酸溶蛋白和粗蛋白測(cè)定

1、酸溶蛋白測(cè)定操作步驟<1）族確稱取樣品6克于100 ml燒杯中準(zhǔn)確加入15怕三氯乙酸溶液50 亳升，混合均勻'靜置5分<2）以中速定性濾紙T過濾，棄去少許初始濾液，將濾裁轉(zhuǎn)移至離心也（3）4000轉(zhuǎn)/分鐘下離心10分鐘，準(zhǔn)確移取Jt上消液10ml于消化管中， 凱氏定氮法測(cè)楚蛋口含帚。（4）凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含最（略）.計(jì)算公式（rt-rft） xCx6. 25x0. 014x5x（>o% m x cpV_懈山液消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積* ml；乂一空白試驗(yàn)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，mhC-鹽酸的摩爾濃度，mol/1：億25x0, 014-蛋口質(zhì)轉(zhuǎn)換系數(shù)；m-_稱取邯品質(zhì)呆，

2、g ；cp杠品的粗蛋白質(zhì)含杲，*油脂的檢驗(yàn)與分析粗蛋白質(zhì)的測(cè)定（凱氏半微量定氮法）測(cè)定原理 凱氏法的基本原理是將含有蛋白質(zhì)的樣品與濃硫酸共熱使其分解，其屮氮元素變成鍍鹽。再經(jīng)濃堿液作用，放出的氨氣經(jīng)硼酸吸收后用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定硼酸溶液所吸收的氨。計(jì)算 出試樣含氮量，乘以相關(guān)的蛋白質(zhì)換算系數(shù)，即得打蛋白質(zhì)的含量。消化：蛋白質(zhì)與濃硫酸混合加熱，蛋白質(zhì)被炭化分解，其屮碳被氧化成二氧化碳，所含的氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變成硫酸鍍殘留于消化液屮。有機(jī)物(含 N、C、H、0、P、S 等元素)+H2S04 CO2f + (NH4)2SO4 +H3PO4+ SO2T + SOsf由于上述反應(yīng)進(jìn)行的很慢，消化需要很長(zhǎng)時(shí)間，加入催

3、化劑可加速反應(yīng)。硫酸銅是備用的催 化劑， 硫酸鉀能提高硫酸的沸點(diǎn)，常將它們混合使用，起加速氧化、促進(jìn)有機(jī)物分解的作用。蒸憎：消化所 得的硫酸鈴加堿蒸鐳，氨就被釋放出來。(NHi) 2SO1+ 2N&OH二 2 NHs H20- Na2S0iNHs H2o= NHsT+ H2O生成的氨用硼酸溶液吸收。硼酸吸收氨后，指示劑顏色變化，再用鹽酸滴定，直至恢復(fù)到原來的氫離子濃度為止，鹽酸與樣品中氨是等摩爾反應(yīng)。2NH 3+ 4 H3BO3二(NH 4)2 B -心+ 5 出 0(NHi) 2 B 40?+ 2 HC1 + 5 H20 二 2NH4CI + 4Hs BOs由于各種蛋白質(zhì)的含氮量通常

4、為16%左右，將含氮量乘以蛋白質(zhì)系數(shù)，即為粗蛋白質(zhì)含量。試劑濃硫酸一過氧化氫一水混合液(2+ 3 + l)o在100mL水屮緩慢加入濃硫酸200mL ,冷卻后加入30%過氧化氫300mL,混勻備用，此液存放陰涼處可保存一個(gè)月。0 *混合催化齊Ijo 10g硫酸 銅(CUS04-5H20)'100g硫酸鉀、0.2g硒粉，在研缽屮研細(xì)，通過孔徑0.45mm篩，混勻后備用o0340g/100mL 氫氧化鈉溶液、2%硼酸溶液、0. 01mol/L鹽酸溶液。d甲基 紅乙醇溶液：稱取0. lg甲基紅置于研缽屮， 加入少許95%乙醇，研磨溶解后加入75mL95%乙醇。G次甲基藍(lán)乙醇溶液：0. lg次

5、甲基藍(lán)溶于80mL95% 乙醇屮，臨用時(shí)將以上兩液按2:1比例混合即成。在酸域呈紫紅色，PH二5. 5時(shí)無色，在堿域呈綠色。儀器50mL凱氏燒瓶、1000mL圓底燒瓶、100mL錐形瓶、5mL(刻度0. OlmL)微量滴定管、50mL容量瓶、5mL移液管、凱氏蒸鐳裝置。操作方法消化。用長(zhǎng)條光滑紙稱取試樣0. 20.3g，精確到0. OOOIg （約含粗蛋白質(zhì)10 30mg ）直接送入凱氏燒瓶底部，加混合催化劑 lg,同時(shí)加入硫酸+過氧化值+水混 合液35mL,稍加振搖，斜置于電爐上。在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱進(jìn)行消化。開始時(shí)用低溫加熱，切勿使瓶屮泡 沫超過瓶肚的2/3,待泡沫減少和煙霧變白后再增加溫度保持

6、微沸。直至消化液呈淺藍(lán)綠色的透明狀時(shí)再繼續(xù)加熱沸騰lOmin,取出，待消化液冷卻至室溫后，加水至10-20mLo溶液溫度降到室溫后，將消化液移入 50mL容量瓶中，并用少量水將凱氏燒瓶 沖洗34次，洗滌液一并移入容量瓶屮，加水稀釋至刻度，混勻備用。蒸憎。凱氏微量蒸館裝置它是由蒸汽發(fā)生器、反應(yīng)瓶、及冷凝管等組成，在大燒瓶8（容量1000 mL）中加入蒸憎水400mL和少量碎玻璃片，加5滴混合指示劑，加幾滴酸液，使水呈紫 紅色，蓋緊瓶塞，連接4、1、2并檢查有無漏氣。量取30mL2 %硼酸溶液，注入（lOOmL ）三角瓶3內(nèi)，作為承接器，加混合指示劑 12滴（溶液呈紫紅色），置于冷凝管 2下面，使

7、管尖端插入硼酸溶液 1cm深處。用5mL移液管吸取5mL （ V）試樣稀釋液，由漏斗 5注入蒸憎瓶1內(nèi),再倒入蒸憎水10mL沖洗漏斗5o接著量取40g/100mL氫氧化鈉溶液10mL,由漏斗5 注入蒸鐳瓶1內(nèi)，再用2-5mL水沖洗漏斗5,旋緊活塞，此時(shí)蒸鐳瓶1內(nèi)溶液總體積應(yīng)不超過容積的一半。打開電爐加熱燒瓶8,打開簧夾7關(guān)閉活塞6,使蒸汽通過回流管4進(jìn)入蒸鐳瓶1再由蒸惘瓶1 經(jīng)冷凝管2而流入三角瓶3,待三角瓶3內(nèi)的溶液呈綠色時(shí)，開始記錄時(shí)間，經(jīng)2- 3min后，將三角瓶 3放低，使冷凝管2下端離開液面，繼續(xù)蒸懈lmin,然后用少量無C0。蒸餡水沖洗冷凝管2下端，蒸鐳 即告結(jié)束。蒸鐳結(jié)束后，旋緊

8、簧夾7斷絕蒸汽。這時(shí)由于回流管4內(nèi)蒸汽壓立即降低，所以蒸憎瓶1內(nèi)的液體則全部吸入回流管4內(nèi)。然后打開漏斗5下的簧夾，注入蒸館水40-50mL于蒸館瓶1內(nèi)，關(guān)閉漏斗5下的簧夾，打開簧夾7,通入蒸汽加熱洗滌蒸憎瓶1,再斷絕蒸汽，使洗滌回流 至回流管4屮，打開活塞6,將回流管4中廢液棄去，關(guān)閉活塞6,為下次蒸汽做好準(zhǔn)備。滴定。用0. Olmol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定三角瓶3中的吸收液至出現(xiàn)淡紫色為止。記錄所消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（VJo空白試驗(yàn)除不加試樣外，消化、蒸懾、滴定操作與樣品相同。結(jié)果計(jì)算粗蛋白質(zhì)的干基含量按下式計(jì)算：(V2 Vi) CX 0. 0140 A6. 25W (%) =X 100V,m X式屮滴定試樣時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積，mL ;Vi一-滴定空白時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積，mL ;c一一鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L ;m試樣的質(zhì)量，g；V試樣分解液總體積，mL ;/ ' 試樣分解液蒸憎用體積，mL ;0.0140與1. OOmL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液c (HC1)