中藥8類十味降糖丸(濃縮丸)藥學(xué)研究綜述

1、中藥注冊(cè)分類8 藥學(xué)研究資料7藥學(xué)研究資料綜述 (十味降糖丸（濃縮丸）)課題名稱 十味降糖丸（濃縮丸）研究單位 xxxx制藥有限公司申報(bào)單位 xxxx制藥有限公司聯(lián) 系 人 聯(lián)系方式 Tel: Fax: 藥學(xué)研究資料綜述一、工藝研究資料及文獻(xiàn)資料 （一）藥材的分揀去雜質(zhì)及質(zhì)量驗(yàn)收處方各中藥材，經(jīng)分揀去雜質(zhì)，按中國藥典20xx年版一部有關(guān)規(guī)定檢驗(yàn); 其余各原輔料藥按中國藥典20xx年版二部有關(guān)規(guī)定檢驗(yàn)，符合規(guī)定者備用。（二）配料與摻混符合規(guī)定的藥材根據(jù)生產(chǎn)批量大小，按處方稱量配伍，將擬用不同方法提取的藥材及粉碎的藥材分別摻混，分開放置。（三）粉碎根據(jù)生產(chǎn)工藝需要，將需粉碎藥材用中藥粉碎機(jī)粉碎，過

2、100目篩，備用。經(jīng)對(duì)三批中試產(chǎn)品粉碎工藝考查，結(jié)果表明常規(guī)粉碎方法即可符合本品生產(chǎn)需要。（四）提取工藝選擇試驗(yàn) 根據(jù)處方中各藥材所含主要成份的理化性質(zhì)選擇不同的提取方法，葛根、五味子適宜乙醇溶液提取，其余黃芪等六味適宜水提取。（1）葛根、五味子的提取工藝提取藥材葛根、五味子。根據(jù)各藥味所含成分的理化性質(zhì)，適宜采用乙醇溶液提取，故采取正交試驗(yàn)優(yōu)化乙醇溶液提取工藝條件。取提取藥材，按原處方量配伍，制備工藝正交試驗(yàn)用樣品。每正交試驗(yàn)樣品藥材重525g，其中葛根300g、五味子225g。 表1、 因素水平表 L9（34）正交表頭水平因素因 素A加溶劑量（倍） B濃度（） C提取次數(shù)（次） D提取時(shí)間

3、（小時(shí)） 12310 95 3 3 8 75 2 2 6 50 1 1 表2、正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表試驗(yàn)號(hào)因 素A加溶劑量（倍） B濃度（） C提取次數(shù)（次） D提取時(shí)間（小時(shí)） 12345678910 95 3 3 10 75 2 210 50 1 18 95 2 18 75 1 38 50 3 26 95 1 26 75 3 16 50 2 3取每正交試驗(yàn)樣品525g，依表2設(shè)計(jì)加溶劑量、回流時(shí)間、回流次數(shù)，分別提取，放冷，濾過，合并濾液，靜置，取上清液濃縮，干燥至恒重后以干膏與葛根素的積作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。表3、 正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)表實(shí)驗(yàn)號(hào)干膏量(g)出膏率葛根素含量(mg/g)葛根素總量(mg)132.9

4、6.2712.64415.86241.17.839.78401.96325.74.99.79251.60421.94.214.42315.80523.24.412.90299.28650.29.66.65333.83720.13.812.32247.63825.24.811.12280.22933.16.38.32275.39表4、正交試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)表試驗(yàn)號(hào)因 素評(píng)價(jià)指標(biāo)A加溶劑量（倍） B濃度 C提取次數(shù)（次）D提取時(shí)間（小時(shí)）葛根素總量(mg)12345678910 95% 3 310 75% 2 210 50% 1 18 95% 2 18 75% 1 38 50% 3 26 95% 1 2

5、6 75% 3 16 50% 2 3415.86401.96251.60315.80299.28333.83247.63280.22275.39K1K2K31069.42 979.29 1029.91 990.53948.91 981.46 993.15 983.42 803.24 860.82 798.51 847.62k1k2k3356.47 326.43 343.30 330.18316.30 327.15 331.05 327.81267.75 286.94 266.17 282.54R88.72 40.21 77.13 47.64由上述極差分析數(shù)據(jù)表明：加溶劑量為顯著因素，其次為回流

6、次數(shù)、回流時(shí)間、溶劑濃度，因此最佳提取方法為A1B2C1D1，由于C1 和C2、D1和D1 、B1和B2相差甚微，考慮到實(shí)際生產(chǎn)的能源問題，采用加75%乙醇溶液10倍量，回流提取二次，每次2小時(shí)。 確證實(shí)驗(yàn)：取兩份確證實(shí)驗(yàn)樣品，每份樣品中葛根300g、五味子225g，適當(dāng)破碎，加10倍量75%乙醇溶液回流提取二次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，靜置，取上清液濃縮，烘至恒重，稱量。按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定干膏中葛根素含量。由兩份確證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：加75%乙醇溶液10倍量，回流提取二次，每次2小時(shí)的提取方法與最優(yōu)方法相當(dāng)，且重復(fù)性良好。（2）黃芪等六味藥的提取工藝提取藥材黃芪、地骨皮、知母、山藥、天花粉、雞內(nèi)

7、金。根據(jù)各藥味所含成分的理化性質(zhì)，適宜采用水提取，故采取正交試驗(yàn)優(yōu)化水提取工藝條件。取提取藥材適當(dāng)破碎，按處方量配伍，制備工藝正交試驗(yàn)用樣品。每正交試驗(yàn)樣品藥材重2325g，其中黃芪450g、地骨皮750g、知母300g、山藥300g、天花粉375g、雞內(nèi)金150g。 表1、因素水平表 L9（34）正交表頭 水平因 素A煎煮時(shí)間（小時(shí)） B加水量（倍） C煎煮次數(shù)（次）1232 10 11.5 8 21 6 3表2、正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表試驗(yàn)號(hào)因 素A（小時(shí)） B（倍） C（次）1234567892 10 1 2 8 22 6 3 1.5 10 2 1.5 8 31.5 6 11 10 3 1 8 1

8、 1 6 2取每正交試驗(yàn)樣品2325g，依表2設(shè)計(jì)加水量，煎煮時(shí)間，次數(shù)，分別煎煮，放冷，濾過，合并濾液，靜置，取上清液濃縮，干燥至恒重后以干膏量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。表3、正交試驗(yàn)結(jié)果分析試驗(yàn)號(hào)因 素評(píng)價(jià)指標(biāo)A(小時(shí)) B(倍) C(次)干膏量(g)1234567892 10 12 8 22 6 31.5 10 21.5 8 31.5 6 11 10 31 8 11 6 2326.91510.34488.07556.24490.96258.74469.03256.36351.22K1K2K3 1325.32 1352.18 842.01 1305.94 1257.66 1417.80 1076.61

9、 1098.03 1448.06R248.71 254.15 606.05 由極差分析結(jié)果可得出，其中因素C (次數(shù))為顯著因素，其次為B（加水量），而A（時(shí)間）影響最小，即C> B > A。最優(yōu)條件為A1B1C3；由于煎煮三次與二次相差較小，煎煮2小時(shí)與1.5小時(shí)差別也不大，又考慮到時(shí)間因素及實(shí)際生產(chǎn)因素，確定提取工藝為10倍加水量，提取2次，每次1.5小時(shí)。正交結(jié)果確證實(shí)驗(yàn) 取兩份樣品，每確證實(shí)驗(yàn)樣品藥材重2325g，其中黃芪450g、地骨皮750g、知母300g、山藥300g、天花粉375g、雞內(nèi)金150g，適當(dāng)破碎，加10倍量水，提取2次，每次1.5小時(shí)，流水冷卻，濾過，合

10、并濾液，靜置，取上清液濃縮，干燥至恒重，評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性及穩(wěn)定性均好。干膏量與正交表中最優(yōu)者相當(dāng)。說明正交選定的工藝可以在生產(chǎn)中采用。 （五）成型工藝條件的選定1.格列本脲混合方法的選擇處方中格列本脲屬于低含量原料，采用將格列本脲用等量遞增法與藥粉混勻，再與其它原料混勻。經(jīng)此方法混合后的藥粉，對(duì)格列本脲進(jìn)行含量測(cè)定，混合均勻，可以滿足要求。2.制丸工藝研究 制丸 常規(guī)的方法是將藥粉與稠膏混勻制成軟材，用制丸機(jī)制丸，由于本品稠膏量太大，無法制成軟材；故將稠膏與人參細(xì)粉及適量淀粉混勻，干燥，用純化水制成軟材，制丸，結(jié)果能制出理想的丸劑。干燥 取2份樣品，采用微波干燥，置70溫度下分別在18分鐘

11、、20分鐘、22分鐘、24分鐘、26分鐘、28分鐘、30分鐘、32分鐘，取樣送檢，測(cè)量水分、溶散時(shí)限。結(jié)果干燥24分鐘即能使水分、溶散時(shí)限符合要求，硬度適中。包衣、打光 采用藥用炭和明膠為包衣材料，按照常規(guī)的方法包衣打光，結(jié)果藥丸色澤均勻，光亮，可以符合生產(chǎn)需要。(六) 中試生產(chǎn)取處方十倍量藥材，在中試設(shè)備上試驗(yàn)，考核工藝穩(wěn)定性，三批數(shù)據(jù)表明，工藝穩(wěn)定，具可重復(fù)性和再現(xiàn)性。二、質(zhì)量研究資料及文獻(xiàn)資料十味降糖顆粒收載于國家藥品監(jiān)督管理局國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編（中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)部分 內(nèi)科 氣血津液分冊(cè)），十味降糖丸（濃縮丸）是根據(jù)十味降糖顆粒改變劑型的中藥8類新藥（減免臨床研究），現(xiàn)將質(zhì)量標(biāo)

12、準(zhǔn)起草說明報(bào)告如下：【名稱】 十味降糖丸（濃縮丸） 【處方】除輔料外，與原劑型標(biāo)準(zhǔn)一致?！局品ā砍尚凸に囃?，與原劑型標(biāo)準(zhǔn)一致?！拘誀睢?以三批中試產(chǎn)品的實(shí)際性狀描述。 【鑒別】 (1)為處方中人參的顯微鑒別。 三批中試產(chǎn)品均檢出。與原劑型標(biāo)準(zhǔn)一致。（2）為處方中人參和黃芪的薄層鑒別，經(jīng)與人參皂苷Rb1、Re、Rg1對(duì)照品、黃芪甲苷對(duì)照品；缺人參陰性對(duì)照樣品、缺黃芪陰性對(duì)照樣品對(duì)照，斑點(diǎn)顯色清晰，Rf值適宜，專屬性強(qiáng)。予以采用。本鑒別項(xiàng)與原劑型標(biāo)準(zhǔn)一致。（3）為處方中五味子的薄層鑒別，經(jīng)與五味子甲素對(duì)照品、缺五味子陰性對(duì)照樣品對(duì)照，斑點(diǎn)顯色清晰，Rf值適宜，專屬性強(qiáng)。予以采用。與原劑型標(biāo)準(zhǔn)一致

13、。 （4）還進(jìn)行了天花粉的薄層鑒別試驗(yàn)：取本品6g，研細(xì)，加稀乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取瓜氨酸對(duì)照品，加稀乙醇溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照層色譜法（中國藥典20xx年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5l，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，分別以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水（8：2：2：3）和正丁醇-冰醋酸-水（5：2：3）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以茚三酮試液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，與瓜氨酸對(duì)照品、缺天花粉陰性對(duì)照樣品對(duì)照，陰性樣品、樣品、瓜氨酸對(duì)照品在相同位置均有相同顏色斑點(diǎn)，本品中天花粉尚未找到具特

14、異性的薄層鑒別方法。【檢查】依照中國藥典20xx年版一部附錄(D)的有關(guān)規(guī)定對(duì)三批中試產(chǎn)品檢查（重量差異、崩解時(shí)限、微生物限度），均符合藥典有關(guān)規(guī)定。重金屬 依中國藥典20xx年版一部(附錄 E第二法)檢查，三批中試產(chǎn)品重金屬均低于百萬分之五，暫不設(shè)定重金屬檢查項(xiàng)。砷鹽檢查 依中國藥典20xx年版一部(附錄 F第二法)檢查,三批中試產(chǎn)品砷鹽均低于百萬分之二，暫不設(shè)定砷鹽檢查項(xiàng)?！竞繙y(cè)定】采用高效液相色譜法（中國藥典20xx年版一部附錄VI D）測(cè)定。1.葛根的含量測(cè)定原標(biāo)準(zhǔn)收載了葛根的含量測(cè)定方法，經(jīng)驗(yàn)證，原方法樣品制備合理，且峰形對(duì)稱，分離度好，陰性無干擾，故采用原標(biāo)準(zhǔn)收載的方法作為含量測(cè)

15、定方法。葛根素 中國藥品生物制品檢定所 752-20xxxx儀器與試劑高效液相色譜儀 xx xxxx 型高壓恒流泵xxxx紫外可見波長檢測(cè)器伊利特色譜數(shù)據(jù)工作站色譜柱 xxxxkromasil C18 5um 4.6×250mm柱號(hào)譜甲醇 天津四友磷酸、三乙胺為分析純標(biāo)準(zhǔn)曲線:精密稱取葛根素對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含100g的溶液,作為對(duì)照品溶液。以100g/ml的對(duì)照品溶液為母液，分別配制成50g/ml、25g/ml、5g/ml、2.5g/ml的對(duì)照品溶液 。分別精密吸取上述各對(duì)照品溶液10l,注入液相色譜儀,測(cè)定,計(jì)算，即得?；貧w曲線為Y(峰面積)

16、=26.050X(濃度)+26.995 r=0.99987線性范圍為2.5100g/ml,標(biāo)準(zhǔn)曲線近似過圓點(diǎn),采用外標(biāo)一點(diǎn)法定量。供試品溶液制備方法的選擇1. 取本品適量，研細(xì)，取1g，精密稱定，加甲醇40ml，回流30分鐘，放冷，濾過，濾液置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。2.取本品適量，研細(xì)，取1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，即得。經(jīng)試驗(yàn)方法較方法重現(xiàn)性好且方法簡(jiǎn)單，故采用此方法制備供試品。精密度 同一樣品連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.81%,小于3.0%。穩(wěn)定性 同

17、一樣品,制備后在30分鐘、1小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)后分別測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.10%，小于5.0%,樣品放置24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。重現(xiàn)性 同一樣品，取5份，各約1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。取上述供試品溶液各10µl，注入液相色譜儀，測(cè)定。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.85%，小于5.0%。加樣回收率 取已知含量的樣品5份(約1g),精密稱定，分別置50ml量瓶中,各精密加入每1ml含0.1mg的葛根素對(duì)照品溶液3ml，蒸干，精密加甲醇50ml，稱定重量，超聲處理3

18、0分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。取上述供試品溶液各10l,注入液相色譜儀，測(cè)定,平均回收率為99.94%。樣品測(cè)定 對(duì)三批中試產(chǎn)品,采用原標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定方法測(cè)定，其結(jié)果如下?！竞繙y(cè)定】 葛根 照高效液相色譜法(中國藥典20xx年版一部附錄 D)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇磷酸鹽(1：4)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為250nm；理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于7000。對(duì)照品溶液的制備 取葛根素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含10g的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml

19、，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，即得。測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各lOl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。原劑型標(biāo)準(zhǔn)十味降糖顆粒每袋6g，規(guī)定每袋含葛根以葛根素(C21H2009)計(jì)，不得少于2.0mg。新標(biāo)準(zhǔn)十味降糖丸（濃縮丸）每袋6g，根據(jù)原劑型標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定及三批中試含量測(cè)定數(shù)據(jù)確定每1g含葛根以葛根素(C21H2009)計(jì)，不得少于0.35mg。2.格列本脲的含量測(cè)定原標(biāo)準(zhǔn)收載了格列本脲的含量測(cè)定方法，經(jīng)試驗(yàn)，原方法峰形分離不好，格列本脲峰沒有回到基線，調(diào)整流動(dòng)相為甲醇磷酸鹽(12：8)，結(jié)果峰形對(duì)稱，分離度好，

20、格列本脲峰能回到基線，陰性樣品無干擾，故采用修定過的方法作為含量測(cè)定方法。儀器與試劑高效液相色譜儀 xx xxxx 型高壓恒流泵xxxx紫外可見波長檢測(cè)器伊利特色譜數(shù)據(jù)工作站色譜柱 xxxxkromasil C18 5um 4.6×250mm柱號(hào)譜甲醇 天津四友磷酸、三乙胺為分析純標(biāo)準(zhǔn)曲線:精密稱取在105烘干至恒重的格列本脲對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含308µg的溶液,作為對(duì)照品溶液。以308µg/ml的對(duì)照品溶液為母液，分別配制 154µg/ml、77µg/ml、38.5µg/ml、15.4µ

21、;g/ml、7.7µg/ml的對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述各對(duì)照品溶液10µl,注入液相色譜儀,測(cè)定,計(jì)算，即得?；貧w曲線為Y(峰面積)17.0366X(濃度)3.1799 r0.99979 線性范圍為7.7154µg/ml，標(biāo)準(zhǔn)曲線近似過圓點(diǎn),采用外標(biāo)一點(diǎn)法定量。 供試品溶液制備方法的選擇1取本品，研細(xì)，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用加甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。2. 取本品，研細(xì)，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，用加甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，濾液作

22、為供試品溶液。同一樣品按上述兩種方法，每種方法制備三個(gè)供試品，分別取上述溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，經(jīng)比較三種方法測(cè)定得的含量基本一致，第一種方法重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)單，故選用第一種供試品溶液制備方法。精密度 同一樣品連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.07%，小于3.0%。穩(wěn)定性 同一樣品，制備后在30分鐘、1小時(shí)、4小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)后分別測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.51%，小于5.0%，表明樣品放置24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。重現(xiàn)性 同一樣品，取5份，各約1g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用加甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。取上述供試品溶

23、液各10µl，注入液相色譜儀，測(cè)定。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.63%，小于5.0%。加樣回收率 取已知含量的樣品5份(約1g)，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，各精密加入每1ml含38.5g的格列本脲對(duì)照品溶液5.0ml，蒸干，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用加甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。取上述供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，平均回收率為99.81%。樣品測(cè)定 對(duì)三批中試產(chǎn)品，采用新制訂的含量測(cè)定方法測(cè)定，其結(jié)果如下?！竞繙y(cè)定】照高效液相色譜法(中國藥典20xx年版一部附錄 D)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為

24、填充劑：甲醇磷酸鹽(12：8)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為300nm。理論板數(shù)按格列本脲峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。對(duì)照品溶液的制備 取格列本脲對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含20g的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，即得。 測(cè)定法 分別精密吸取上述溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。原劑型標(biāo)準(zhǔn)十味降糖顆粒每袋6g，每袋相當(dāng)于格列本脲1.5mg，規(guī)定每袋格列本脲應(yīng)為1.2mg1.8mg，新標(biāo)準(zhǔn)十味降糖丸（濃縮丸）每袋6g，每袋相當(dāng)于格列本脲1.5mg，根據(jù)原劑型標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定及三批中試含量測(cè)定數(shù)據(jù)確定本品每1g含格列本脲應(yīng)為0.2mg0.3mg?！竟δ苤髦?/p>