氟羅沙星注射液

1、沈陽藥科大學(xué)成人高等教育畢業(yè)論文氟羅沙星注射液無菌檢查方法學(xué)研究學(xué)生姓名： 席文娟 專業(yè)形式層次： 藥學(xué)本科 學(xué)號（或準(zhǔn)考證號）： 080319030 指導(dǎo)教師： 李丹 實習(xí)單位： 西安安健藥業(yè)有限公司 完成時間： 2009年11月 通訊地址： 西安市周至縣藥廠路1號 郵政編碼： 710400 聯(lián)系電話（手機）：成人高等教育畢業(yè)論文誠信聲明本人鄭重聲明：所呈交的畢業(yè)論文，是本人在指導(dǎo)老師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果，成果不存在知識產(chǎn)權(quán)爭議，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體

2、均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。 畢業(yè)論文作者簽名： 年 月 日目 錄摘要 1第1章 引言 2第2章 實驗部分21環(huán)境與儀器設(shè)備 21.1實驗環(huán)境 21.2儀器與試藥 21.3試驗用菌株 31.4培養(yǎng)基 31.5沖洗液和稀釋劑 32方法與結(jié)果 32.1 菌液制備 32.2 樣品取樣量與前處理 42.3方法驗證試驗 52.4方法驗證試驗 52.5方法驗證試驗62.6方法驗證試驗72.7樣品的無菌檢查 7第3章 結(jié)論 8參考文獻(xiàn) 8致 謝 9 氟羅沙星注射液無菌檢查方法學(xué)研究藥學(xué)專業(yè)2008級函授專升本 席文娟摘要建立氟羅沙星注射液的無菌檢查方法。本試驗取氟羅沙

3、星注射液，按中國藥典2005版二部收載1的“無菌檢查法”項下進(jìn)行試驗。結(jié)果表明：采用方法驗證試驗進(jìn)行氟羅沙星注射液的無菌檢查，供試品無菌生長，而6株陽性菌生長良好，方法可行。關(guān)鍵詞：氟羅沙星注射液；無菌檢查法（薄膜過濾法）；方法學(xué)驗證ABSTRACTA test method for sterility of Fleroxacin Injection was established. The test method was carried out according to the method of volume two, Chinese Pharmacopoeia Edition 2005.

4、 Three validation tests were engaged, and the third one show that all of six strains positive control tubes reveal growth of microorganism and the test control gives no evidence of growth . The method can be used to tset for sterility of this preparation .Keyword: Fleroxacin Injection ；test for ster

5、ility ；method validation tests1第一章 引言氟羅沙星注射液是一種新型的第三代氟喹諾酮類光譜抗菌藥物，主要通過抑制DNA旋轉(zhuǎn)酶活性，而達(dá)到殺菌作用，其具有抗菌譜廣、抗菌活性強、血中濃度高、組織滲透性強、消除半衰期長等特點2。臨床上主要用于對本品敏感細(xì)菌引起的急性支氣管炎，慢性支氣管炎急性發(fā)作及肺炎等呼吸系統(tǒng)感染；膀胱炎、腎盂腎炎、前列腺炎、附睪炎、淋病奈瑟菌性尿道炎等泌尿生殖系統(tǒng)感染；傷寒沙門菌感染、細(xì)菌性痢疾等消化系統(tǒng)感染；皮膚軟組織感染、骨感染、腹腔感染及盆腔感染等3。本品屬注射劑，為確保臨床用藥安全，中國藥典2005年版二部附錄規(guī)定需要進(jìn)行無菌檢查1。通過查閱

6、、參考、借鑒有關(guān)抗生素藥品無菌檢查方法驗證文獻(xiàn)4-6。第二章 實驗部分1 環(huán)境與儀器材料1.1實驗環(huán)境 （見表2.1）表2.1潔凈度檢測結(jié)果（溫濕度：20，55%）檢查項目無菌室無菌室凈化臺陽性對照室陽性性對照室凈化臺塵埃粒子數(shù)（0.5um）1066012000沉降菌數(shù)0000級別100100100100由表2.1可見，實驗條件符合“無菌檢查法”要求。1.2儀器與試藥 HTY-601型智能集菌儀及一次性使用全封閉集菌培養(yǎng)器（杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備2有限公司生產(chǎn)）；氟羅沙星注射液（西安安健藥業(yè)有限公司，規(guī)格為2ml：0.2g，批號為20090801）。1.3試驗用菌株金黃色葡萄球菌（Staphyl

7、ococcus aureus）CMCC(B)26003、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginose）CMCC(B)10104、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）CMCC(B)63501、生孢梭菌（Clostridium sporogenes）CMCC(B)64941、白色念珠菌（Candida albicans）CMCC(B)98001、黑曲霉菌（Aspergillus niger）CMCC(B)98003（均由陜西省食品藥品檢驗所提供，前5株菌為第三代，黑曲霉菌為第二代)。1.4培養(yǎng)基（適用性檢查、無菌性檢查、靈敏度檢查按中國藥典2005年版二部附錄檢查均符合

8、要求）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（批號：0811172）、真菌（改良馬丁）培養(yǎng)基（批號：071017）、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號：0811063）、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號：070926）、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號：070809）、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（批號：080710）（北京三藥科技開發(fā)公司）。均按中國藥典2005年版二部附錄的要求配制及滅菌。1.5沖洗液和稀釋劑0.9%氯化鈉溶液（天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠）、0.1%蛋白胨水溶液（北京奧博星生物技術(shù)有限公司）。按中國藥典2005年版二部附錄的要求配制及滅菌。2方法與結(jié)果2.1 菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯中

9、，3035培養(yǎng)1824小時，用0.9%滅菌氯化鈉溶液稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu（菌落形成單位）的菌懸液（營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿法計數(shù)）；接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時，用0.9%滅菌氯化鈉溶液稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基平皿法計數(shù)）；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)2448小時，3用0.9%滅菌氯化鈉溶液稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液（玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平皿法計數(shù)）；接種黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基斜面上，2328培養(yǎng)5天，加35ml0.9%無菌

10、氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無菌棉花能過濾菌絲的無菌毛細(xì)吸管）至無菌試管內(nèi)，用0.9%滅菌氯化鈉溶液稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的孢子懸液（改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基平皿法計數(shù)）。結(jié)果見表2.2。表2.2 驗證用菌液的稀釋級別及接種量試驗菌名稱 稀釋級別菌落數(shù)接種量（1ml）規(guī)定接種量試驗菌名稱 稀釋級別菌落數(shù)接種量規(guī)定接種量金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC(B)2600310-6851小于100cfu生孢梭菌（Clostridium sporogenes）CMCC(B)6494110-5751小于100cfu銅綠假單胞菌（P

11、seudomonas aeruginose）CMCC(B)1010410-6791小于100cfu白色念珠菌（Candida albicans）CMCC(B)9800110-5831小于100cfu枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）CMCC(B)6350110-6821小于100cfu黑曲霉菌（Aspergillus niger）CMCC(B)9800310-4701小于100cfu2.2樣品取樣量與前處理 參照中國藥典2005年版二部附錄無菌檢查的有關(guān)規(guī)定1，驗證實驗時每一驗證菌株需要的樣品量相當(dāng)于每一濾筒的樣品量，即每管20支樣品，按照無菌方法進(jìn)行處理，備用。42.3方法驗

12、證試驗取一次性全封閉集菌培養(yǎng)器（兩聯(lián)）一套，將2.2項下的樣品按薄膜過濾法濾至一管中，于最后加入小于100cfu的試驗菌，加入100ml相應(yīng)的培養(yǎng)基于濾筒內(nèi)作為試驗管；另一管加入相應(yīng)的試驗菌及培養(yǎng)基作為對照管。再取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基分別泵入另兩管一次性全封閉集菌培養(yǎng)器中，作為陰性對照管。按規(guī)定溫度將上述一次性集菌培養(yǎng)器培養(yǎng)35天（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035培養(yǎng)，改良馬丁培養(yǎng)基置2328培養(yǎng)）。各試驗菌同法操作，結(jié)果見表2.3。表2.3 方法驗證試驗試驗結(jié)果金黃色葡萄球菌試驗 對照銅綠假單胞菌試驗 對照枯草芽孢桿菌試驗 對照生孢梭菌試驗 對照白色念珠菌試驗 對照黑曲霉菌試驗

13、 對照陰S G 注：S表示硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基G表示改良馬丁培養(yǎng)基。 表2.3中結(jié)果顯示兩霉菌正常生長，細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢菌、生孢梭菌）均不能生長，顯示本品的抑制作用將對無菌檢查結(jié)果的判斷有影響，應(yīng)考濾使用一定量沖洗液和中和劑消除干擾。2.4方法驗證試驗取一次性全封閉集菌培養(yǎng)器（兩聯(lián)）一套，取少量沖洗液潤濕濾膜，先將2.2項下的樣品按薄膜過濾法濾至一管中，用0.1%蛋白胨水溶液（含0.1mol/L MnSO45ml）沖洗，分3次沖洗，每次100ml，并于最后一次沖洗液中加入小于100cfu的試驗菌，過濾，加入100ml相應(yīng)的培養(yǎng)基于濾筒內(nèi)作為試驗管；另一管加入相應(yīng)的試

14、驗菌及培養(yǎng)基作為對照管。再取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基分別泵入另兩管一次性全封閉集菌培養(yǎng)器中，作為陰性對照管。按規(guī)定溫度將上述一次性集菌培養(yǎng)器培養(yǎng)35天（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035培養(yǎng)，改良馬丁培養(yǎng)基置2328培養(yǎng)）。各試驗菌同法操作，結(jié)果見表2.4。5表2.4 方法驗證試驗試驗結(jié)果金黃色葡萄球菌試驗 對照銅綠假單胞菌試驗 對照枯草芽孢桿菌試驗 對照生孢梭菌試驗 對照白色念珠菌試驗 對照黑曲霉菌試驗 對照陰S G 注：S表示硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基G表示改良馬丁培養(yǎng)基。 經(jīng)每管用300ml0.1%蛋白胨水溶液（含0.1mol/L MnSO45ml）沖洗后，銅綠假單胞菌在48小時內(nèi)生長

15、，金黃色葡萄球菌在第四天生長，枯草芽孢菌和生孢梭菌仍未生長，表明本品的抑菌作用仍未消除，需進(jìn)一步加大沖洗液用量。2.5方法驗證試驗 取一次性全封閉集菌培養(yǎng)器（兩聯(lián)）一套，取少量沖洗液潤濕濾膜，先將2.2項下的樣品按薄膜過濾法濾至一管中，用0.1%蛋白胨水溶液（含0.1mol/L MnSO45ml）沖洗，分5次沖洗，每次100ml，并于最后一次沖洗液中加入小于100cfu的試驗菌，過濾，加入100ml相應(yīng)的培養(yǎng)基于濾筒內(nèi)作為試驗管；另一管加入相應(yīng)的試驗菌及培養(yǎng)基作為對照管。再取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基分別泵入另兩管一次性全封閉集菌培養(yǎng)器中，作為陰性對照管。按規(guī)定溫度將上述一次性集菌培

16、養(yǎng)器培養(yǎng)35天（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035培養(yǎng)，改良馬丁培養(yǎng)基置2328培養(yǎng)）。各試驗菌同法操作，結(jié)果見表2.5。表2.5 方法驗證試驗試驗結(jié)果金黃色葡萄球菌試驗 對照銅綠假單胞菌試驗 對照枯草芽孢桿菌試驗 對照生孢梭菌試驗 對照白色念珠菌試驗 對照黑曲霉菌試驗 對照陰S G 注：S表示硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基G表示改良馬丁培養(yǎng)基。6經(jīng)每管用500ml0.1%蛋白胨水溶液（含0.1mol/L MnSO45ml）沖洗后，銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌均在48小時內(nèi)生長，枯草芽孢菌和生孢梭菌仍未生長，表明本品的抑菌作用仍未消除，還需進(jìn)一步加大沖洗液用量。2.6方法驗證試驗 取一次性全封閉集菌培養(yǎng)器（

17、兩聯(lián)）一套，取少量沖洗液潤濕濾膜，先將2.2項下的樣品按薄膜過濾法濾至一管中，用0.1%蛋白胨水溶液（含0.1mol/L MnSO45ml）沖洗，分10次沖洗，每次100ml，并于最后一次沖洗液中加入小于100cfu的試驗菌，過濾，加入100ml相應(yīng)的培養(yǎng)基于濾筒內(nèi)作為試驗管；另一管加入相應(yīng)的試驗菌及培養(yǎng)基作為對照管。再取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基分別泵入另兩管一次性全封閉集菌培養(yǎng)器中，作為陰性對照管。按規(guī)定溫度將上述一次性集菌培養(yǎng)器培養(yǎng)35天（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035培養(yǎng)，改良馬丁培養(yǎng)基置2328培養(yǎng)）。各試驗菌同法操作，結(jié)果見表2.6。表2.6 方法驗證試驗試驗結(jié)果金黃色葡

18、萄球菌試驗 對照銅綠假單胞菌試驗 對照枯草芽孢桿菌試驗 對照生孢梭菌試驗 對照白色念珠菌試驗 對照黑曲霉菌試驗 對照陰S G 注：S表示硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基G表示改良馬丁培養(yǎng)基。經(jīng)每管用500ml0.1%蛋白胨水溶液（含0.1mol/L MnSO45ml）沖洗后，枯草芽孢菌在48小時內(nèi)生長，生孢梭菌在72小時內(nèi)才被觀察到。結(jié)果表明，檢驗條件下生孢梭菌對氟羅沙星注射液更為敏感，所以選擇生孢梭菌作為氟羅沙星注射液無菌檢查的陽性對照菌。2.7樣品的無菌檢查取樣品60支，分別按薄膜過濾法濾至一次性全封閉集菌培養(yǎng)器（三聯(lián)）中，每7管濾20支樣品，用0.1%蛋白胨水溶液作為沖洗液，沖洗量1000ml/管 ，沖畢，于兩管中泵入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（其中一管加入小于100cfu的生孢梭菌作為陽性對照管），另一管泵入改良馬丁培養(yǎng)基，上述各管按規(guī)定溫度培養(yǎng)14天，逐日觀察，供試品管均澄清，陽性管生長良好，判供試品符合規(guī)定。結(jié)論方法驗證試驗表明本品在未沖