大豆異黃酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用

1、大豆異黃酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用葉和楊, 張小玲1, 周 莉2, 汪秀榮2, 肖漢躍2, 何 蔚, 曾 靖(贛南醫(yī)學(xué)院藥理教研室; 1附屬醫(yī)院兒科; 2機能實驗室, 贛州 341000摘 要 目的:觀察大豆異黃酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用。方法:每次分別灌入10m g /ml 、5mg /ml 大豆異黃酮溶液1m l/100g或等體積生理鹽水每天一次15天。結(jié)扎冠狀動脈左前降支使心肌缺血、40m i n 后恢復(fù)血流并持續(xù)120m i n 復(fù)制缺血再灌注損傷模型。測定心肌組織丙二醛和超氧化物歧化酶、血清乳酸脫氫酶、磷酸肌酸激酶, 心肌作紅四氮唑染色測心肌梗死面積。結(jié)果:大豆異

2、黃酮能縮小心肌梗死范圍, 使血清乳酸脫氫酶及磷酸肌酸激酶值降低, 心肌組織超氧化物歧化酶明顯增高, 而丙二醛酶值降低。結(jié)論:大豆異黃酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷具有一定的保護作用。 關(guān)鍵詞 大豆異黃酮; 心肌缺血再灌注損傷; 心肌保護 近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮具有抗細胞增殖13、抗腫瘤4, 5、心血管疾病防護5、抗衰老68、抗疲勞9、緩解更年期綜合癥、骨質(zhì)疏松癥1012、糖尿病13等作用。美國FDA 把大豆列為能真正降低患心臟病危險的少數(shù)食品之一。本文研究了大豆異黃酮的抗心肌缺血再灌注損傷作用。1 材料和方法14161. 1 試驗藥物 大豆異黃酮由沈陽藥科大學(xué)植化教研室邱峰博士提供, 實驗

3、前用用雙蒸水稀至所需濃度。1. 2 試劑 超氧化物歧化酶、丙二醛酶、乳酸脫氫酶、磷酸肌酸激酶、考馬斯亮藍試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。紅四氮唑(2, 3, 5-tr i pheny lterazo liu m chlor i de TTC , 中國醫(yī)藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司; 其他試劑均為國產(chǎn)分析純。1. 3 動物 清潔級雄性W i star 大鼠56只, 體質(zhì)量(220? 20 g , 由江西省實驗動物中心提供(動物中心許可證號為021-9712, 動物合格證號為J XA 2004118, 清潔級 。1. 4 方法 32只雄性大鼠隨機分為4組, 分別為假手術(shù)組、缺血再灌注組、大豆異黃酮1

4、00mg /kg 、大豆異黃酮50mg /kg。大豆異黃酮于結(jié)扎冠狀動脈左前降支前15天經(jīng)灌胃給藥, 每天一次, 每次分別灌入1m l/100g大豆異黃酮溶液, 其余時間自由飲用同濃度的大豆異黃酮溶液。模型組及假手術(shù)組給生理鹽水水合氯醛腹腔麻醉后, 氣管插管, 行人工呼吸。左側(cè)第34肋間開胸, 剪開心包, 暴露心臟, 于肺動脈園錐及左心房間找出冠狀動脈左前降支, 并用圓形無創(chuàng)縫合針6/0絲線置于左冠狀動脈前降支起始部下2mm 處備用。除假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎外, 其余各組均以0號線立即結(jié)扎, 結(jié)扎時用一細小塑料管(直徑約0. 8mm 墊于血管與結(jié)扎線之間。結(jié)扎冠狀動脈, 以心電圖Ò導(dǎo)聯(lián)

5、ST 段抬高0. 1mV 或T 波高聳、心肌顏色變暗紅色為結(jié)扎成功的標(biāo)志。結(jié)扎40m i n 后松開結(jié)扎線再灌注120m i n 。實驗結(jié)束后, 左心室心內(nèi)穿刺取血, 低速冷凍離心機分離血清置-20e 冰箱保存。測定血清乳酸脫氫酶、磷酸肌酸激酶操作步驟按試劑盒說明書進行。然后迅速取出心臟, 用硫代巴比妥法測定心肌組織丙二醛含量, 用羥胺法測定超氧化物歧化酶值, 用考馬斯亮藍G-250測定蛋白質(zhì)含量。另取24只大鼠, 分別為缺血再灌注組、大豆異黃酮100m g /kg 、大豆異黃酮50m g /kg。同上進行實驗, 取心肌作紅四氮唑染色測心肌梗死面積, 取出心臟, 用冰生理鹽水洗凈稱重。將左心室

6、均勻橫切成5份, 用濾紙吸去表面水份, 然后放入1. 25g /L紅四氮唑37e 環(huán)境中染色15m i n , 非梗死區(qū)不變色, 梗死區(qū)呈灰白色。置于體積分數(shù)為0. 1的甲醛溶液中固定24h , 將梗死區(qū)心肌剪下, 用光電天平稱重, 以梗死區(qū)心肌濕重占全心肌濕重的百分比表示心肌梗死的范圍, 評價大豆異黃酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用。2 結(jié)果2. 1 缺血再灌注損傷后心肌梗死范圍比較 見表1, 大豆異黃酮能縮小心肌梗死范圍。表1 各組缺血再灌注損傷后心肌梗死范圍比較( x ? s 組別劑量(m g /kg 鼠數(shù)(只 心肌濕重(g 梗死區(qū)濕重(g 心肌梗死范圍(%缺血再灌注80. 717?

7、 0. 0160. 283? 0. 02539. 48? 3. 52大豆異黃酮10080. 714? 0. 0140. 252? 0. 01435. 34? 2. 19*大豆異黃酮5080. 709? 0. 0130. 270? 0. 01738. 04? 2. 34與缺血再灌注組比較*P <0. 05(下同2. 2 各組血清乳酸脫氫酶和磷酸肌酸激酶的比較 結(jié)果見表2。與缺血再灌注組比較, 大豆異黃酮(100mg /kg 使血清乳酸脫氫酶降低, 并使血清磷酸肌酸激酶值降低。表2 各組血清乳酸脫氫酶的比較(u /L, x ? s 組別劑量(m g /kg 鼠數(shù)(只 乳酸脫氫酶值磷酸肌酸激酶

8、值假手術(shù) 82669. 27? 142. 8588. 86? 14. 11缺血再灌注83255. 21? 248. 72133. 98? 15. 92大豆異黃酮10083069. 27? 119. 78*115. 22? 13. 49*大豆異黃酮5083085. 26? 181. 95125. 72? 18. 742. 3 各組心肌組織超氧化物歧化酶和丙二醛含量比較 結(jié)果見表3。與缺血再灌注組比較大豆異黃酮100m g /kg組超氧化物歧化酶明顯增高, 而丙二醛明顯降低。表3 各組心肌組織超氧化物歧化酶比較( x ? s 組別劑量(m g /kg 鼠數(shù)(只 超氧化物歧化酶(NU /mgp 丙二

9、醛(n m o l/mgp假手術(shù) 843. 77? 3. 191. 594? 0. 197缺血再灌注833. 15? 4. 412. 274? 0. 267大豆異黃酮100837. 75? 3. 30*1. 936? 0. 202*大豆異黃酮50835. 89? 3. 381. 953? 0. 2533 討論心肌缺血再灌注損傷目前認為與再灌注后細胞內(nèi)C a 2+超載、氧自由基大量生成、微血管內(nèi)皮細胞損傷及血管內(nèi)皮細胞與白細胞/血小板之間相互作用等有關(guān)。本實驗研究表明, 大豆異黃酮對缺血再灌注的心肌損傷有一定保護作用, 此作用與大豆異黃酮提高心肌組織的超氧化物歧化酶和降低丙二醛, 清除自21中藥

10、藥理與臨床2005; 21(5由基, 防止脂質(zhì)過氧化等有關(guān)。參考文獻1 楊薇. 大豆植物性雌激素的構(gòu)效關(guān)系及藥理作用. 中國新藥雜志, 2001; 10(12 B 8922 河福金, 王健, 等. 大豆異黃酮抑制裸鼠移植瘤生長及其血管生成的實驗研究. 中國藥理學(xué)通報, 2003; 19(1 B 73753 張帆, 朱翠鳳, 戴雅麗, 等. 復(fù)合抗氧化劑對2型糖尿病患者糖負荷時炎性細胞因子表達的影響. 中國臨床康復(fù), 2004; 8(9 B 169316954 Ravi ndranath M H, M uthugounder S, P resser N, et a. l An tican cer

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15、on by an esthetic agents agai ns t isc h-er m i a -reperfus i on i n j u ry :an update f or anesthes i ologists . C an J Anaest h, 2002; 49(8 B 777791The effect of soybean isoflavone on m yocardiu m against ische m ia reperfusion i n jury i n ratsY e H eyang , Zhang X i ao li ng , Zhuo L , i e t a.

16、l(D epart m ent of Phar m aco logy, G annan M edical Co llege , G anzhou 341000A i m :T o observ e the protecti v e effec t of Soybean Isoflavone (SI on m yocard i a l ischem ia /repe rf usion i nj u ry in rats . M ethods :Therew ere add up to 56rats se l ected i n the experi m ent . 32m ale rats we

17、 re rando m l y divided i nto 4groups :the sha m ope ra tion g roup , the m odel g roup and the S I 100mg /kg or 50mg /kggroups . T he t w o SI groups w ere respecti ve l y g i v en by 1m l/100gby w ay o f i g 15days be fore ischem ia reperfus i on . R ats ' i sche m i a /reperfusion inj ury m o

18、de lw as establi shed by ligati ng left anter i or descend i ng coronary artery f o r 40m i n f o ll ow ed by reperfus i on for 120m i n . The activ i ty o f creati ne pho sphok i nase (C K and lactate dehydrogenase (LDH i n se ru m, content o f m alond i a l de -hyde (MDA and supe rox i de dis muta

19、se (SOD i n heart and the area o f myocardial i nfarction we re observ ed to eva l uate the protec tive effect o f trea t m en t . R esults :(1 T he SI 100m g /kgcould reduce the area o fm yocard ial i nfarction . (2 The SI 100m g /kgcou l d reduce the LDH and CK of seru m. (3 T he SI 100m g /kgcou l d i ncrease the S OD and reduce the M DA o fm yocard i a l ti ssue . Conc l