園藝植物組織培養(yǎng)(完整版)

1、 植物組織培養(yǎng)填空（每空1分，共10分） 名詞解釋（共20分）簡答題（每小題8分，共40分）論述 2題 15分 2013.12.11名詞解釋1、外植體：植物組織培養(yǎng)中，使用的各種器官、組織和細(xì)胞統(tǒng)稱為外植體。2、細(xì)胞核重編程：是細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)由一種類型變成另一種類型。通過這一技術(shù)，可以在同一個(gè)體上將較容易獲得的細(xì)胞類型轉(zhuǎn)變成另一種較難獲得的細(xì)胞類型。這一技術(shù)的實(shí)現(xiàn)將能避免異體移植產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)。3、直接器官發(fā)生：直接從外植體的細(xì)胞形成器官原基，然后發(fā)育成器官。 4、愈傷組織：是指在培養(yǎng)或自然條件下，植物細(xì)胞脫分化，不斷增殖所產(chǎn)生的主要由薄壁細(xì)胞構(gòu)成的不定形的組織.5、褐化現(xiàn)象：指對于富含

2、多酚化合物的植物，在接種時(shí)由于切割或剝離使組織收到傷害，該類物質(zhì)會(huì)在多分氧化酶的作用下氧化褐變，是培養(yǎng)基變黑，并嚴(yán)重抑制外植體生長和分化，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致培養(yǎng)物死亡。6、復(fù)幼現(xiàn)象 ：在離體培養(yǎng)環(huán)境下，取自成齡植株的外植體由于適應(yīng)環(huán)境而一步步向幼齡方向變化。7、胚狀體：在離體培養(yǎng)條件下，植物離體培養(yǎng)的細(xì)胞、組織、器官也可以產(chǎn)生類似胚的結(jié)構(gòu)，其形成也經(jīng)歷一個(gè)類似胚胎發(fā)生和發(fā)育過程，這種類似胚的結(jié)構(gòu)稱為胚狀體。8、植物超低溫種質(zhì)保存：將植物的離體材料包括莖尖、分生組織胚胎花粉愈傷組織、懸浮細(xì)胞、原生質(zhì)體等，經(jīng)過一定的方法處理后在超低溫條件下進(jìn)行保存的方法。條件培養(yǎng)基9、無菌：是指使培養(yǎng)器皿、器械、培養(yǎng)基和

3、培養(yǎng)材料等處于無真菌、細(xì)菌、病毒等微生物的狀態(tài)，以保證培養(yǎng)材料在培養(yǎng)器皿中正常生長和發(fā)育。10、植物莖段培養(yǎng)： 植物莖段培差是指對植物的帶有一個(gè)以上定芽或不定芽的外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。11、脫分化：也稱去分化，是指離體培養(yǎng)條件下生長的細(xì)胞、組織或器官經(jīng)過細(xì)胞分裂或不分裂逐漸失去原來的結(jié)構(gòu)和功能而恢復(fù)分生狀態(tài)，形成無組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)或愈傷組織或成為未分化細(xì)胞特性的細(xì)胞的過程。12、再分化：離體培養(yǎng)的植物細(xì)胞和組織細(xì)胞可以由脫分化狀態(tài)重新進(jìn)化分化，形成另一種或幾種類型的細(xì)胞、組織、器官，甚至形成完整植株，這個(gè)過程稱為再分化。 13、原球莖：原球莖是蘭花種子發(fā)芽過程中的一種形態(tài)學(xué)構(gòu)造。是短縮的、

4、呈珠粒狀的、由胚生細(xì)胞組成的、類似嫩莖的器官。14、植物器官培養(yǎng)：對植物體各種器官及器官原基進(jìn)行離體培養(yǎng)的方法。包括根、莖、葉、花、果實(shí)、種子等的培養(yǎng)。15、胚胎培養(yǎng)：對植物成熟胚和未成熟胚以及胚器官進(jìn)行離體培養(yǎng)的方法，稱為胚胎培養(yǎng)。16、體細(xì)胞無性系變異育種：指體細(xì)胞無性系變異在育種中可以改良作物品種拓寬種質(zhì)資源，以及加強(qiáng)外源基因向栽培中的漸滲。17、體細(xì)胞胚胎發(fā)生：植物離體培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體的過程。18、離體授粉：或稱試管受精、離體受精，指將未授粉的子房或胚珠從母體上分離下來，進(jìn)行無菌培養(yǎng)，并以一定的方式授以無菌花粉，使之在試管內(nèi)實(shí)現(xiàn)受精的技術(shù)。19、種質(zhì)資源的離體保存：是指對離體培養(yǎng)的小

5、植株、器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等材料，采用限制、延緩或停止其生長的處理使之保存，在需要時(shí)可重新恢復(fù)其生長，并再生植株的方法。20、異質(zhì)性現(xiàn)象 :一個(gè)細(xì)胞或個(gè)體含有不同遺傳背景細(xì)胞質(zhì)的現(xiàn)象。21、人工種子：植物離體培養(yǎng)產(chǎn)生胚狀體或不定芽，被包裹在含有養(yǎng)分和保護(hù)功能的人工胚乳和人工種皮中形成能發(fā)芽出苗的顆粒體。填空題1、2、培養(yǎng)基可分為 固體培養(yǎng)基 和 液體培養(yǎng)基 ，二者的區(qū)別在于是否加入 凝固劑 。3、離體培養(yǎng)中再生植株的主要途徑是 器官發(fā)生 和 胚胎發(fā)生 。而 原球莖發(fā)生、 綠色球狀體發(fā)生、 球狀莖原基發(fā)生、 外植體已存在的器官原基萌發(fā) 等 再生途徑由于與器官發(fā)生有較密切聯(lián)系，將之歸入關(guān)以上

6、的器官發(fā)生途徑。4、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室包括 準(zhǔn)備室 、無菌操作室 、 培養(yǎng)室 和 溫室 。5、愈傷組織形成過程可分為 誘導(dǎo)期 、分裂期、分化期 。-6、德國植物學(xué)家Haberlandt提出植物細(xì)胞全能性學(xué)說。7、在雙子葉植物上，體細(xì)胞胚胎發(fā)生經(jīng)過原胚、球形胚、心形胚、魚雷形胚 和 成熟胚 5個(gè)階段。8、植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生具有 雙極性 和 存在生理隔離 2個(gè)特點(diǎn)。9、1960年，Cocking 等用真菌纖維素酶分離植物原生質(zhì)體獲得成功。這是植物組織培養(yǎng)的第二次突破 。10、植物器官和組織培養(yǎng)的基本程序包括無菌外植體的獲得、 初代培養(yǎng)物的建立、 形態(tài)發(fā)生和植物再生、培養(yǎng)物的觀察記載11、限制離體培

7、養(yǎng)物生長速度的方法很多，如 低溫 、提高滲透壓 、加生長延緩劑、干燥 、降低氧分壓 、礦物油覆蓋 。 12、外植體經(jīng)過滅菌處理后，要建立起初代無菌培養(yǎng)材料，并使其增殖和發(fā)育，還需無菌環(huán)境、規(guī)范操作、條件合適的配合。13、根據(jù)材料的來源，胚培養(yǎng)的類型可分為 幼胚培養(yǎng) 、 成熟胚培養(yǎng) 。14、根據(jù)器官形成方式的不同，將植物器官的再生分為短枝發(fā)生型、叢生芽發(fā)生型、不定芽發(fā)生型，胚狀體發(fā)生型、原球莖發(fā)生型。 15、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)可分為 分批培養(yǎng) 、半連續(xù)培養(yǎng) 、連續(xù)培養(yǎng) 。連續(xù)培養(yǎng)又分為 封閉式連續(xù)培養(yǎng) 和 開放式封閉培養(yǎng) 。16、花粉培養(yǎng)方式包括 平板培養(yǎng) 、液體培養(yǎng) 、雙層培養(yǎng) 、看護(hù)培養(yǎng) 、微室培

8、養(yǎng) 、條件培養(yǎng)基培養(yǎng) 。簡答題和論述題1. 請簡述玻璃化現(xiàn)象的含義及防治措施。含義：是指組織培養(yǎng)過程中的特有的一種生理失調(diào)或生理病變，表現(xiàn)為葉和嫩梢呈水浸透明或半透明水漬狀。措施：提高瓊脂的濃度；改善容器的通氣狀況；調(diào)節(jié)培養(yǎng)基組分；減低NH4可以減少玻璃苗；或入根皮苷和Ca 2的濃度。2. 影響植物體細(xì)胞無性系變異的因素。（一）外植體 外植體的類型、生理狀態(tài)等因素明顯影響體細(xì)胞無性系變異的頻率。一般而言，培養(yǎng)特異化程度高或衰老的組織，產(chǎn)生變異的幾率大；而培養(yǎng)分生組織或幼齡的外植體（如頂芽、腋芽、分生組織），則發(fā)生變異較少。（二）物種和基因型 體細(xì)胞無性系變異具有對物種和基因型的依賴性，即無論再

9、生模式如何，物種和基因型都影響著體細(xì)胞無性系變異的發(fā)生。另外，源植株的倍性也是一個(gè)重要因素，多倍體和染色體數(shù)目較多的植物其變異頻率比二倍體和單倍體高。 （三）培養(yǎng)基 1.基本培養(yǎng)基 基本培養(yǎng)基的某些成分會(huì)使培養(yǎng)物倍性改變。2.植物生長調(diào)節(jié)劑。生長調(diào)節(jié)劑可能是起一種誘變劑的作用。不同的激素濃度可以有選擇地誘導(dǎo)不同倍性的細(xì)胞的分裂。激素除了引起染色體倍性的增加外，在一些培養(yǎng)中還發(fā)現(xiàn)染色體倍性減少的現(xiàn)象。（四）繼代培養(yǎng)時(shí)間 繼代時(shí)間越長，繼代次數(shù)越多，細(xì)胞變異的幾率就越高。長時(shí)間的繼代培養(yǎng)會(huì)使愈傷組織和細(xì)胞的再生能力降低甚至完全喪失。3. 影響脫分化與再分化的因素有那些？ 影響細(xì)胞脫分化的因素1損傷

10、：外植體由于切割損傷的刺激，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)一系列生理生化的變化，促進(jìn)細(xì)胞增殖，這可能使生命的一種自我調(diào)節(jié)機(jī)制2生長調(diào)節(jié)劑。主要是生長素類起作用，因而在誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)常加入生長素類，但同時(shí)配合使用細(xì)胞分裂素則效果可能更好3光照。弱光或黑暗條件下常有利于脫分化中的細(xì)胞分裂。4細(xì)胞位置。外植體本身的各類細(xì)胞可能對培養(yǎng)條件的刺激有不同的敏感性。5外植體的生理狀態(tài)。不同生理年齡和不同季節(jié)都會(huì)有不同的培養(yǎng)反應(yīng)。6植物種類差異。不同種類的材料脫分化難易有所區(qū)別，一般情況下，雙子葉植物比單子葉植物及裸子植物容易。 影響細(xì)胞再分化的因素：目前還不能讓所有植物的所有活細(xì)胞都再生植株。主要原因是：（1）不同植物種類再分

11、化的能力差異很大；（2）對某些植物的植株再生條件還沒有完全掌握。影響細(xì)胞再分化的因素與影響脫分化的因素基本一樣。4. 簡述褐化現(xiàn)象的含義及防治措施。含義：褐化是指外植體或培養(yǎng)材料向培養(yǎng)基中釋放褐色物質(zhì)，致使培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料逐漸變褐而死亡的現(xiàn)象。措施：1.取材季節(jié)：冬春季節(jié)2.選擇合適的外植體：分生能力強(qiáng)3.在培養(yǎng)基中加入抗氧化劑（抗壞血酸，檸檬酸，半脫氨酸，二硫蘇糖醇，PVP）4.吸附劑：活性炭5加快繼代轉(zhuǎn)瓶速度5. 配制母液應(yīng)注意的事項(xiàng)有哪些？ 1、配制的倍數(shù)不宜過高，這樣一方面可避免一時(shí)用不完造成質(zhì)量的變質(zhì)浪費(fèi)，另一方面也可以避免母液倍數(shù)過高，吸量相對過小而影響準(zhǔn)確性。2、母液配好后，應(yīng)立

12、即存放于2-4 的冰箱中保存?zhèn)溆谩?、母液貯備時(shí)間不宜過長，盡量做到有計(jì)劃配制，預(yù)計(jì)能在短期內(nèi)用完。故所有母液應(yīng)在評上注明配制的日期，以便于檢查。4、應(yīng)定期檢查母液，如果出現(xiàn)渾濁或者沉淀以及微生物污染，不宜再用，應(yīng)重新配制。5、稱取大量元素化合物，只需在感應(yīng)量為0.01克的扭力天平或者藥物天平上稱量。稱取微量元素、維生素、氨基酸等，則要在感應(yīng)量為0.0001克的精密光電分析天平上稱量。6、各種化學(xué)藥品的濃度應(yīng)適當(dāng)，過大則會(huì)溶解不完全，而且還會(huì)引起化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，從而影響溶液中藥品含量。7、配制母液時(shí)，應(yīng)用容量瓶定容，使溶液的體積精確的到達(dá)刻度線。（配制母液原則：相同類型的試劑混合；易形成沉淀

13、的藥品分開；母液濃度要適宜；用量要認(rèn)真計(jì)算和核對；藥品要準(zhǔn)確稱量。）6. 請簡述培養(yǎng)基中添加活性炭的主要作用。（1）吸附培養(yǎng)基及培養(yǎng)物分泌物中的抑制物質(zhì) （2）抑制外植體褐變（3）防止玻璃苗的產(chǎn)生（4）促進(jìn)培養(yǎng)物生長和分化（5）促進(jìn)生根。7. 請比較分析植物傳統(tǒng)的保存方式與離體保存方式的各自優(yōu)缺點(diǎn)？ （1）、傳統(tǒng)包括原生境保存和移地保存:優(yōu)點(diǎn)：能夠保證物種的原有的各種生物特性穩(wěn)定遺傳下來。缺點(diǎn)：如果需要保存大量的種質(zhì)，需要耗費(fèi)巨大的人力物力和土地資源，在實(shí)際工作中很難得到實(shí)施； 容易受到自然災(zāi)害、蟲害、病害的侵襲，造成植物種質(zhì)資源的喪失； 無性繁殖的植物難于采用種子保存； 種子生活力隨貯存期的

14、延長會(huì)逐漸喪失； 采用無性繁殖來保持其優(yōu)良性狀的植物，用種子繁殖后代會(huì)發(fā)生變異； 頑拗型種子植物不宜用種子保存或保存難度很大 （2）、離體保存方式：優(yōu)點(diǎn)：所占空間少，節(jié)省大量的人力物力和土地；便于種質(zhì)資源的交流利用；需要時(shí)，可以用離體培養(yǎng)的方法很快大量繁殖； 避免自然災(zāi)害引起的種植流失。缺點(diǎn)：對于限制或延緩的生長處理，需要定期轉(zhuǎn)移，連續(xù)繼代培養(yǎng)； 易受微生物污染或發(fā)生人為差錯(cuò)； 多次繼代培養(yǎng)有可能造成遺傳性變異及材料的分化和再生能力的逐漸喪失8. 超低溫保存的基本原理。 低溫冰凍過程中，如果生物細(xì)胞內(nèi)水分結(jié)冰，細(xì)胞結(jié)構(gòu)就會(huì)遭到不可逆的破壞，導(dǎo)致細(xì)胞和組織死亡。植物材料在超低溫條件下之所以可以長

15、期保存并能在離開保存環(huán)境后正常進(jìn)行細(xì)胞分化，就是在冰凍過程中避免了細(xì)胞內(nèi)水分結(jié)冰，并且在解凍過程中防止細(xì)胞內(nèi)水分的次生結(jié)冰而達(dá)到植物材料保存目的。9. 簡述植物組織培養(yǎng)中準(zhǔn)備室（化學(xué)室）的作用。（1）器具的洗滌、干燥、滅菌、保存；(2)培養(yǎng)基配制，蒸餾水生產(chǎn) ；(3)生理生化分析及切片制備；(4) 藥劑的配置、存放，稱取 。10. 影響植物快繁的因素有哪些？其影響因素多種多樣：外植體：a.外植體來源。b.外植體生理年齡。c.外植體大小培養(yǎng)基：a.基本培養(yǎng)基。b.植物生長調(diào)節(jié)劑。c.培養(yǎng)基的物理特性。培養(yǎng)條件：a.光照 b.溫度 c.濕度 d.氣體繼代培養(yǎng)的形成移栽過程中影響生長的因素：a.根系

16、結(jié)構(gòu) b.葉表皮組織11. 請簡述分生組織含毒量低的原因。在植物體內(nèi)，病毒可通過維管束組織系統(tǒng)長距離轉(zhuǎn)移而分生組織中不存在維管束。病毒也可通過胞間連絲在細(xì)胞間移動(dòng)，但速度很慢，難以追趕上活躍生長的莖尖。在旺盛分裂的細(xì)胞中，代謝活性很高，使病毒無法進(jìn)行復(fù)制。在植物體內(nèi)可能存在病毒鈍化系統(tǒng)，它在分生組織中比其他任何區(qū)域具有更高的活性。在莖尖中存在高水平內(nèi)源生長素，可抑制病毒的增殖。12. 在植物組織培養(yǎng)過程中，經(jīng)常會(huì)發(fā)生真菌或細(xì)菌污染，試述污染發(fā)生的原因及控制措施都有哪些？1、 污染發(fā)生原因 培養(yǎng)基及各種接種器皿滅菌不徹底；外植體滅菌不徹底；操作時(shí)人為帶入；環(huán)境不清潔；超凈工作區(qū)域不清潔

17、。2、 控制污染的措施 滅菌前充分排盡滅菌鍋內(nèi)冷空氣，當(dāng)滅菌鍋壓力達(dá)1.0551.406 kgcm2、溫度為121126 時(shí)，應(yīng)保持滅菌時(shí)間2030 min；接種器具每次使用后應(yīng)用酒精灼燒；污染的外植體材料應(yīng)及時(shí)淘汰，如果種源有限，對外植體材料可進(jìn)行二次滅菌；操作人員接種時(shí)應(yīng)用75 的酒精擦拭雙手和培養(yǎng)瓶表面，操作區(qū)內(nèi)不要放入過多待用培養(yǎng)瓶以防止氣流被擋??；接種環(huán)境應(yīng)定期用福爾馬林等熏蒸滅菌，經(jīng)常用紫外燈照射滅菌；超凈工作臺(tái)應(yīng)定期對初過濾器清洗和更換，提前1520 min打開，并用75酒精擦拭整個(gè)工作臺(tái)。13. 離體條件下，由于擺脫了原來供體的束縛，離體細(xì)胞生命特征屬性的表

18、現(xiàn)過程和形式都將發(fā)生哪些變化？ 離體條件下，由于擺脫了原來供體（組織、器官或完整植株）的束縛，離體細(xì)胞（組織、器官）生命特征屬性的表現(xiàn)過程和形式都將發(fā)生變化。如在新陳代謝方面，離體細(xì)胞主要依靠培養(yǎng)基提供碳源，沒有或很少進(jìn)行光合作用：在調(diào)控能力方面，培養(yǎng)物從自養(yǎng)變?yōu)楫愷B(yǎng)；在生長發(fā)育與繁殖方面，離體細(xì)胞（組織、器官）可以改變原來的生長發(fā)育方向或進(jìn)程，如離體細(xì)胞的胚胎發(fā)生、細(xì)胞脫分化等；在遺傳變異與進(jìn)化方面，離體培養(yǎng)可大大增加培養(yǎng)物的變異性，或使某些變異在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增，改變其數(shù)量等。14. 請簡述人工種子的含義及應(yīng)用。 含義：人工種子又稱合成種子，一般是指離體培養(yǎng)條件下的植物材料，通過繁殖獲得大

19、量的高質(zhì)的成熟胚狀體，把這些胚狀體外面包上有機(jī)化化合物作為保護(hù)胚狀體及提供營養(yǎng)的“種皮”，從而創(chuàng)造出與真種子類似的結(jié)構(gòu)。人工種子的利用（1）使自然條件下不易結(jié)實(shí)或種子昂貴的材料能快速繁殖和保存（2）對于采用種子繁殖的蔬菜、花卉、草皮或果樹砧木的植物，可以通過人工生產(chǎn)大量無性種子，而獲得性狀及生長一致的種苗，可用于生產(chǎn)大量良種，或良種砧木種子，后者可大大提高接穗試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。（3）固定雜種優(yōu)勢，可使F1雜種優(yōu)勢多代利用，使優(yōu)良單株快繁成無性系而多代利用，從而大大縮短育種年限，同時(shí)保持雜種材料的遺傳穩(wěn)定性（4）由于理論上從任何材料都能得到胚狀體，且通過組織培養(yǎng)產(chǎn)生的胚狀體具有數(shù)量大、繁殖速度快、結(jié)

20、構(gòu)完整等特點(diǎn)，為基因工程技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)提供橋梁（5）在人工種子的制作中，加入各種營養(yǎng)成分或生長調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)植物生長，提高植物抗逆性。（6）可以保存及快速繁殖脫毒苗，克服某些植物由于長期營養(yǎng)系繁殖所積累的病毒。（7）不受環(huán)境因素的制約，可一年四季進(jìn)行工廠化生產(chǎn)。（8）人工種子的產(chǎn)生，在一定程度上可取代天然種子而節(jié)約糧食，成本低，體積小，貯運(yùn)方便，減少試管移苗，苗木包裝運(yùn)輸?shù)纳a(chǎn)環(huán)節(jié)，在生產(chǎn)上和研究上都肯有重要意義。15. 試述植物組織培養(yǎng)過程中都有哪些類型的基本培養(yǎng)基，各類基本培養(yǎng)基有何特點(diǎn)，以及如何合理的選擇這些基本培養(yǎng)基？(1)、植物組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基的類型特點(diǎn)：1、含鹽量較高的培養(yǎng)基 如M

21、S培養(yǎng)基、LS培養(yǎng)基、BL培養(yǎng)基。特點(diǎn)：主要特點(diǎn)是無機(jī)鹽濃度高，特別是硝酸鹽、鉀離子和銨離子含量豐富。元素平衡較好，緩沖性能好。微量元素和有機(jī)成分含量齊全且豐富，是目前使用最廣泛的培養(yǎng)基。2、硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基 如B5培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基、SH培養(yǎng)基等。特點(diǎn)：培養(yǎng)基的鹽類濃度較高，銨態(tài)氮含量較低，但鹽酸硫胺素和硝酸鉀含量較高。3、中等無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基 如Nitsch培養(yǎng)基、Miller培養(yǎng)基和H培養(yǎng)基等。特點(diǎn)：大量元素的含量約為MS培養(yǎng)基的一半，微量元素種類少含量高，維生素種類多。4、低無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基 如懷特培養(yǎng)基、WS培養(yǎng)基、HE培養(yǎng)基等。特點(diǎn)：無機(jī)鹽含量非常低，為MS培養(yǎng)基的1/4

22、左右，有機(jī)成分也很低。(2)、植物組織培養(yǎng)過程中合理選擇培養(yǎng)基：MS 培養(yǎng)基的無機(jī)鹽類濃度較高，能夠滿足快速增長的組織對營養(yǎng)元素的要求，但它不適合生長緩慢、對無機(jī)鹽類濃度要求比較低的植物，尤其是不適合銨鹽過高易發(fā)毒害的植物。B5培養(yǎng)基中銨的含量比較低，在豆科植物上用得較多，也適用于木本植物。N6培養(yǎng)基在水稻、小麥以及其他植物的花粉和花藥培養(yǎng)中被使用。White培養(yǎng)基在一般植物組織培養(yǎng)中用途比較廣泛，還非常適合于生根培養(yǎng)和幼胚的培養(yǎng)。WPM培養(yǎng)基中氮的含量比較低，適合木本植物組織培養(yǎng)。培養(yǎng)基是否適合所培養(yǎng)的植物，可以通過試驗(yàn)進(jìn)行篩選。必要時(shí)應(yīng)該對培養(yǎng)基的成分進(jìn)行調(diào)整，以此來獲得良好的培養(yǎng)效果。1

23、6. 目前鑒定脫毒苗的方法有哪些？各有何特點(diǎn)？（）直接測定法 直接觀察植株生長狀態(tài)是否異常，莖葉上有無特定病毒可見癥狀，從而可判斷病毒是否存在。優(yōu)點(diǎn)：簡便、直觀、準(zhǔn)確。（2） 指示植物法 接種某種病毒后能快速表現(xiàn)特有癥狀。（3） 血清鑒定方法 最主要的是酶聯(lián)免疫吸附法。特點(diǎn)：靈敏度高；快速；?；詮?qiáng)，重復(fù)性好；檢測對象廣；適用于處理大批樣品，所用基本儀器簡單，試劑價(jià)格較低，且可較長期保存。（4） 核酸分析法 用互補(bǔ)DNA（cDNA）檢測病毒。不僅可以檢測到目標(biāo)病毒的核酸，而且還可以檢測出相近病毒間的同源程度。（五）電鏡鑒定法 優(yōu)點(diǎn)：這種方法比指示植物法直觀，速度快；缺點(diǎn)：病毒粒子的形狀易與細(xì)胞

24、器和其它成分（如蛋白纖維）的形狀混淆；病毒濃度低時(shí)不易觀察到。17. 培養(yǎng)基的組成成分有哪些？各有什么作用？成分：水分無機(jī)鹽類有機(jī)營養(yǎng)成分 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)天然有機(jī)添加物質(zhì)；pH凝固劑作用：1.水分：是一切生物生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)胞內(nèi)的生化反應(yīng)都以水為介質(zhì)，而水分又是很多生物化學(xué)反應(yīng)的原料或代謝產(chǎn)物。構(gòu)成培養(yǎng)基的絕大部分組分為水分。2.無機(jī)鹽類：根據(jù)植物的需要量可以分為大量元素和微量元素。植物從培養(yǎng)基中吸收的大量元素是構(gòu)成植物細(xì)胞中核酸、蛋白質(zhì)以及生物膜系統(tǒng)等必不可少的營養(yǎng)元素。微量元素是很多酶和輔酶的重要成分，直接影響著蛋白質(zhì)的活性。鐵又是葉綠素的重要成分，在沒有鐵的培養(yǎng)基上生長，組織會(huì)產(chǎn)

25、生黃化或死亡現(xiàn)象3.有機(jī)營養(yǎng)成分：糖類物質(zhì)：培養(yǎng)基中的糖類物質(zhì)就成了其生命活動(dòng)中必不可少的碳源和能源。糖類的添加還有調(diào)節(jié)培養(yǎng)基滲透壓的作用維生素類：對于植物組織的生長和分化有良好的促進(jìn)作用；對愈傷組織和器官形成有促進(jìn)效果。維生素C還有防止組織褐變的作用。肌醇促進(jìn)愈傷組織形成和不定芽不定胚的分化氨基酸類：為培養(yǎng)物提供有機(jī)氮源，對外植體的生長及不定芽不定胚的分化促進(jìn)作用。水解酪蛋白和水解乳蛋白對胚狀體的形成也有良好的促進(jìn)效果4.植物生長調(diào)節(jié)劑：促進(jìn)植物組織的脫分化和形成愈傷組織誘導(dǎo)不定芽不定胚的形成。包括生長素和細(xì)胞分裂素，生長素類。在植物組織培養(yǎng)中，用于誘導(dǎo)愈傷組織形成，誘導(dǎo)根的分化和促進(jìn)細(xì)胞分

26、裂、伸長生長。細(xì)胞分裂素類：多用于誘導(dǎo)不定芽的分化，莖、苗的增殖，而避免在生根培養(yǎng)時(shí)使用。赤霉素：促進(jìn)細(xì)胞的伸長生長，促進(jìn)不定胚發(fā)育成小植株。赤霉素和生長素協(xié)同作用，對形成層的分化有影響，當(dāng)生長素赤霉素比值高時(shí)有利于木質(zhì)部分化，比值低時(shí)有利于韌皮部分化。5、天然有機(jī)添加物質(zhì)：椰子汁；酵母提取液；番茄汁；黃瓜汁；香蕉泥6、pH：在滅菌前，培養(yǎng)基的pH一般被調(diào)節(jié)到5.06.0 之間，最常用的pH為5.75.8。pH過高時(shí)，培養(yǎng)基會(huì)變硬；pH過低時(shí)，則影響培養(yǎng)基的凝固。7、凝固劑：配制固體培養(yǎng)基需要使用凝固劑。最常用有瓊脂。當(dāng)培養(yǎng)基pH偏低或瓊脂純度不高時(shí)，應(yīng)適當(dāng)增加其用量。8、其他添加物

27、：為了減少外植體褐變，需向培養(yǎng)基中加入一些防止褐化的物質(zhì)。在滅菌比較困難的植物材料添加一些抗生素物質(zhì)，來抑制雜菌生長。18. 以蘭科植物鐵皮石斛或金線蓮為例，試述快速繁殖的程序及移栽過程中的要點(diǎn)。鐵皮石斛：快速繁殖程序：外植體的選取和預(yù)處理-外植體的滅菌-培養(yǎng)基的滅菌-組織培養(yǎng)室中培養(yǎng)（22 ，每天光照12 h ，光照強(qiáng)度為2O00 lx）- 壯苗與生根移栽過程中的要點(diǎn)：出瓶后出瓶時(shí)根系含水量高，根系脆弱，易碰傷。用清水洗凈根部培養(yǎng)基，并晾干，能有效提高成活率。根部脫水后栽植在穴盤中，用基質(zhì)填充空隙，做到“上松下緊”?；|(zhì)的主要成分是陶瓷碎片、樹皮和鋸糠，保水透氣性好。置于苗床上，不易積水，且

28、四周透風(fēng)。要保持濕度70%左右，通風(fēng)良好，而且處在半陰半陽的狀態(tài)。長出新芽后只留1-2個(gè)健壯的新芽，其余抹去，并及時(shí)分開穴盤里的大小植株，進(jìn)行不同的肥水管理。注意病蟲害的防治，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理老葉、病葉，消除病害來源。蘭花一、外植體選擇蘭花的莖尖、葉片（應(yīng)選擇帶有嫩葉的花梗）、花器官、種子等都可作為外值體用于組織培養(yǎng)、誘導(dǎo)再生植株。二、外植體的消毒和接種 （一）外植體的消毒 在蘭花莖尖組織培養(yǎng)中，首先從生長健壯的植株上切取約10 cm長的莖尖，去掉苞葉，經(jīng)過常規(guī)的消毒后備用。（2） 外植體的接種 莖尖生長點(diǎn)的剝?nèi)?在超凈工作臺(tái)上，借助體視顯微鏡，用鑷子將消毒莖段的幼葉剝下，露出生長點(diǎn)后，用解剖刀

29、切取0.50.8 mm大小的芽應(yīng)盡量小，以利脫毒），接種于培養(yǎng)基上。 葉片外植體的切取 從莖段切下的幼葉連同花梗上的幼葉一起，在無菌條件下切割成0.30.5 cm2的小片，接種到培養(yǎng)基上。(三）培養(yǎng)基 誘導(dǎo)蘭花莖尖形成原球莖的培養(yǎng)基組成為：MS或B5NAA0.5-1.0 mg/L6-BA0.11. mg/L椰子汁10%；誘導(dǎo)葉片形成原球莖的培養(yǎng)基組成為：改良KyotoNAA0.l mg/L6-BA 1.0 mg/L十肌醇100 mg/L十煙酸0.l mg/L維生素B1 0.05 mg/L十腺嘌呤20 mg/L十蔗糖2%十尿素0.2%。原球莖生芽的培養(yǎng)基組成為：1/31/2 MS或3/44/5 B5，其余成分與誘導(dǎo)原球莖形成的培養(yǎng)基相同。3、 原球莖的誘導(dǎo) 莖尖生長點(diǎn)或葉片接種在原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。因蘭花種類而異，可以用固體培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基（液體培養(yǎng)基中應(yīng)加比較多的蔗糖）。凡原球莖切口處不變褐或變褐物質(zhì)排出量較少的種類，可用固體培養(yǎng)基，而易變褐的種類，最好用液體培養(yǎng)基。 4、 種子的無菌發(fā)芽（）種子滅菌 為保證種子的滅菌效果，可在蒴果開裂時(shí)將它采下，用紙包好，保存在干燥器內(nèi)。在冷藏室內(nèi)保存5 6年，種子仍能發(fā)芽。經(jīng)過保存的蘭花種子帶菌少，可用7 %漂白粉處