實(shí)驗(yàn)二十四尿藥法測(cè)定核黃素片劑消除速度常數(shù).

1、實(shí)驗(yàn)二十四尿藥法測(cè)定核黃素片劑消除速度常數(shù)、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 熟悉尿藥法在藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。2. 掌握尿藥法計(jì)算消除速度常數(shù)的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理藥物在體內(nèi)過程是一個(gè)整體，吸收、分布、代謝、排泄等過程既有區(qū)別，又有 聯(lián)系，觀察一個(gè)方面的變化，?？砷g接地認(rèn)識(shí)另一方面的情況，所以藥物在體內(nèi)的速度過程變化規(guī)律，既可用血藥法來估算，也可用尿藥法來估算。在多數(shù)情況下，尿藥濃度高于血藥濃度， 定量分析精密度好， 測(cè)定方法較易建 立，而且取樣方便，受試者可免受多次抽血的痛苦。因此，在體內(nèi)藥物大部分以原 形從尿中排除條件下，通?？捎媚蛩幏ü浪阆俣瘸?shù)、生物半衰期等動(dòng)力學(xué)參數(shù)。尿中原形藥物的瞬時(shí)排泄速度，可

2、用下列微分式表示：Xu=KeX（ 1）dtKe為表觀一級(jí)排泄速度常數(shù)，Xu為t時(shí)尿中原形藥物的累計(jì)排泄量， 時(shí)間體內(nèi)存有的藥量。在靜脈給藥時(shí)，體內(nèi)藥量的經(jīng)時(shí)過程可由下式表示：(2)X=Xoe-ktXo為給藥劑量，K為表觀一級(jí)消除速度常數(shù)。將（2）式中X值代入（1）式后得：數(shù)=2dt兩邊取對(duì)數(shù)得：logdXu . V Kt/ 八=logK eXo- （ 4） dt2.303由（4）式可見，原形藥物排泄速度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖為一直線，其斜率為K2.303 與血藥濃度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖所求的斜率相同。 消除速度常數(shù)。若口服給藥，（4）式適用于靜脈給藥后求算則體內(nèi)藥量經(jīng)時(shí)過程可由下式表示:KaXoF （

3、e-Kt e-Kat）Ka KKa為表觀一級(jí)吸收速度常數(shù)。尿中原形藥物的瞬時(shí)排泄速度可用（X=5）式代入（1）式得:dXu_ KeKaFXo -Kt _ a一(e edt Ka K當(dāng)Ka>K, t充分大時(shí)，則e-kat7 0, (5)式簡(jiǎn)化為:-Kat )(6)dXu = KeKaFXo e-Kt drKa K兩邊取對(duì)數(shù)得：(7)logdXu =log KeKaFXo _ Kt "dTKa K2.303(8)對(duì)t作圖，可得到一條二項(xiàng)指數(shù)曲線，從K。由上述關(guān)系式可見，若以logXu/dt其后段直線的斜率可求出一級(jí)消除速度常數(shù)通過實(shí)Xu,貝 yK會(huì)出由于尿中原形藥物排泄速度的瞬時(shí)變

4、化率是不可能用實(shí)驗(yàn)方法求算的，驗(yàn)只可求出平均排泄速度，設(shè)在一段時(shí)間間隔t內(nèi)藥物的排泄速度量為平均排泄速度為Xu，這樣（4 ）或（8 ）式可改寫如下：tlogXu -logKeXo K t 中 t2.303(9)logXu . KeKaXoFK +-log t 中(10)tKa K 2.303由于實(shí)驗(yàn)中采取平均排泄速度代替瞬時(shí)排泄速度，求得的消除速度常數(shù)現(xiàn)一些誤差。但若以恒定的時(shí)間間隔集尿，其時(shí)間間隔不大于一個(gè)藥物的半衰期時(shí),則僅發(fā)生2%M內(nèi)的偏差。（一）服藥及尿樣收集1.倒掉。2.三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作服藥前一天收集 24小時(shí)尿液，每次收集尿液后量體積，取10ml保留，其余臨服藥前排空小便。早餐后

5、立即服用核黃素片三片（5毫克/片），用溫水吞服不嚼碎，記錄服藥時(shí)間。4. 按藥片服下后的第 2、4、6、& 10小時(shí)收集尿液，用量筒取并記錄尿液體積，然后，將尿液倒入盛有0.2毫升冰醋酸的刻度試管內(nèi)至20毫升，搖勻，于陰涼避光處保存。5. 注意點(diǎn)：（1）每次收集尿液后飲 200毫升左右水以維持尿量。（2）每次大便時(shí)收集小便，切勿損失。（3）試驗(yàn)期間（包括服藥前一天）控制食譜，不能吃含有核黃素的食物，如：蛋類、牛奶、麥乳精、奶糖等。并不得服用含有B族維生素的藥品。（二）尿液中核黃素含量的測(cè)定1. 原理：可以由加入保的差值，來計(jì)算尿液核黃素的異咯嗪環(huán)上具有活潑的雙鍵，能接受和放出氫原子，在

6、保險(xiǎn)粉（連 二亞硫酸鈉）的作用下，能還原為無色雙氫核黃素，利用這一特性， 險(xiǎn)粉前后二次測(cè)得的吸收度 （核黃素在波長444nm處有吸收） 中核黃素的含量。2. 方法（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取105 C干燥2小時(shí)的核黃素對(duì)照品 50毫克于500毫升容量瓶中，加 0.02mol/L醋酸液稀釋至300毫升，置水浴加熱溶解后，放冷至室溫，用0.02mol/L 醋酸液稀釋至刻度， 搖勻即得，每1毫升中含核黃素100微克，然后加入甲苯覆蓋 上面，置涼暗處保存。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液 0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0毫升分別置于10毫升容量 瓶中，用酸化蒸餾水（每 100毫升蒸餾水

7、中含1毫升冰醋酸）稀釋至刻度，搖勻。 以酸化蒸餾水作空白，用721或722型分光光度計(jì)，在 444nm波長處測(cè)定吸收度，然后，在每管中各加保險(xiǎn)粉約3毫克，搖勻。在一分鐘內(nèi)再次測(cè)定吸收度。兩次測(cè)定值之差，即為核黃素的吸收度，以此值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.111（3）尿樣中核黃素含量測(cè)定尿樣測(cè)定照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法。從“以酸化蒸餾水作空白”起，依法測(cè) 定吸收度，以兩次測(cè)定值之差，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出尿液中核黃素的含量。以上操作步驟，均須注意避光。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1.原始記錄服藥后尿液收集與測(cè)定數(shù)據(jù)表1空白尿藥測(cè)定數(shù)據(jù)A （未加保險(xiǎn)粉）A （加保險(xiǎn)粉）A-A2C空白尿體積（毫升）：空白尿中排泄核黃素的總 Xu量: 平均每2小時(shí)排泄核黃素的ug數(shù)：表2尿樣的原始記錄試管號(hào)集尿時(shí)刻（hr）集尿時(shí)間間隔（hr）尿量（ml）空白12345表3尿藥測(cè)定記錄試管號(hào)A1 （未加保險(xiǎn)粉）A2（加保險(xiǎn)粉）A1-A2C空白12345表4尿藥法動(dòng)力學(xué)分析記錄試管號(hào)集尿時(shí)間間 隔t）中點(diǎn)時(shí)間（t中） Xu(mg平均排泄速度（ Xu/ t）log Xu t空白123452.繪制尿藥排泄速率二項(xiàng)指數(shù)曲線。3.從二