潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測(cè)規(guī)程

1、潔凈區(qū)環(huán)境檢測(cè)規(guī)程1目的規(guī)定潔凈區(qū)的控制指標(biāo)和檢測(cè)方法，有效的控制潔凈車間和實(shí)驗(yàn)室潔凈區(qū)環(huán)境的潔凈度，滿足生產(chǎn)和檢測(cè)環(huán)境的要求。2范圍本規(guī)程適用本公司潔凈區(qū)環(huán)境的潔凈度檢驗(yàn)。3職責(zé)化驗(yàn)員負(fù)責(zé)潔凈環(huán)境檢測(cè)各項(xiàng)技術(shù)要求的檢驗(yàn)。4.工作程序4.1檢驗(yàn)項(xiàng)目溫度、濕度、壓差、風(fēng)速（換氣次數(shù)）、塵埃粒子數(shù)、菌落數(shù)。4.2溫度、濕度4.2.1要求潔凈區(qū)溫度（18-28），相對(duì)濕度（45-65）%4.2.2儀器與設(shè)備溫濕度計(jì)溫濕度計(jì)必須在檢定合格周期內(nèi)4.2.3操作方法目測(cè)溫濕度計(jì)4.2.4測(cè)定頻次1次/班4.3壓差4.3.1要求潔凈室與室外壓差10Pa，潔凈室與非潔凈室5Pa，不同級(jí)別潔凈室之間5Pa。4.

2、3.2儀器與設(shè)備微壓計(jì)微壓差計(jì)或手持式數(shù)顯壓差計(jì)須在檢定合格周期內(nèi)。4.3.3操作方法用微壓計(jì)或數(shù)顯壓差計(jì)測(cè)試各室的靜壓力，由兩室靜壓力之差，為靜壓差。4.3.4測(cè)定頻次1次/月4.4換氣次數(shù)/風(fēng)速4.4.1要求如表1所示：表1各級(jí)別潔凈區(qū)風(fēng)速的技術(shù)指標(biāo)級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)風(fēng)速m/s水平層流0.4垂直層流0.3換氣次數(shù)次/h2515124.4.2儀器與設(shè)備風(fēng)速計(jì)風(fēng)速計(jì)必須在檢定合格周期內(nèi)。4.4.3操作方法4.4.3.1用風(fēng)速計(jì)距風(fēng)口下25cm處測(cè)量風(fēng)速，采樣點(diǎn)為風(fēng)口的四個(gè)頂角及中心位置（不少于5點(diǎn)）。計(jì)算5個(gè)點(diǎn)風(fēng)速平均值，為一個(gè)風(fēng)口的風(fēng)速。4.4.3.2換算公

3、式：換氣次數(shù)=（高效送風(fēng)口風(fēng)速×高效送風(fēng)口面積）被測(cè)房間體積4.4.4測(cè)定頻次：1次/月4.5塵埃粒子數(shù)4.5.1要求如表2所示：表2各級(jí)別潔凈區(qū)塵埃粒子數(shù)的技術(shù)指標(biāo)級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)塵埃數(shù)粒/m30.5m35003500003500000105000005.0m0200020000600004.5.2儀器與設(shè)備塵埃粒子計(jì)數(shù)器4.5.3內(nèi)容（1）用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀在高度0.8米水平面上的位置采樣，總采樣次數(shù)不少于5次。（2）最少采樣點(diǎn)數(shù)目的確定如3表所示：表3：最少采樣點(diǎn)數(shù)目面積m2潔凈度級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)102322

4、210204222204082224010016422100200401033200400802066400100016040131310002000400100323220008002006363注：對(duì)于100級(jí)的單向流潔凈室（區(qū)），包括100級(jí)潔凈工作臺(tái)，面積指的是送風(fēng)口表面積；對(duì)于10000級(jí)以上的單向流潔凈室（區(qū)），面積知道是房間面積。（3）采樣點(diǎn)的位置采樣點(diǎn)一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。采樣點(diǎn)多余5點(diǎn)事，也可以在離地面0.8m至1.5m高度區(qū)域內(nèi)分層分布，但每層不少于5點(diǎn)。采樣點(diǎn)分布見附錄A（4）采樣次數(shù)的限定對(duì)任何小潔凈室（區(qū)）或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)的數(shù)目不得小于

5、2個(gè)，總采樣次數(shù)不得少于5次。每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以多余一次，且不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以不同。（5）采樣量不同潔凈度級(jí)別每次最小采樣量見表4表4最小采樣量最小采樣量L/次潔凈度級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)0.5m5.662.832.832.835.0m8.58.58.58.5（6）采樣注意事項(xiàng)對(duì)于單向流潔凈室（區(qū)），粒子計(jì)數(shù)器的采樣管口應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流潔凈室（區(qū)），粒子計(jì)數(shù)器的采樣管口宜朝上。布置采樣點(diǎn)是應(yīng)盡量避開風(fēng)口。采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少活動(dòng)。采樣完畢后，宜對(duì)粒子計(jì)數(shù)器進(jìn)行自凈。應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染。4.5.4采樣結(jié)果

6、的計(jì)算（1）采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度A采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度A的計(jì)算公式：A=i=1nCin式中：A某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度，粒每立方米（粒/m3）Ci某一采樣點(diǎn)的粒子濃度（i=1,2,3，n）,粒每立方米（粒/m3）n某一采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)，次（2）平均值的均值M平均值的均值M的計(jì)算公式：M=i=1LAiL式中：M平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒每平方米（粒/m3）Ai某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度（i=1,2,3，n），粒每平方米（粒/m3）L某一潔凈室（區(qū)）內(nèi)的總采樣點(diǎn)數(shù)，個(gè)（3）標(biāo)準(zhǔn)差SE標(biāo)準(zhǔn)差SE的計(jì)算公式：SE=（A1-M）2+（A2-M）2+（A3-M）2+（AL-M）2

7、L（L-1）式中：SE平均值均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差，粒每平方米（粒/m3）（4）95置信上限（UCL）95置信上限（UCL）計(jì)算公式：UCL=M+t×SEUCL平均值均值的95置信上限，粒每平方米（粒/m3）t95置信上限的t分布系數(shù)，見表5采樣點(diǎn)數(shù)L234567899t6.312.922.352.132.021.941.901.86注：當(dāng)采樣點(diǎn)數(shù)多于9時(shí)，不需要計(jì)算UCL4.5.5結(jié)果的判定判斷懸浮粒子的潔凈度級(jí)別應(yīng)同時(shí)滿足以下兩個(gè)條件（1） 每個(gè)采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限，即Ai級(jí)別極限；（2） 全部采樣點(diǎn)的懸浮粒子濃度平均值均值的95置信上限必須不大于規(guī)定的級(jí)別極

8、限，即UCL級(jí)別界限。4.5.6測(cè)定頻次1次/月4.6沉降菌4.6.1要求（1）判定標(biāo)準(zhǔn)如表6所示潔凈度級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)沉降菌/皿，0.5h1310（2）最少采樣點(diǎn)數(shù)目最少采樣點(diǎn)數(shù)目見表3（3）采樣點(diǎn)位置工作區(qū)采樣點(diǎn)位置離地面0.8m1.5m（略高于工作面）。可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。采樣點(diǎn)位置分布見附錄A（4）最少培養(yǎng)皿數(shù)在滿足最少采樣點(diǎn)數(shù)目的同時(shí)，還需滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表7潔凈度級(jí)別最少培養(yǎng)皿數(shù)（ø90mm）1001410000210000023000002（5）采樣次數(shù)每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次4.6.2儀器與設(shè)備儀器設(shè)備包括：培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基

9、、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器（1） 培養(yǎng)皿：采用ø90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿（2） 培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基或沙氏培養(yǎng)基。配制方法見附錄B。（3） 恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。4.6.3測(cè)試步驟（1）測(cè)試前，培養(yǎng)皿表面需嚴(yán)格消毒。（2）將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣要求逐個(gè)放置，然后從里到外逐個(gè)打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。（3）靜態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為30min以上；動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間不大于4h。（4）全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（5）采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，

10、時(shí)間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在2025培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于5d。（6）每次采樣應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過程中造成影響，每次或每個(gè)區(qū)域取不低于1個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌生長(zhǎng)。（7）每批培養(yǎng)皿應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)皿在使用前已被污染。每批可選定不少于3個(gè)培養(yǎng)皿作為批對(duì)照培養(yǎng)。4.6.4采樣注意事項(xiàng)（1）對(duì)于單向流潔凈室（區(qū)）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流潔凈室（區(qū)），采樣口向上。（2）布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。（3）采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)站

11、在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動(dòng)。（4）應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。4.6.5菌落計(jì)數(shù)（1）用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)。（2）若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。（3）當(dāng)某個(gè)測(cè)試點(diǎn)有多個(gè)培養(yǎng)皿時(shí)，可計(jì)算單個(gè)培養(yǎng)皿的沉降菌平均菌落數(shù)，計(jì)算公式如下：M=M1+M2+Mnn式中：M平均菌落數(shù)Mnn號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)n培養(yǎng)皿總數(shù)4.6.5結(jié)果的判定（1）每個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定標(biāo)準(zhǔn)中的界限（2）在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判定合格。4.6.6測(cè)定頻次1次

12、/月4.7 浮游菌4.7.1要求（1）判定標(biāo)準(zhǔn)如表8所示潔凈度級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)浮游菌/m35100500（2）最少采樣點(diǎn)數(shù)目最少采樣點(diǎn)數(shù)目見表3（3）采樣點(diǎn)的位置工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8m1.5m左右送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)采樣點(diǎn)布置的規(guī)則見附錄A。（4）最小采樣量浮游菌每次最小采樣量見表9所示表9 最小采樣量潔凈度級(jí)別采樣量 L/次100級(jí)100010000級(jí)500100000級(jí)100300000級(jí)100（5）采樣次數(shù)每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次4.7.2儀器與設(shè)備儀器與設(shè)備包括：浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高

13、壓蒸汽滅菌器。（1） 培養(yǎng)皿：采用ø90mm×15mm規(guī)格培養(yǎng)皿。（2） 培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基或沙氏培養(yǎng)基，其配制方法見附錄B。（3） 恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。4.7.3測(cè)試步驟（1）測(cè)試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒（2）采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑消毒，用于100級(jí)潔凈室的采樣器宜預(yù)先放置在被測(cè)房間內(nèi)。（3）消毒劑擦拭培養(yǎng)皿的外表面。（4）采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外表面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴灑罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。（5）采樣口和采集管，使用前必須高溫滅菌，如用消毒劑對(duì)對(duì)采集管內(nèi)外壁進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)將管中殘

14、留液倒掉并晾干。（6）采樣者應(yīng)穿戴被測(cè)潔凈區(qū)相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手消毒劑消毒或戴無菌手套操作。（7）采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘留消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不宜少于5min，并檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時(shí)間。（8）關(guān)閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。（9）置采樣口于采樣點(diǎn)后，開啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。（10）全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在2025培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于5d。（11）每次采樣應(yīng)

15、有對(duì)照試驗(yàn)，避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過程中造成影響，每次或每個(gè)區(qū)域取不低于1個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌生長(zhǎng)。（12）每批培養(yǎng)皿應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)皿在使用前已被污染。每批可選定不少于3個(gè)培養(yǎng)皿作為批對(duì)照培養(yǎng)。4.7.4采樣注意事項(xiàng)（1）所使用儀器必須在檢定有效期內(nèi)（2）采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。（3）使用前應(yīng)仔細(xì)檢查每一個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。（4）對(duì)培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件及其他參數(shù)詳細(xì)記錄。（3）采樣管的長(zhǎng)度應(yīng)根據(jù)測(cè)點(diǎn)的高度定，盡量減少?gòu)澢?.7.5菌落計(jì)數(shù)（1）用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有菌落直接計(jì)數(shù)、

16、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用510倍放大鏡檢查，有否遺漏。（2）若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。（3）每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度的計(jì)算公式如下：浮游菌平均濃度個(gè)/m³=菌落數(shù)采樣量（4）由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落和培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。4.7.6結(jié)果判定（1）每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于所選定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。（2）在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判定為符合。4.7.7

17、測(cè)定頻次1次/月4.8日常監(jiān)控（1）對(duì)于壓差及溫濕度的日常監(jiān)控，在工作階段，每天早晚各一次記錄工作場(chǎng)所的微壓差計(jì)及溫濕度計(jì)的度數(shù)。（2）塵埃粒子、浮游菌及沉降菌除定期檢測(cè)外不做日常監(jiān)控，但在出現(xiàn)以下情況時(shí)，需對(duì)潔凈區(qū)相關(guān)項(xiàng)目做重新檢測(cè)：Ø 停工時(shí)間比預(yù)計(jì)時(shí)間延長(zhǎng)Ø 關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在Ø 在生產(chǎn)期間，空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大維修Ø 日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)Ø 消毒規(guī)程的改變Ø 引起生物污染的事故等Ø 當(dāng)生產(chǎn)設(shè)備有重大維修或增加設(shè)備時(shí)Ø 當(dāng)潔凈區(qū)（室）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)時(shí)附錄A 潔凈室（區(qū)）采樣點(diǎn)布置

18、潔凈室（區(qū)）采樣點(diǎn)布置宜力求均勻，避免采樣點(diǎn)在局部區(qū)域過于稀疏。下列多采樣點(diǎn)布置圖示可做參考:100級(jí)單向流區(qū)域，潔凈工作臺(tái)或局部空氣凈化設(shè)施的采樣點(diǎn)宜布置在正對(duì)氣流方向的工作面上，氣流形式可參考下圖：水平單向流的氣流形式：垂直單向流的氣流形式：附錄B 培養(yǎng)基的滅菌及準(zhǔn)備1、大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）培養(yǎng)基的滅菌及準(zhǔn)備培養(yǎng)基采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，可以按照以下處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)的符合要求的脫水培養(yǎng)基。配制后按培養(yǎng)基規(guī)定的經(jīng)驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基配方酪蛋白胰酶消化物15g大豆粉木瓜蛋白酶消化物5g氯化鈉5g瓊脂15g純化水1000ml取上述成分除瓊脂，混合，微熱溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱融化后，分裝、滅菌，冷卻至約60，在無菌操作要求下傾