淺談殼寡聚糖對變形鏈球菌表面疏水性的影響

1、淺談殼寡聚糖對變形鏈球菌表面疏水性的影響    核心提示：中文摘要：目的:研究殼寡聚糖對變形鏈球菌細胞表面疏水性的影響,從而進一步了解殼寡聚糖影響細菌黏附的機制。方法:使用不同濃度(10-2、10-1、1g/L)的殼寡聚糖溶液處理變形鏈球菌,并采用微生物黏著碳氫化合物法測試細胞表面疏水性。結(jié)果:隨殼寡聚糖濃度增加,變形鏈球菌ATCC25175細胞表面疏水性.中文摘要：目的:研究殼寡聚糖對變形鏈球菌細胞表面疏水性的影響,從而進一步了解殼寡聚糖影響細菌黏附的機制。方法:使用不同濃度(10-2、10-1、1g/L)的殼寡聚糖溶液處理變形鏈球菌,并采用微生物黏著

2、碳氫化合物法測試細胞表面疏水性。結(jié)果:隨殼寡聚糖濃度增加,變形鏈球菌ATCC25175細胞表面疏水性有顯著性降低。結(jié)論:殼寡聚糖可能通過降低細菌表面疏水作用而抑制變形鏈球菌的黏附。     作者簡介：周智（1971 -），男，漢族，四川內(nèi)江人。博士生（導(dǎo)師：胡德渝），講師，主治醫(yī)師。殼寡聚糖對變形鏈球菌表面疏水性的影響周 智，范 旭，李 雪，胡德渝 （四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610041） 摘 要 目的：研究殼寡聚糖對變形鏈球菌細胞表面疏水性的影響，從而進一步了解殼寡聚糖影響細菌黏附的機制。方法：使用不同濃度（10 -2、10 -1、1 g

3、/ L）的殼寡聚糖溶液處理變形鏈球菌，并采用微生物黏著碳氫化合物法測試細胞表面疏水性。結(jié)果：隨殼寡聚糖濃度增加，變形鏈球菌 ATCC 25175 細胞表面疏水性有顯著性降低。結(jié)論：殼寡聚糖可能通過降低細菌表面疏水作用而抑制變形鏈球菌的黏附。關(guān)鍵詞變形鏈球菌；疏水性；殼寡聚糖牙體牙髓牙周病學(xué)雜志，2005，15（6）：309 （College of Stomatology，Sichuan University，Chendu 610041，China） Abstract AIM：To study the effect of chitooligosaccharide on cell - surfac

4、e hydrophobicity of StreptococcusKey wordsStreptococcus mutans；hydrophobicity；chitooligosaccharideChinese Journal of Conservative Dentistry，2005，15（6）：309變形鏈球菌（ Streptococcus mutans，S. mutans）是口腔中主要的致齲菌，具有較強的黏附于牙面的能力，而細菌胞體表面疏水性（ cell surface hydro-始黏附中起重要作用。研究證實，殼寡聚糖對變形鏈球菌的生長代謝有一定的抑制作用，并對黏附有一定影響1 -

5、3。本研究采用微生物黏著碳氫化合物法，測試不同濃度的殼寡聚糖對變形鏈球菌胞體表面疏水性的影響，旨在探求殼寡聚糖是否影響變形鏈球菌的非特異性疏水作用，并進一步了解殼寡聚糖影響變鏈菌黏附的相關(guān)機制。 1 材料和方法 1. 1 實驗菌株及主要試劑 生物醫(yī)學(xué)重點實驗室提供。殼聚糖，平均相對分子質(zhì)量 Mr 為 104，山東濟南海得貝海洋生物工程有限公司提供。十六烷（Fluka，進口分裝）。 PUM緩沖液4：含 K2HPO4?3H2O 22. 2 g / L，本實驗采用 BHI（Biomerieux Sa，法國）液體培?903?牙體牙髓牙周病學(xué)雜志（Chin J Conserv Dent）2005，15（

6、6）轉(zhuǎn)載養(yǎng)基。將 S. mutans ATCC 25175 凍干菌株復(fù)蘇，并接種于 BHI血瓊脂平板，在 37厭氧（800 mL / L N2、及生化實驗鑒定為純培養(yǎng)物后，挑取單菌落至 BHI液體培養(yǎng)基中，37厭氧（800 mL / L N2、100 mL / L殼寡聚糖對 S. mutans ATCC 25175 表面疏水性 CSH的影響：實驗分為空白對照組和實驗組?？瞻讓φ战M的菌體用 PUM 緩沖液處理，實驗組使用 3 個濃度的殼寡聚糖處理，即：10 -2、10 -1及本實驗采用微生物黏著碳氫化合物法（micro-鏈球菌表面疏水性。將培養(yǎng)好的細菌懸液以洗滌 3 次，每次 3 mL。以 PU

7、M 緩沖液為空白對照，分光光度計（日本島津，UV - 1601 型）660 nm波長下，用 PUM 緩沖液調(diào)整各管菌液濃度 A 值為入濃度為 10 -2、10 -1及 1 g / L 的殼寡聚糖溶液濃度后的菌液加入 400 ?L 十六烷，震蕩 60 s，使充 分混勻，靜置 15 min，使分層。取水相，分光光度計 上 660 nm波長測定吸光度（A）值。各濃度均平行測 5 管，每管分別測 3 次，記錄平均值。按下列公式計算細菌細胞表面疏水率，疏水率 = （初始 A660 -加十六烷后 A660）×100% /初始 A660。 使用 SPSS 11. 5 統(tǒng)計軟件，用單因素方差分析 （

8、ANOVA），比較各組總體均數(shù)間差別有無統(tǒng)計學(xué) 意義；用 Tukey檢驗方法進行組間樣本均數(shù)的兩兩比較。殼寡聚糖對變形鏈球菌表面疏水性的影響見表 1。如表所示：S. mutans ATCC 25175 細菌表面疏水性隨殼寡聚糖濃度增加而降低，經(jīng)統(tǒng)計分析，各濃度組與空白對照組相比均有顯著性差異 （P < 0. 05）；殼寡聚糖各濃度組間也有顯著性差異 （P < 0. 05）。 表 1 不同濃度殼寡聚糖對 S. mutans ATCC 25175表面疏水性的影響濃度（g / L） 樣本數(shù) 疏水率（%）變形鏈球菌在牙齒表面黏附定植，是其形成菌斑并產(chǎn)生致齲作用的前提條件。目前認(rèn)為：變形鏈球

9、菌在牙面的黏附過程，受到包括有諸如鈣橋作用、靜電引力作用、疏水作用，以及細菌表面特異性黏附素與受體的特異性結(jié)合等多種機制的影響。疏水性是指非極性溶液或溶質(zhì)在極性水中所呈現(xiàn)的不穩(wěn)定狀態(tài)，從而引起一系列熱能和分子重新分布及排列的變化6。疏水作用是以分子間彼此相近結(jié)構(gòu)的配合為基礎(chǔ)。細菌表面疏水性（cell宿主反應(yīng)的因素之一，與細菌對口腔組織的黏附、細菌之間的集聚，以及細菌的抗吞噬有關(guān)。疏水作用在介導(dǎo)變形鏈球菌黏附過程中起著一定的作用。表面疏水性越強的細菌黏附力越強7。研究表明，細菌細胞表面附著器（ adhesins），如 SpaA、器（ receptors）也具有疏水性。CSH 的強弱與細菌表面蛋白

10、、菌毛、脂磷壁酸、莢膜等附著器有關(guān)，被認(rèn)為與細菌的特異性黏附相關(guān)5，8。吸附對二甲苯 p - xylene 能力的影響，發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過與對二甲苯的親和力隨殼寡聚糖濃度增高而下降。研究所觀察到的殼寡聚糖對變形鏈球菌細胞表面疏水性的抑制作用，提示殼寡聚糖可能對變形鏈球菌細菌表面的疏水性分子表達有抑制作用1。本實驗結(jié)果表明：隨殼寡聚糖濃度增高（10 -2 1 g / L），變形鏈球菌的細胞表面疏水性有顯著性的下降。這一結(jié)果與 Tarsi等的研究一致。?013? 牙體牙髓牙周病學(xué)雜志（Chin J Conserv Dent）2005，15（6）我們推測殼寡聚糖對變形鏈球菌的黏附抑制可能有多個原因：通過攜帶

11、的正電基團與細菌表面攜帶負(fù)電荷的結(jié)構(gòu)結(jié)合，而改變細菌表面電荷分布，從而影響表面疏水性物質(zhì)（如表面蛋白）而改變其構(gòu)型，影響細菌的疏水性。殼寡聚糖可能通過對細菌生長代謝的抑制作用，而影響并改變細菌對物體表面的黏附性能。有研究表明，殼聚糖對變形鏈球菌的生長代謝有抑制作用3。但上述結(jié)果是否由于殼寡聚糖特異性，影響了細菌表面的某類疏水性物質(zhì)所致，尚待進一步研究論證。 參考文獻： 1 Tarsi R，Corbin B，Pruzzo C，et al. Effect of low molecular weight2 Virga C，Beltramo D，Landa C，et al. A comparative

12、 study in vivo3 張雅萍，楊圣輝. 甲殼胺影響變鏈菌酸性代謝產(chǎn)物的研究J.北京口腔醫(yī)學(xué)，2001，9（1）：4 - 54 Rosenberg M，Gutnick D，Rosenberg E. Adherence of bacteria to5 陳罕，樊明文，邊專，等. 變形鏈球菌表面蛋白不同表達株的疏水性研究J.口腔醫(yī)學(xué)縱橫雜志，1997，13（4）：195 - 1976 Dill KA. The meaning of hydrophobicity J. Science，1990，250 （4978）：297 - 298 7 周學(xué)東，主編. 口腔生物化學(xué)M.成都：四川大學(xué)出版社，

13、8 周學(xué)東，肖曉蓉，主編.口腔微生物學(xué)M.成都：四川大學(xué)出版社，= =基層園地氫氧化鈣在下頜化膿性根尖周炎中的臨床應(yīng)用張春燕 （山東省立醫(yī)院口腔科，山東 濟南 250021） 氫氧化鈣作為一種根管消毒藥物，在根管治療中得到廣泛應(yīng)用。筆者近年來收治 20 例下頜慢性根尖周炎患者，應(yīng)用碘仿氫氧化鈣糊劑封藥后，控制感染，使患牙得以治愈。性尖周炎患者，共計 16 例 20 個患牙，經(jīng)常規(guī)根管預(yù)備，沖洗，F(xiàn)C封藥無效，根管內(nèi)或竇道反復(fù)有膿性分泌物，X線片示根尖周密度減低。應(yīng)用氫氧化鈣糊劑（上海第二醫(yī)科大學(xué)張江生物材料有限公司，散劑為氫氧化鈣，溶液為丙二醇和水）加入少量碘仿（5 : 1）調(diào)拌均勻成稠糊狀，

14、擴大針將其導(dǎo)入至根尖部，盡量充滿根管，允許少量超充。磷酸鋅水門汀暫封或玻璃離子水門汀充填。術(shù)后 1 周到 4 個月復(fù)診。竇道口無分泌物，行根管充填。3 例 5 個患牙術(shù)后 2 周復(fù)診，根管內(nèi)無滲出，無叩痛，行根管充填。根尖囊腫者同時行根尖刮治術(shù)。其余 3 例 3 個患牙分別于術(shù)后 1、2、4 個月后復(fù)診，至根管內(nèi)無滲出，無叩痛，竇道愈合，X線片示根尖稀疏區(qū)縮小，行根管充填。近年來，氫氧化鈣作為一種根管內(nèi)封藥，在多種牙髓及根尖周疾病的治療中得以廣泛應(yīng)用，它在殺滅微生物和減輕兩次約診之間的癥狀，以及減低對根尖組織的毒性等方面表現(xiàn)出優(yōu)良的效果。有研究表明，氫氧化鈣具有高效的抗厭氧菌作用，對內(nèi)氏放線菌和衣氏放線菌也有殺菌效能，還能顯著降低 G -內(nèi)毒素的生物活性，還可以抑制根尖組織溶解和尖周組織的吸收，誘導(dǎo)根尖周骨缺損的修復(fù)。本組中下頜慢性根尖周炎病例均經(jīng)常規(guī)封藥無效。使用的氫氧化鈣粉劑與丙二醇和水調(diào)勻后成稠糊狀，較易導(dǎo)入根管。丙二醇作為一種黏性賦形劑也是可溶于水的物質(zhì)，但是釋放離子的速度較慢，可維持較長的時間。加入碘仿，X線顯示彌散點狀致密影像，可以觀察充填情況。同時，碘仿具有殺菌和使細胞產(chǎn)生氧化的作用，且作用持久，對組織無刺