高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯唑沙宗片中兩組分血藥濃度

1、    高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯唑沙宗片中兩組分血藥濃度        摘要：目的建立同時(shí)測(cè)定血清中復(fù)方氯唑沙宗片兩組分濃度的HPLC。 方法血清樣品經(jīng)飽和硫酸鋅溶液沉淀，乙醚提取，氮?dú)鈸]干，加甲醇 溶解進(jìn)樣，以Hypersil ODS C18色譜柱，甲醇-水(4555)為流動(dòng)相，非那西丁為內(nèi) 標(biāo)，在波長(zhǎng)280 nm處檢測(cè)。結(jié)果氯唑沙宗在132 gml-1、 對(duì)乙酰氨基酚在1.238.4 gml-1濃度范圍內(nèi)，樣品峰面積比與濃度呈良好線性 關(guān)系，r氯=0.9994，r對(duì)=

2、0.9999。最低檢測(cè)濃度分別為0.5和0.6 gml -1，平均回收率分別為95.3%和91.6%。RSD分別為6.0%，5.1%。結(jié)論 此法可同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯唑沙宗片兩組分的濃度，為藥物動(dòng)力學(xué)和生物利用度研究 提供了簡(jiǎn)單可行的方法。關(guān)鍵詞：血藥濃度；高效液相色譜法；氯唑沙宗；對(duì)乙酰氨基酚中分類號(hào)：TQ460.7+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1001-2494(2000)11-07 63-03Determination of two component concentrations of complex chlorzoxazone tablets in human serum by HPLCFU

3、 Guang-hua,LIU Mei-juan,HAN Jing,CHEN Kai-yu,CHEN Chang-so ng,JIANG Zhi-ping,SHEN Li-nan（Shandong Linyi Institute for Drug Control,Linyi 276001,China）ABSTRACT：OBJECTIVETo establish a HPLC method for the simul taneous determination of two component concentrations of complex chlorzoxazone t ablets in

4、human serum.METHODSThe serum samples were precipi tated with saturated Zinec sulfate solution,extracted with Ether,dried with Nitr ogen gas,dissolved in Methanol and determined with HPLC.The Hypersil ODS-C1 8 column was used.The mobile phase consisted of methanol-water (4555) phen acetinum was used

5、as the internal standard.It was detected at 280 nm. RESULTSA linearity was obtained from 1.0 to 32.0 g.ml-1 of ch lorzoxazone (r=0.9994) and from 1.2 to 38.4 g.ml-1 of acetaminophen (r=0.9999),respectively.The limits of detection were 0.5 and 0.6 g.ml -1,respectively.Their average recoveries were 95

6、.3% and 91.6%,respectively.T he precision (RSD) were 6.0% and 5.1%,respectively.CONCLUSIONThis study provided a simple and reliable assay which can be used to simul taneously determine two component concentrations of complex chlorzoxazone tablet s in human serum and to reseach their pharmacokinetics

7、 and bioavailability.KEYWORDS：serum;HPLC;chlorzoxazone;acetaminophen復(fù)方氯唑沙宗片是中樞性骨骼肌松弛劑氯唑沙宗和抗炎鎮(zhèn)痛藥對(duì)乙酰氨基酚組成的復(fù)方制劑 。臨床主要用于各種急、慢性軟組織挫傷所引起的疼痛及肩周炎、關(guān)節(jié)炎、肌炎、肌纖維炎 等癥，已取得良好效果。氯唑沙宗和對(duì)乙酰氨基酚在鎮(zhèn)痛方面的協(xié)同作用，使其比單方氯唑 沙宗療效更顯著，不良反應(yīng)小，而其療效和毒性與血藥濃度密切相關(guān)，故建立快速、靈敏和 準(zhǔn)確的血藥濃度分析方法是非常必要的，也是臨床藥學(xué)研究的重要課題。由于該藥是一新藥 ，目前作者尚未見(jiàn)有同時(shí)測(cè)定兩組分血藥濃度方法的研究和報(bào)

8、道。本實(shí)驗(yàn)參考有關(guān)資料 15建立了同時(shí)測(cè)定氯唑沙宗、對(duì)乙酰氨基酚兩組分在血清中濃度的方法，方法專一 性強(qiáng)，快速準(zhǔn)確，為人體血藥濃度監(jiān)測(cè)及生物利用度研究提供了可靠方法和依據(jù)。1材料與方法1.1儀器與色譜條件SP8800高效液相色譜泵；SP100紫外檢測(cè)器；SP4290積分儀(美國(guó)光譜物理公司)。Hypersil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 m，大連依利特科學(xué)儀器有限公司)；流動(dòng)相：甲醇 -水(4555)，流速為1 mlmin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，檢測(cè)靈敏度0.1 AUFS，紙 速0.25 cmmin-1。1.2藥品與試劑氯唑沙宗對(duì)照品(99.9%)、對(duì)乙酰

9、氨基酚對(duì)照品(99.8%)、非那西丁對(duì)照品(純度為98.7%)， 均由魯南制藥廠提供；甲醇(色譜純)；其它試劑均為AR級(jí)。復(fù)方氯唑沙宗片(魯南制藥廠)。 1.3貯備液取氯唑沙宗對(duì)照品和對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品適量，分別制成0.5 mgml-1和0.6 mgml -1的甲醇溶液，410儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?周配一次。非那西丁甲醇溶液(0.1 mgml -1)作為內(nèi)標(biāo)。1.4樣品處理1.4.1血清樣本精密吸取血清1 ml置10 ml具塞試管中，加入 0.1 mgml-1內(nèi)標(biāo)0.1 ml，置振蕩器中混合2 min，加飽和硫酸鋅溶液1 ml，乙醚5 m l，混合2 min后，離心20 min(3500 rmin-1

10、)。精密吸取上清液3.0 ml于50氮?dú)?吹干，冷至室溫，溶于200 l甲醇中，進(jìn)樣10 l。1.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取空白血清1 ml，分別配制成 濃度為1.0，2.5，5.0，10.0，20.0，40.0 gml-1的氯唑沙宗片血清標(biāo)準(zhǔn)系列和 濃度為1.2，3.0，6.0，12.0，24.0，48.0 gml-1的對(duì)乙?；友鍢?biāo)準(zhǔn)系 列。其余操作同血清樣本處理過(guò)程。分別以氯唑沙宗、對(duì)乙酰氨基酚濃度對(duì)樣品與內(nèi)標(biāo)峰面 積比(As/Ai)作直線回歸方程。2結(jié)果2.1色譜行為選用280 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，在選定的色譜條件下，對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)基線分離，空白血清層析 譜中對(duì)應(yīng)對(duì)乙酰氨基酚、氯唑沙

11、宗和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間4.65，24.68，13.48 min處無(wú)峰 出現(xiàn)，與各雜質(zhì)峰分離良好。見(jiàn)1。1復(fù)方氯唑沙宗血清樣本色譜-空白血清；-含藥血清；A-對(duì)乙酰氨基酚(4.65 min)；B-內(nèi)標(biāo)(13.48 min)；c-氯 唑沙宗片(24.68 min)2.2線性關(guān)系和靈敏度血清中氯唑沙宗濃度在1.032.0 gml-1，對(duì)乙酰氨基酚濃度在1.238.4 g ml-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。回歸方程分別為c氯=-0.0576+4.0328A/ Ai，r=0.9994；c對(duì)=0.4987+17.1078 A/Ai，r=0.9999。最低檢測(cè)濃度 氯唑沙宗為0.5 gml-1，對(duì)乙酰氨基酚為0.6

12、 gml-1。2.3精密度試驗(yàn)配制不同血藥濃度的樣品，按血樣項(xiàng)下操作，進(jìn)行日內(nèi)和日間精密度考察，結(jié)果見(jiàn)表1。表1氯唑沙宗和對(duì)乙酰氨基酚精密度測(cè)定結(jié)果.n=5 ,±s藥物實(shí)驗(yàn)濃度/gml -1日內(nèi)日間測(cè)定值/gml-1RS D/%測(cè)定值/gml-1RSD/%氯唑沙宗1.00.98±0.055.50.90±0.077.810.09.37±0.394.29.37±0.212.220.018.96±1.136.019.79±0.763.9對(duì)乙酰氨1.21.07±0.055.41.10± 0.054.7基酚12.0

13、10.79±0.573.311.29±0.616.024.021.38±0.502.422.08±1.285.82.4回收率試驗(yàn)取已知含氯唑沙宗為1.0，10.0，20.0 gml-1和對(duì)乙酰氨基酚1.2，12.0，24.0 gml-1濃度的血清樣品，按血樣項(xiàng)下操作，測(cè)定含量(n5)，計(jì)算方法回收率，氯唑沙宗分別為(95.52±8.7)%，(96.10±2.3)%，(94.34±5.6)%，對(duì)乙酰氨基酚 分別為(91.14±4.3)%，(92.09±3.5)%，(91.46±5.3)%。2.5健

14、康人血藥濃度測(cè)定由4名健康志愿者空腹單劑量口服復(fù)方氯唑沙宗片，采血時(shí)間為服藥前0(h)及服藥后0.5，1. 0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 h，定時(shí)上肢靜脈取血5 ml。離心分 離血清，按樣品處理項(xiàng)下操作測(cè)定。藥-時(shí)曲線見(jiàn)2。2復(fù)方氯唑沙宗濃度-時(shí)間曲線A-對(duì)乙酰氨基酚；B-氯唑沙宗3討論3.1本法應(yīng)用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定血清中復(fù)方氯唑沙宗片 兩組分濃度，方法重現(xiàn)性好，回收率高，日內(nèi)日間變異小，為臨床血藥濃度監(jiān)測(cè)及藥物動(dòng)力學(xué)的研究提供了簡(jiǎn)單可行的方法。3.2建立血清測(cè)定法時(shí)，曾選用其他蛋白沉淀劑，但對(duì)乙酰氨 基酚不能與血清雜質(zhì)峰有效分離，改用ZnSO4

15、作蛋白沉淀劑后，使對(duì)乙酰氨基酚與血樣雜 質(zhì)峰取得良好分離。3.3本實(shí)驗(yàn)僅有4名志愿者進(jìn)行血藥濃度測(cè)定預(yù)實(shí)驗(yàn)，服藥后1 2 h氯唑沙宗和對(duì)乙酰氨基酚達(dá)到吸收頂峰，4 h后氯唑沙宗消除速度加快，與文獻(xiàn)報(bào)道 5相符。伏光華（山東臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）劉梅娟（臨沂市第六人民醫(yī)院，山東 臨沂 276001）韓靜（山東臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）陳開(kāi)玉（山東臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）陳常松（山東臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）姜志平（山東臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）沈麗楠（山東臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）參考文獻(xiàn)1呂萬(wàn)良，屠錫德，蔣文蕾，等.對(duì)乙酰氨基酚溶 劑及其藥物動(dòng)力學(xué)研究J.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，27(3)：151.2Gilpin RK,Gandet MH.Rapid high-performan ce liquid chromatographic determination ofacetaminophon in dosage form using a t otally aqueous mobile phaseJ.