RP-HPLC法測(cè)定血清中氟脲嘧啶濃度

1、RP-HPLC法測(cè)定血清中氟脲嘧啶濃度摘要應(yīng)用RP-HPLC方法檢測(cè)血清中氟脲嘧啶（Fluorouracil）濃度，本方法采用C18分析柱及預(yù)柱，流動(dòng)相為甲醇-0.5乙酸水溶液（595vv），檢測(cè)波長266nm，血清樣品用乙酸乙酯萃取，氮?dú)獯蹈?，血藥濃度?5ng40gml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.9999，最低檢測(cè)濃度為25ngml。生物樣品的方法回收率為101.2107.7，日內(nèi)日間變異系數(shù)在1.136.24（n5）。關(guān)鍵詞氟脲嘧啶反相高效液相色譜法血藥濃度 Determination of Fluorouracil in Human Serum by RP-HPLCXie Ruixi

2、ang， Fan Fang， Wu Guosen（Institufe of Clinical Pharmacy，F(xiàn)ujing Proviace Tumor Hospital）A method was developed for fluorouracil c oncertration in human serum by RP-HPLCT he analytical and preparing column was f illed with a c18 stationary phase，the mo bile phase consisted of a mixture of met h anol-0

3、5 acetic acid solution （595vv） The detective wavelength was 266nmThe fluorouracil in human serum can be extra c ted well with ethyl acetate and be blowe d dry with N2The calibration curve was linear in the range from 0025 to 40g m l（r09999），the limit of determination w as 25ngml；the rate of recovery

4、 1012 t o 1077the RSD within day and between day were lower than 624（n5）Key wordsFluorouracilRP-HPLCPl asma drug concentration氟脲嘧啶（Fluorouracil）為嘧啶類抗代謝藥，能干擾DNA的合成，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和死亡。臨床上為廣譜抗腫瘤藥，具非常廣泛的應(yīng)用和較好的療效，多年來，國內(nèi)外對(duì)其血藥濃度的測(cè)定已有多方報(bào)道1。本實(shí)驗(yàn)室為了臨床跟蹤測(cè)定，根據(jù)臨床應(yīng)用須準(zhǔn)確、迅速的特點(diǎn)，進(jìn)行了有效的研究，建立了本方法，它具有簡便，靈敏，血清無乳化，色譜柱保護(hù)好的優(yōu)點(diǎn)，完全適用于臨床

5、醫(yī)院開展血藥濃度監(jiān)測(cè)的研究。1儀器和試藥Beckman高效液相色譜系統(tǒng)（包括125泵，168紫外光檢測(cè)器，7725六通閥，黃金系統(tǒng)處理軟件），XW-80旋渦混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠），離心機(jī)（TGL-20G）。氟脲嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品由上海旭東海普藥業(yè)有限公司提供，內(nèi)標(biāo)氟脲嘧啶脫氧苷由浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供；甲醇為色譜純；硫酸鋅，乙酸乙酯，乙酸均為分析純；重蒸水由本實(shí)驗(yàn)室自備。2色譜條件流動(dòng)相為甲醇：0.5乙醇溶液（595vv）。流速1mlmin，色譜柱為BeckmanODS預(yù)柱（4.6mm5cm），ODS分析柱（4.6mm25cm）紫外檢測(cè)波長266nm。3實(shí)驗(yàn)方法取含氟脲嘧啶血清0.5ml，

6、置5ml具塞試管中，加入5l內(nèi)標(biāo)（5g）和50硫酸鋅溶液0.25ml，手搖使沉淀溶解，再加入5ml乙酸乙酯，振蕩混合1.5min，離心（3000rmin5min）。取有機(jī)層在40水浴上氮?dú)獯蹈?，?00l0.5乙酸溶液溶解，20l進(jìn)樣。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1色譜用上述色譜條件及方法進(jìn)樣后結(jié)果顯示氟脲嘧啶與內(nèi)標(biāo)有極好的分離，且無內(nèi)源性雜質(zhì)干擾（見1）。1色譜a空白血清b氟脲嘧啶色譜c氟脲嘧啶內(nèi)標(biāo)色譜4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備氟脲嘧啶貯備液為1mgml的水溶液，內(nèi)標(biāo)為1mgml4冰箱保存?zhèn)溆?，取健康人血?.5ml分別加入適量標(biāo)準(zhǔn)貯備液配成氟脲嘧啶濃度為0.05、0.20.0.80、2.00.10.40gml

7、的標(biāo)準(zhǔn)血清，按上述實(shí)驗(yàn)及色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以氟脲嘧啶濃度為x軸，測(cè)得的氟脲嘧啶峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為y軸，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果得回歸方程y0.5409x0.0142，r0.9999，最低檢測(cè)限為5ng，最低檢測(cè)濃度為25ngml。4.3回收率試驗(yàn)各取血清0.5ml，分別加入0.1g，0.4g，1.0g（各5支）氟脲嘧啶貯存液，按上述實(shí)驗(yàn)方法及色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得值代入回歸方程y0.5409x0.1442計(jì)算血清中氟脲嘧啶含量（gml）（見表1）。表1回收率試驗(yàn)藥物濃度（gml）平均測(cè)定濃度（gml）平均回收率（）RSD（）日內(nèi)日間0.20000.2130106.56.245.330.800

8、00.8606107.73.851.132.0002.023101.23.124.215討論5.1實(shí)驗(yàn)方法和色譜條件的選擇反復(fù)實(shí)驗(yàn)顯示，血清在振蕩時(shí)可產(chǎn)生嚴(yán)重的乳化，從而影響到有機(jī)相的萃取和取出量，加入少量硫酸鋅溶液可極大地減少乳化和提高回收率，在流動(dòng)相中加入0.5的乙酸則可大大地改善和穩(wěn)定峰形，提高分離度，同時(shí)使氟脲嘧啶的保留時(shí)間縮短，但隨著乙酸加入量的增加又會(huì)使之受雜質(zhì)峰干擾，乙酸加入減少則峰形欠佳，經(jīng)調(diào)整后，流動(dòng)相最佳比例確定為甲醇：0.5乙酸溶液595（vv）。5.2氟脲嘧啶在體內(nèi)的半衰期為711min2，對(duì)它的測(cè)定必須尋找快速、準(zhǔn)確的方法3，才能適應(yīng)臨床應(yīng)用，測(cè)定結(jié)果表明，本方法可在分離血清后2530min內(nèi)得出數(shù)據(jù)，所以對(duì)臨床醫(yī)院進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究和血濃監(jiān)測(cè)具有較大的優(yōu)勢(shì)。作者單位：福建省腫瘤醫(yī)院藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室參考文獻(xiàn)1.孟旭等：人血漿中5-氟脲嘧啶的高效液相色譜測(cè)定