HCY臨床報告烏魯木齊

1、同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）臨床試驗報告研究開始日期： 年 月 日研究完成日期： 年 月 日臨床試驗負(fù)責(zé)人（簽名）： 臨床試驗機構(gòu)（蓋章）統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人（簽名）統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人單位（簽章）產(chǎn)品注冊申請人（蓋章）： 北京 有限公司注冊申請人的聯(lián)系人： 聯(lián)系電話： 報告日期：年 月 日原始資料保存地點： 2同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）臨床試驗報告目錄 1、研究摘要22、試驗研究人員23、縮略語24、引言25、研究目的36、試驗管理37、試驗設(shè)計38、臨床研究結(jié)果及分析69、討論和結(jié)論910、有關(guān)臨床研究中特別情況的說明911、附件10一、研究摘要選擇北京九強生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的同型半胱氨酸測定試劑

2、盒（循環(huán)酶法），與北京 生物工程技術(shù)有限公司研制的同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）對100例臨床血清樣本進行對比試驗研究，北京 生物工程技術(shù)有限公司研制的同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）與對照試劑具有等效性，且適用于臨床輔助診斷。二、試驗研究人員姓 名職 務(wù)在研究中的職責(zé)檢驗科副主任臨床試驗負(fù)責(zé)人/統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人/臨床試驗人員三縮略語序號縮 略 語全 稱1HCYHomocysteine 同型半胱氨酸四、引言北京 生物工程技術(shù)有限公司主要從事體外診斷試劑的研究、開發(fā)及生產(chǎn)。同型半胱氨酸測定試劑為公司生化試劑領(lǐng)域內(nèi)的新產(chǎn)品，需與生化儀配套使用，主要用于定量測定人血清中同型半胱氨酸的含量。同型半胱氨酸（h

3、omocysteine，HCY）又稱高半胱氨酸，是蛋氨酸去甲基后形成的一種含硫氨基酸，屬于蛋氨酸循環(huán)的中間產(chǎn)物。有關(guān)其代謝紊亂的報道最早來源于先天性胱硫醚合成酶缺乏導(dǎo)致出現(xiàn)同型半胱氨酸尿患者的觀察。此后，又相繼發(fā)現(xiàn)其他幾種參與HCY代謝的酶或輔酶改變所引起的代謝紊亂。近幾年來，隨著測定技術(shù)方法的改進，已經(jīng)能夠?qū)φＨ搜獫{中以各種形式存在的HCY進行測定，并且發(fā)現(xiàn)在心、腦及外周血管疾病、慢性腎功能不全、牛皮癬、維生素B12缺乏等疾病的患者中存在HCY的代謝紊亂。對同型半胱氨酸的研究始于20世紀(jì)70年代，1969年首次提出高同型半胱氨酸血癥可致動脈粥樣硬化并可形成血栓后，人們逐漸發(fā)現(xiàn)人體血清中同型

4、半胱氨酸的含量與冠心病、腦血管疾病、外周血管疾病和靜脈血栓的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系，而且隨著同型半胱氨酸含量的增加發(fā)生血管疾病的危險也呈遞增趨勢。 目前市售同型半胱氨酸測定試劑盒，主要是采用酶法進行測定。北京 生物工程技術(shù)有限公司的同型半胱氨酸測定試劑盒為自主研發(fā)，采用酶法其方法原理為：同型半胱氨酸被轉(zhuǎn)化為游離型后，通過與共價底物反應(yīng)，同時產(chǎn)生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原性（NADH）轉(zhuǎn)化為NAD+，樣本中的同型半胱氨酸的濃度與NADH的變化成正比。北京 生物工程技術(shù)有限公司委蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院對同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）與

5、已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品進行對比臨床試驗研究。申請人和臨床研究單位間基于此次臨床試驗研究建立委托合作關(guān)系,無其他合作關(guān)系。五、研究目的對北京 生物工程技術(shù)有限公司生產(chǎn)的同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）進行臨床試驗研究，結(jié)合臨床癥狀和診斷，評估其與已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的等效性。六、試驗管理1、此次臨床試驗研究由冉繼華主要負(fù)責(zé)， 等參加。2、實驗室質(zhì)量控制情況1） 嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進行操作，確保了試驗結(jié)果準(zhǔn)確。2） 在每次實驗中都檢測質(zhì)控血清，測定值均應(yīng)在規(guī)定范圍之內(nèi)。3） 臨床試驗應(yīng)指定專人負(fù)責(zé)，操作人員均經(jīng)過良好的訓(xùn)練，具備嫻熟的操作技能。4） 對比研究用試劑選用了已批準(zhǔn)上市的質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品。3、統(tǒng)計/數(shù)

6、據(jù)管理情況1） 試驗數(shù)據(jù)分別在SPSS和EXCEL軟件上進行分析，以避免由于軟件問題引起的誤差，確保統(tǒng)計結(jié)果的有效性。2）對原始數(shù)據(jù)進行存檔。4、研究中發(fā)生的問題及其處理措施整個研究過程進行順利，未出現(xiàn)任何意外情況。七、試驗設(shè)計1. 試驗總體設(shè)計及方案的描述對試劑盒的性能指標(biāo)：試劑空白、準(zhǔn)確性、靈敏度、測定線性范圍以及批內(nèi)精密度進行檢測。同時選擇已批準(zhǔn)上市的同型半胱氨酸測定試劑盒（循環(huán)酶法）產(chǎn)品與本品對臨床樣本進行對比試驗。如果對同一份血清或血漿樣本，雙方試劑檢測結(jié)果一致時，認(rèn)同檢測結(jié)果。如果對同一份樣本檢測結(jié)果不一致，選用第三種試劑或方法進一步檢測，結(jié)果遵從多數(shù)原則。2. 試驗設(shè)計及研究方法

7、選擇（1） 性能指標(biāo)檢測試劑空白以蒸餾水為檢測樣本時，吸光度應(yīng)不小于0.800A。試劑空白吸光度變化率以蒸餾水為檢測樣本時，每分鐘吸光度變化值(A/min)的絕對值應(yīng)不大于0.100A分析靈敏度Hcy含量為10umol/L時，測定吸光度變化率(減掉試劑空白吸光度變化率) A 0.002Abs/min。準(zhǔn)確性以定值質(zhì)控血清為標(biāo)本，測定值在給定的范圍內(nèi)。線性范圍在0-50umol/L范圍內(nèi)，設(shè)定濃度為：0， 12.5，25.0，37.5，50umol/L進行檢測，測定結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r0.990。批內(nèi)精密性同一批試劑分別同時測定高低值兩個標(biāo)本，變異系數(shù)（CV）8.0%。（2） 樣本量及樣本量確定的依

8、據(jù)選擇依據(jù)：已批準(zhǔn)上市同類產(chǎn)品與本品對比試驗具有臨床和統(tǒng)計學(xué)意義。為了體現(xiàn)結(jié)果的廣泛性和代表性，考察性別、年齡等因素是否會對結(jié)果產(chǎn)生影響，我們選擇對象包括男性也包括女性，年齡從11歲到83歲：對照組：70例正常人樣本，其中男性39名，女性31名，年齡41.0315.42歲；所有受試者均無動脈粥樣硬化、冠心病等疾病的患者。疾病組：經(jīng)臨床診斷為動脈粥樣硬化、冠心病等疾病的患者30例，男性19例，女性11例，年齡41.3713.92歲。（3） 樣本選擇依據(jù)、入選標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)。按照醫(yī)院正常模式收集血清樣本。樣本保存時間28天（02，未長時間暴露于空氣中）；患者組均為臨床診斷確定為動脈粥樣硬

9、化、冠心病等疾病的患者；對照組均為臨床診斷確定為無動脈粥樣硬化、冠心病等疾病的患者；剔除表觀出現(xiàn)渾濁變質(zhì)、高度溶血跡象的樣本。（4） 樣本采集、保存、運輸方法等所有樣本均來自本院檢驗科，全部為血清樣本。血清采集方法為：采集空腹靜脈晨血，經(jīng)3000r/min離心30 min，分離收集上層血清，密封后保存于4冰箱。（5） 對比試驗產(chǎn)品的確立。本次臨床試驗采用與已上市的同型半胱氨酸測定試劑盒（循環(huán)酶法）作對比研究。北京九強生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的同型半胱氨酸測定試劑盒（循環(huán)酶法）目前已經(jīng)在臨床上應(yīng)用，在市場上已經(jīng)獲得好評。（6） 臨床研究用產(chǎn)品的相關(guān)情況 臨床試驗研究用產(chǎn)品：名稱：同型半胱氨酸測定試劑

10、盒（酶法） 來源：北京 生物工程技術(shù)有限公司規(guī)格：R1-66 ml，R2-18ml批號：090812 效期：12個月 保存條件：2-8 對比用已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品：名稱：同型半胱氨酸測定試劑盒（循環(huán)酶法）來源：北京九強生物技術(shù)有限公司規(guī)格：R1：220ml，R2：17ml，R3：16ml批號：09-1120P 效期：12個月 保存條件：2-8批準(zhǔn)文號：國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2006第3400161號分析儀器：雅培Aeroset2000型全自動生化分析儀。（7） 質(zhì)量控制方法每次試驗使用校準(zhǔn)品校準(zhǔn)，測定質(zhì)控值應(yīng)在允許范圍內(nèi)，方可表明試劑盒對其它樣本的檢測結(jié)果是可以接受的，否則試驗無效重新進行檢測。每

11、次試驗復(fù)核人嚴(yán)格按要求對操作過程及結(jié)果進行復(fù)核確認(rèn)。（8） 臨床研究數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法。 采用EXCEL2003和SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，分組計算同型半胱氨酸檢測值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，對所有樣本在兩試劑盒上的檢測結(jié)果進行相關(guān)性分析，根據(jù)P值判斷相關(guān)的顯著性水平。（9） 研究過程中方案的修改臨床研究過程嚴(yán)格按照臨床考核方案進行，未做任何修改。八、臨床研究結(jié)果及分析1、樣本檢測結(jié)果對兩組數(shù)據(jù)進行t檢驗，由t界值表查得P值，t1.660.05兩組數(shù)據(jù)無顯著性差異。（結(jié)果見表1）北京 生物工程技術(shù)有限公司研制的試劑盒和北京九強生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒對不同組樣本檢測值的判定結(jié)

12、果均相同，兩者符合率100%，但不同樣本檢測濃度值不同。表1：樣本測定結(jié)果組別例數(shù)檢測結(jié)果（umol/L）SD參考值范圍內(nèi)樣本（例數(shù)）九強生物 九強生物 對照組708.52.78.52.87070病理組3022.63.423.23.6002、兩試劑盒相關(guān)性分析以北京九強生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒的檢測值為X坐標(biāo)，以北京 有限公司研制的試劑盒的檢測值為Y坐標(biāo)，繪制坐標(biāo)圖。對兩試劑盒檢測結(jié)果進行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)為0.9950，兩試劑盒總體檢測結(jié)果很接近。 （見圖1）圖1:對比試劑測定值相關(guān)性分析3.性能分析（1）空白吸光度以蒸餾水為檢測標(biāo)本時，吸光度值為1.559和1.573，均不小于0.8

13、00A，符合要求。（2）試劑空白吸光度變化率以蒸餾水為檢測樣本時，每分鐘吸光度變化值(A/min)的絕對值0.001，不大于0.100A。（3）準(zhǔn)確性 四川邁克試劑盒測定朗道質(zhì)控血清，測定值均在給定的參考值范圍內(nèi)。（結(jié)果見表2）表2：準(zhǔn)確性測定結(jié)果 單位：umol/LQC（邁克）LEVEL1（0110021）LEVEL2（0210053）靶值7.822.4參考范圍6.7-8.919.0-25.8測定值7.97.68.023.322.723.5（4）靈敏度樣本濃度為10umol/L時，測定反應(yīng)前后吸光度差值測定值，計算平均值（結(jié)果見表3），靈敏度結(jié)果大于A 0.002Abs/min，符合要求。表

14、3：靈敏度測定結(jié)果10umol/L分析靈敏度A (Abs)10umol/L的A均值(Abs)0.0320.0300.031（5）線性范圍在0-50umol/L范圍內(nèi)，依次配制濃度為0， 12.5，25.0，37.5，50umol/L濃度標(biāo)本進行線性測定，測定的線性相關(guān)系數(shù)為0.9997 0.990。（結(jié)果見表4。）表4：線性范圍測定結(jié)果單位： umol/L rab理論濃度50.037.525.012.50-測定濃度49.336.324.611.60.2-51.236.124.112.90.1-50.437.525.313.30.4-平均值50.336.624.712.60.2 0.9997 0

15、.9936 +0.04（6）精密性（批內(nèi)精密性）測定高、低值標(biāo)本，變異系數(shù)CV均小于8.0%。（結(jié)果見表5）表5：批內(nèi)精密度測定結(jié)果標(biāo)本1濃度（umol/L）標(biāo)本2濃度(umol/L)18.925.328.623.638.525.948.723.058.325.668.324.778.425.588.823.298.024.8109.025.98.624.8SD0.31.1CV%3.494.44測定高、低值標(biāo)本，變異系數(shù)CV均小于8.0%。4.參考值驗證本試劑盒所測70例正常人標(biāo)本，測定值均小于15umol/L，符合設(shè)定的參考值范圍。九、討論和結(jié)論通過上述實驗，對本公司試劑盒的各項性能指標(biāo)進行

16、了評估，對設(shè)定的參考值范圍進行了驗證，結(jié)果均達到要求。本實驗中，北京九強生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒和北京 生物工程技術(shù)有限公司研制的試劑盒同時對70例正常人標(biāo)本進行了測定，結(jié)果均在正常參考值范圍內(nèi)，對30例患者標(biāo)本測定，結(jié)果均超出正常參考值范圍，臨床符合性好。二者測定結(jié)果相關(guān)性良好，結(jié)果無顯著性差異。因此，我們得出結(jié)論，北京 生物工程技術(shù)有限公司研制的同型半胱氨酸測定試劑盒（酶法）與對比試劑盒有很好的符合率，在測定的準(zhǔn)確性和臨床適用性方面均能達到要求，能夠滿足臨床使用要求。十、有關(guān)臨床研究中特別情況的說明臨床研究進行正常，無異常情況發(fā)生。附件一：主要參考文獻1. 楊紀(jì)龍，杜秀麗等譯.統(tǒng)計學(xué).

17、科學(xué)出版社.20022.國家食品藥品監(jiān)督管理局體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則2007,4.28附件二：臨床研究中所采用的所有診斷試劑產(chǎn)品的使用說明書（附后）附件三：臨床研究中的所有試驗數(shù)據(jù)（附后）。附件四：臨床試驗主要研究人員的簡歷（附后）表1對照組檢測結(jié)果樣本編號檢測結(jié)果（umol/L）樣本編號檢測結(jié)果（umol/L）九強生物 九強生物 18.48.0366.67.226.06.93712.912.139.78.9387.27.9413.714.4398.98.259.89.6406.65.7612.512.64113.314.277.17.7424.33.587.58.14313.212

18、.297.47.2445.44.8107.88.1455.65.4116.65.84610.29.8126.46.6479.310.11313.512.8486.16.3145.45.04912.412.2159.610.4504.75.2165.86.55112.712.8174.74.25210.710.01810.210.2539.19.1196.35.5549.310.3204.25.25512.611.8217.47.05613.613.6228.47.7579.99.82312.511.9584.43.52410.810.7595.95.8259.39.6605.35.5266.87.56112.111.6276.87.1627.68.0288.89.7639.38.3299.19.5646.57.3308.07.26511.711.73111.511.8665.85.5328.18.0676.55.83311.911.9687.67.6344.84.4695.25.3358.27.6709.89.8表2 病理組檢測結(jié)果樣本編號檢測結(jié)果（umol/L）樣本編號檢測結(jié)果（umol/L）九強生物 九