸左右為宜，太厚不利于干燥，夾好用繩綁緊，放在陽光充足，通風干燥處自然干燥，干燥愈快，保持標本原色的效果愈好，所以標本質(zhì)量的好壞在于勤換紙，勤晾曬，夏季，壓制的前34天，每日換紙12次，以后每隔23天換紙1次，春秋可適當減少換紙的次數(shù)，直至徹底

42、干燥為止，在換紙時，特別是在頭一次換紙時，因為標本已經(jīng)變軟，易于鋪展，要注意加以整理，使其具有一定的“姿勢”。 壓制標本，除了自然干燥外，必要時也可進行人工加溫快速干燥，將標本放在烘箱或土炕上，溫度可提高到3550，但換紙要更勤，至少2小時換一次紙，對某些容易變黑的葉片標本(如梨葉)可平放在有陽光照射的熱沙中，使其迅速干燥，以達到保持原色的目的。 此外，多汁或大型不好壓制的標本，還可裝掛在通風良好處風干或曬干。 2.浸漬法 果實及無性繁殖器官等必須用浸漬法保存在標本瓶中，浸漬液的種類很多，這里介紹常用的幾種。 （1）普通防腐性浸漬液 福爾馬林 50毫升 酒精(95%) 300毫升 加水至 2000毫升 （2）保持綠色的浸漬液 醋酸銅浸漬液 以結(jié)晶醋酸銅逐漸加到50%的醋酸中，至飽和為止，將配成的原液用水稀釋三、四倍使用。將稀釋后的溶液加熱至沸騰，投入標本，標本的綠色最初會被漂去，經(jīng)三、四分鐘，至綠色恢復(fù)后，將標本取出，用清水漂凈，保存于5%的福爾馬林中，或壓制成干標本亦可。 硫酸銅及亞硫酸浸漬法    標本在5%的硫酸銅中浸