固相萃取的步驟

1、固相萃取的步驟 2-1所示，一個(gè)完整的固相萃取包括柱或盤(pán)的預(yù)處理、加樣、洗去干擾雜質(zhì)、分析物洗脫及收集四個(gè)步驟。在加樣和洗去干擾雜質(zhì)兩步中，要盡可能使分析物徹低吸附在填料上，即不發(fā)生穿透現(xiàn)象；而在分析物洗脫及收集過(guò)程中，則要使分析物盡可能被徹低解脫，即不發(fā)生殘留，但上述狀況并不是總能達(dá)到。要使固相萃取盡可能按設(shè)想舉行，就要按照被測(cè)物及樣品基體的性質(zhì)，挑選合適的吸附劑及洗脫溶劑，挑選時(shí)可參照高效液相色譜的有關(guān)理論。 圖2-1 固相萃取的基本步驟 一、固相萃取柱或盤(pán)的預(yù)處理 在固定相吸附分析物前，吸附劑必需經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)念A(yù)處理(conditioning)。經(jīng)過(guò)處理，一方面可以除去吸附劑中可能存在的雜質(zhì)

2、，削減污染；另一方面可使吸附劑溶劑化，從而與樣品溶液相匹配，這樣在加樣吸附時(shí)，樣品溶液就可與吸附劑表面緊密接觸，以保證獲得高的萃取效率和大的穿透體積。 不同填料的固相萃取柱或盤(pán)，其預(yù)處理的辦法有所不同。常用的反相c18固相萃取柱的預(yù)處理辦法普通是：先用適量的通過(guò)萃取柱以活化該萃取劑，未經(jīng)處理的萃取劑c18的長(zhǎng)鏈處于卷曲狀態(tài)，經(jīng)正己烷處理后，c18的長(zhǎng)鏈處于舒展?fàn)顟B(tài)，呈毛刷狀，有利于它與分析物的緊密接觸，己活化的萃取劑呈近透亮狀態(tài)；此時(shí)再將適量通過(guò)萃取柱以置換正己烷并彌漫萃取劑的微孔，最后用水或緩沖溶液過(guò)柱頂替滯留在柱中的甲醇，這樣可保證憎水性的萃取劑表面與樣品水溶液有良好的接觸，提高萃取效率。

3、 有機(jī)高聚物型的固相萃取劑的預(yù)處理則相對(duì)容易，普通可用少量甲醇將其憎水性表面潤(rùn)濕即可，有時(shí)也可將此步省略。表面經(jīng)親水性基團(tuán)修飾的有機(jī)高聚物萃取劑，不經(jīng)預(yù)處理就可用于樣品水溶液的固相萃取。 二、加樣或吸附 加樣或吸附(loading or adsorption)即用泵或其他適當(dāng)裝置以正壓推進(jìn)或負(fù)壓抽吸使液體試樣以適當(dāng)流速通過(guò)固相萃取柱或盤(pán)，在此過(guò)程中，分析物被吸附在吸附劑上。為了保證獲得高的吸附率，防止分析物的流失，應(yīng)注重以下幾方面的事項(xiàng)： 用合適的溶劑稀釋試樣，即將樣品溶液的溶劑強(qiáng)度調(diào)整到合適的范圍。如以反相機(jī)理固相萃取水樣有機(jī)物時(shí)，以水或水基緩沖溶液為溶劑，其中有機(jī)溶劑量不應(yīng)超過(guò)1000(體

4、積分?jǐn)?shù))。 適當(dāng)削減試樣體積或適當(dāng)增強(qiáng)固相萃取柱中的填料。加到萃取柱或盤(pán)上的試樣量的大小與填料的類型、填料的數(shù)量、組分的保留性質(zhì)、試樣中分析物及基體組分的濃度等因素有關(guān)。固相萃取柱選定后，應(yīng)先用前沿色譜法作出穿透曲線，從而得到穿透體積。穿透體積的大小不但與試樣中分析物的濃度有關(guān)，而且與試樣基體中競(jìng)爭(zhēng)性干擾組分的濃度有關(guān)。因此，在舉行穿透試驗(yàn)時(shí)，所挑選的分析物濃度應(yīng)為實(shí)際樣品中預(yù)期的最大濃度。得到了穿透體積，就得到了該萃取體系可萃取的最大樣品溶液體積，因此最后選定的試樣體積應(yīng)當(dāng)小于穿透體積。 加樣萃取的流速應(yīng)當(dāng)適當(dāng)。加樣時(shí)采納的合理流速取決于萃取柱或盤(pán)的幾何外形和萃取填料粒徑的大小。采納小顆粒的

5、填料，萃取效率高，可用法短的柱子和高的流速；采納較大粒徑填料，萃取效率低，則需用法較長(zhǎng)的柱子和較低的流速。普通而言，采納大約10um粒徑的固相萃取填料時(shí)，用法的柱長(zhǎng)應(yīng)小于10mm，這樣即使流速較大，柱兩端的反壓也不至于太大；采納粒徑為50100um的填料時(shí)，則應(yīng)使柱長(zhǎng)大于50mm，并用法較低的流速以獲得有效的傳質(zhì)。一個(gè)固相萃取體系的合適流速可用下面的容易試驗(yàn)加以確定：配制一深色溶液，讓該溶液以一定流速通過(guò)萃取柱，假如得到一寬的色譜帶，則解釋該流速太大，應(yīng)適當(dāng)降低。 還應(yīng)指出的是，在囫圇加樣萃取過(guò)程中，應(yīng)盡量避開(kāi)柱子流干而進(jìn)入氣泡。否則，進(jìn)入的氣泡將會(huì)影響樣品溶液與吸附劑之間的緊密接觸，影響萃取

6、效率。假如不慎使柱流干進(jìn)入了氣泡，最好重新活化柱子后再開(kāi)頭試驗(yàn)。 三、干擾雜質(zhì)的洗滌 于擾雜質(zhì)的洗滌(washing the packing)的目的是為了去除吸附在柱子上的少量基體干擾組分。合適的洗滌液應(yīng)當(dāng)既能將基體干擾組分盡可能除凈，又不會(huì)導(dǎo)致被吸附的分析物流失口普通的洗滌液是合適的中等強(qiáng)度的混合溶劑，對(duì)反相萃取體系而言，洗滌液是含合適濃度有機(jī)溶劑的水或緩沖溶液(有機(jī)溶劑比例應(yīng)大于上樣溶液，而小于洗脫劑溶液)。為了確定洗滌液的最佳濃度和體積，可在柱上加入一定量的試樣，用510倍固相萃取柱床體積的溶劑洗脫，收集分析流出液，得到洗滌液對(duì)分析物信號(hào)的洗滌輪廓圖。轉(zhuǎn)變洗滌液的組成濃度即溶劑強(qiáng)度，得到

7、不同的洗滌輪廓圖，按照該圖形確定洗滌液的濃度和體積。 四、洗脫和分析物的收集 洗脫和分析物的收集(elution)即用完可能少量的合適溶劑將被吸附劑吸附的分析物洗脫下來(lái)，使其重新進(jìn)入溶液，再用儀器測(cè)定。為了盡可能徹低地將分析物洗脫，并使比分析物吸附更強(qiáng)的雜質(zhì)盡可能多地留在固相萃取柱上，關(guān)鍵是挑選合適強(qiáng)度的洗脫溶劑。太強(qiáng)的洗脫溶劑既可將分析物洗脫下來(lái)，又會(huì)將雜質(zhì)洗脫下來(lái)，干擾后續(xù)測(cè)定。有時(shí)為了得到整潔的洗脫溶液，寧愿挑選較弱的溶劑，用法較大體積的溶劑將分析物洗脫后，再用氮?dú)鈱⒃撊軇┐蹈?，然后再用合適的辦法測(cè)定。為了挑選合適的洗脫劑強(qiáng)度和體積，可加一定量的試樣于固相萃取柱上，然后再轉(zhuǎn)變洗脫劑的強(qiáng)度和體積，測(cè)定不同洗脫條件下分析物的回收率加以比較，選出最抱負(fù)的洗脫劑及其用量。在反相機(jī)理的固相萃取體系中洗脫劑普通選用合適的有機(jī)溶劑，即選用分析物的容量因子k臨近于0的有機(jī)溶劑。 洗脫時(shí)還必需注重一點(diǎn)：洗脫前必需先將殘留在柱中的少量試樣水溶液用抽真空或吹入壓縮空氣