實(shí)驗(yàn)三鹽析沉淀

1、 實(shí)驗(yàn)三 （一）鹽析沉淀【實(shí)驗(yàn)原理】 在蛋白質(zhì)溶液中加入適量的無(wú)機(jī)鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉）濃溶液會(huì)使蛋白質(zhì)析出，這種作用稱(chēng)為蛋白質(zhì)的鹽析作用。當(dāng)鹽濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。降低鹽溶液濃度后，由鹽析作用獲得的蛋白質(zhì)沉淀能再溶解，因此蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過(guò)程。 鹽析法分離蛋白質(zhì)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)制品的制備和個(gè)別蛋白質(zhì)的分離、純化?！緦?shí)驗(yàn)材料】1. 蛋白質(zhì)溶液：5%卵清蛋白溶液或雞蛋清水溶液（新鮮雞蛋清：水=1：9）；2. 飽和硫酸銨溶液；3. 固體硫酸銨【實(shí)驗(yàn)方法】 1.取錐形瓶一個(gè)，加入蛋白質(zhì)溶液5.0ml，再加等

2、量的飽和硫酸銨（半飽和硫酸銨)溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘，則析出球蛋白。將混合液轉(zhuǎn)移至兩離心管（等量）中，2000rpm離心5min，小心將上清夜轉(zhuǎn)移至小燒杯；向沉淀中加少蒸餾水，觀察是否溶解，為什么？ 2.向小燒杯中上清液添加硫酸銨粉末，邊加邊搖，直至不再溶解為止，此時(shí)析出的沉淀為清蛋白。轉(zhuǎn)移至兩離心管（等量）中，2000rpm離心5min，棄上清，向清蛋白沉淀中加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。 蛋白質(zhì)溶液 5.0ml 飽和硫酸銨 5.0ml 放錐形瓶中，混勻， 靜置數(shù)分鐘 至兩離心管中（等量） 2000rpm離心5min 取上清液至小燒杯 球蛋白沉淀 添加硫酸銨粉末， 加少量H2O 邊加邊搖

3、？ 再溶解 至兩離心管中（等量） 2000rpm離心5min 棄上清 清蛋白沉淀 加少量H2O ？ 再溶解思考：1.鹽析后球蛋白沉淀加水再溶解后，加熱，再加水，是否溶解？ 2.清蛋白沉淀加水后再溶解，用何方法可再沉淀而不變性？ （二） 茚三酮反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)原理】 除了脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應(yīng)生成黃色物質(zhì)外，所有-氨基酸和蛋白質(zhì)都合茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)。具有氨基或能釋放氨的化合物都有此反應(yīng)，但尿素、馬尿二酮吡嗪和肽鍵上的亞氨基不呈現(xiàn)此反應(yīng)。因此，蛋白質(zhì)和氨基酸的茚三酮反應(yīng)不是特異性反應(yīng)，在定性定量測(cè)定中，應(yīng)嚴(yán)防干擾物存在。該反應(yīng)十分靈敏，1：150 000濃度的氨基酸水溶液即能出現(xiàn)反應(yīng)，是一種常用的氨基酸定量測(cè)定方法。 【實(shí)驗(yàn)材料】1.蛋白質(zhì)溶液：5%卵清蛋白溶液或雞蛋清水溶液（新鮮雞蛋清：水=1：9）；%甘氨酸溶液；%茚三酮水溶液：%茚三酮乙醇溶液 【實(shí)驗(yàn)方法】2.取小塊濾紙，加一滴0.5%甘氨酸溶液，用電吹風(fēng)吹干后在原處加一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，再用電吹風(fēng)烘干顯色，觀察紫紅色斑點(diǎn)的出現(xiàn)。 試劑 1號(hào)試管 2號(hào)試管蛋白質(zhì)溶液 1ml -0.5%甘氨酸溶液； -