黃連中鹽酸小檗堿的水提工藝研究

1、第29卷第3期CHINESE中華中OF醫(yī)藥學(xué)刊MEDICINEVol29No3Mar20112011年3月ARCHIVESTRADITIONALCHINESE黃連中鹽酸小檗堿的水提工藝研究黃家衛(wèi)，盛振華（浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，浙江杭州310053）要：目的：優(yōu)選黃連中鹽酸小檗堿的最佳提取工藝條件。方法：采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以鹽酸小檗堿的含量為考察指標(biāo)，考察加水倍量、提取次數(shù)和提取時(shí)間3因素對(duì)提取結(jié)果的影響。結(jié)果：鹽酸小檗堿的最佳提取工藝摘提取時(shí)間為1h。結(jié)論：該優(yōu)化提取工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性好，可用于黃連中為加藥材12倍量的水回流提取1次，小檗堿的提取。關(guān)鍵詞：黃連；鹽酸小檗堿；提取工藝中圖分類號(hào)

2、：R2842文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：16737717（2011）03052803StudyonAqueousExtractionofBerberineFromFranchHUANGJia-wei，SHENGZhen-hua（CollegeofPharmacy，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou310053，Zhejiang，China）Abstract：Objective：TostudytheoptimalprocessoftheextractionofberberinefromCoptischinensisFranchMeth-ods：Orth

3、ogonaldesignwasusedforstudyingtheeffectofwatervolume，timesofextraction，extractiontimeResult：TheoptimumconditionfortheextractionofCoptischinensisFranchwasextracted1timesby12foldofwater，refluxing1hConclusion：Thisextractionprocessissteady，feasibleandreproducible，andcanbeusedforextractionofberberinefrom

4、CoptischinensisFranchKeywords：CoptischinensisFranch；Berberine；Extractio黃連為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch、三角葉黃連CoptisdeltoideaCYChengetHsiao或云連Coptisteeta1Wall的干燥根莖，具有清熱燥濕，瀉火解毒等功效，其中公司）；12試藥鹽酸小檗堿對(duì)照品（由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為07139906），乙腈、甲醇為色譜純，水為超純其余試劑均為分析純。黃連購(gòu)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥水，飲片廠并經(jīng)中藥資源教研室俞冰副教授鑒定為毛莨科植物黃連Coptischin

5、ensisFranch。221方法與結(jié)果色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)5m）；流色譜柱：HypersilBDSC18（250mm×46mm，主要有效成分是以小檗堿為代表的季銨型生物堿抗病毒、抗炎、抗菌、降血糖及免疫調(diào)節(jié)等作用32，具有，提。有關(guān)黃45連及其制劑中鹽酸小檗堿的提取和測(cè)定已有報(bào)道取時(shí)一般采用甲醇、氯仿、乙醇等有機(jī)溶劑，但存在溶劑用量大，成本高，安全方面等問題。對(duì)于鹽酸小檗堿含量的測(cè)定時(shí)，則一般采用薄層掃描法法76、熒光分光光度法等方，但上述兩種方法操作繁瑣，影響因素多，準(zhǔn)確性較差。故本文根據(jù)鹽酸小檗堿為季銨堿，易溶于水，設(shè)計(jì)以水溶劑的提取方法，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以HPLC法測(cè)定

6、鹽酸篩選黃連中鹽酸小檗堿的水提工藝，為其進(jìn)小檗堿的含量，一步的研究提供參考。中華中醫(yī)藥528學(xué)刊111儀器與試藥儀器LumtechK501高效液相色譜儀（綠綿安特分析系統(tǒng)LumtechK2501紫外檢測(cè)器，EastChrom色裝備有限公司），譜工作站；SartoriusBS110s分析天平（北京賽多利天平有限收稿日期：20100920基金項(xiàng)目：浙江省教育廳資助項(xiàng)目（20071129）作者簡(jiǎn)介：黃家衛(wèi)（1961），男，浙江杭州人，副教授，研究方向：中藥及天然有效成分的研究與開發(fā)。002moL·L1KH2PO4=3070，pH=30；流動(dòng)相：乙腈1速：10mL·min；檢測(cè)波長(zhǎng)

7、：350nm柱溫：30；進(jìn)樣量為10L，理論塔板數(shù)以鹽酸小檗堿計(jì)算大于3000，此條件下，樣品中鹽酸小檗堿的與相鄰峰的分離度大于15，色譜圖見圖1。22對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品145mg，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得濃度為0145mg·mL1的對(duì)照品溶液，搖勻，用045m的濾膜過濾，即得。23供試品溶液的制備2試驗(yàn)條件進(jìn)行精密稱取黃連藥材5g，分別根據(jù)表1、加水回流提取，趁熱過濾，轉(zhuǎn)移至250mL量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度。從250mL量瓶，取濾液05mL，置25mL量瓶8第29卷第3期CHINESE中華中OF醫(yī)藥學(xué)刊MEDICINEVol29

8、No3Mar20112011年3月ARCHIVESTRADITIONALCHINESEABA鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品圖B黃連樣品圖1鹽酸小檗堿圖1鹽酸小檗堿高效液相色譜圖中，加鹽酸甲醇=1100混合溶液稀釋，60水浴溫浸15min，冷卻至室溫，加鹽酸甲醇=1：100混合溶液稀釋至刻度，搖勻，045m微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。24線性關(guān)系的考察精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1mL，稀釋成濃度為145000、72500、36250、18125、90625、4531g·mL1的系列梯度對(duì)照品溶液，按照上述“21”色譜條件，各精密吸取10L注入液相色譜儀，記錄峰面積。對(duì)峰面積Y和進(jìn)樣量X（g）進(jìn)行

9、線性回歸，得到鹽酸小檗堿的回歸方程為：Y=3705100X+65515，r=09996，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在004531450g濃度范圍內(nèi)與峰面積具有良好線性關(guān)系。25提取工藝研究251因素水平表以鹽酸小檗堿的含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)對(duì)鹽酸小檗堿提取的加水倍量，提取次數(shù)，提取時(shí)間等因素進(jìn)行探討，因素水平見表1。表1因素水平表水平因素加水倍量A（倍）提取次數(shù)B（次）提取時(shí)間C（h）1511282153123252試驗(yàn)方法及數(shù)據(jù)將制備得各供試品液，按照上述21”項(xiàng)下色譜條件，各進(jìn)樣10L，記錄色譜圖，測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2。表2正交試驗(yàn)表及結(jié)果試驗(yàn)號(hào)因素ABCD鹽酸小糪堿量/%111

10、112840212223037313333320421233487522314009623123742731323642832133954933213797K1919799691053510646K211237109991032110421K3113931085881097110761R2196103106500340SS3004062502190060253方差分析將正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。表3方差分析表誤差來源SSfSFP*A30032150250222005B06252031310457005C0219201103666005誤差00600030F005（2，2）=19；F

11、001（2，2）=99。由表2中極差R值大小顯示，各因素作用主次為ABC，即加水倍量提取次數(shù)提取時(shí)間，最佳工藝應(yīng)為A3B2C3。經(jīng)方差分析（表3）可知：A因素具有顯著性意義（P005），以A3為佳，B、C兩因素的影響無顯著性意義（P005），故在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，考慮實(shí)際生產(chǎn)成本，最佳優(yōu)選組合條件為A3B1C1，即藥材加12倍量水，提取1次，提取1h。26驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)按照上述最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，平行提取3次，測(cè)得鹽酸小糪堿的平均得率為416%（高于正交表中9次試驗(yàn)的結(jié)果），RSD為151%。表明該提取工藝能較好地反映黃連中鹽酸小檗堿的提取條件。27精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10L，連續(xù)進(jìn)樣6次

12、，測(cè)定鹽酸小檗堿的峰面積的RSD為034%，表明精密度良好。28穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液在0、2、4、6、8、12h分別進(jìn)樣10L，記錄峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿面積值的RSD為249%，可見供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。29加樣回收實(shí)驗(yàn)稱取6份已知含量的黃連藥材，精密加入適量鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液。按“23”項(xiàng)下方法制備溶液，按上述色譜分析條件進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為10005%，RSD為178%。3小結(jié)與討論（1）黃連中的小檗堿一般以季銨型生物堿的狀態(tài)存在，可以離子化呈強(qiáng)堿性，能溶于水。本實(shí)驗(yàn)中黃連的小檗中華中醫(yī)藥529學(xué)刊“第29卷第3期CHINESE中華中OF醫(yī)藥學(xué)刊MEDIC

13、INEVol29No3Mar20112011年3月ARCHIVESTRADITIONALCHINESE粗針治療血管性癡呆ADLR評(píng)價(jià)11張海峰，宣麗華，侯12群，張俊峰（1浙江省中醫(yī)院針灸科，浙江杭州310006；2浙江中醫(yī)藥大學(xué)2008級(jí)碩士研究生，浙江杭州310053）要：目的：觀察粗針治療血管性癡呆的療效。方法：運(yùn)用粗針從身柱穴沿督脈向下平刺，治療血管性癡呆并運(yùn)用日常生活能力量表（ADLR）評(píng)分評(píng)價(jià)。結(jié)果：與治療前評(píng)分組內(nèi)比較，粗針并與口服吡拉西坦組對(duì)照，摘60天及180天回訪時(shí)，組在治療30天、均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：對(duì)照組在治療30天時(shí)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療60天及18060天及180天回訪時(shí)組

14、間評(píng)分比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明粗天回訪時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組間比較，在治療30天、針和吡拉西坦治療均有效，粗針治療優(yōu)于吡拉西坦。結(jié)論：粗針可明顯改善血管性癡呆的日常生活能力量表評(píng)分，具有積極的治療血管性癡呆的作用。關(guān)鍵詞：粗針；身柱穴；血管性癡呆中圖分類號(hào)：R246文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：16737717（2011）03053002EvaluationwithADLRonVascularDementiaTreatedwithThickNeedlesZHANGHai-feng1，XUANLi-hua1，HOUQun1，ZHANGJun-feng2（1DepartmentofAcupuncture，Z

15、hejiangHospitalofChineseMedicine，Hangzhou310006，Zhejiang，China；2DepartmentofAcupunctureandMassage，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou310053，Zhejiang，China）Abstract：Objective：ObservatetheefficacyofVascularDementiaTreatingbythickneedlesMethods：TreatingVascu-comparedwithtakingPiracetamlarDementia

16、withhorizontalprickfromShenzhupointalongDuchannelbythickneedles，Tablets，andcommentedthroughthescoleofADLRResults：Comparingtotheprethreatment，therewasstatisticalsig-nificancewhenthethickneedlesgroupwastreatedfor30d、60dandvisitedonthe180thday，whiletherewasnostatisti-calsignificancewhentreatedfor30dbut

17、statisticalsignificancefor60dandvisitedonthe180thdayinthecontrolgroup；Comparingbetweenthe2groups，therewerestatisticallysignificantdifferenceswhentreatedfor30d、60dandvisitedonthe180thdayItshowedthatboththethickneedlestherapyandtakingPiracetamTabletsareeffectiveintreatingVascularbuttheformerseemedbett

18、erConclusion：ThethickneedlestherapycanobviouslyimproveADLRscoreofDementia，VascularDementiaandhasthepositivetreatmentfunctionKeywords：thickneedle；shenzhupoint；VascularDementia堿的含量以鹽酸小檗堿計(jì)，將小檗堿轉(zhuǎn)化為鹽酸小檗堿進(jìn)行水為溶劑的提取工藝研究。（2）實(shí)驗(yàn)中考察了多種流動(dòng)相條件910：（1）乙腈磷酸緩沖鹽（2080）；（2）乙腈04%磷酸（1882）；（3）甲醇水三乙胺（406001），但結(jié)果發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿1峰未能達(dá)到較好的分離效果，后采用乙腈002moL·LKH2PO4流動(dòng)相后鹽酸小檗堿的分離度有所改善，改變流動(dòng)2匡海學(xué)新世紀(jì)全國(guó)高等中醫(yī)藥規(guī)劃教材中藥化學(xué)M北2003京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，3崔學(xué)軍小檗堿的藥理學(xué)研究進(jìn)展及臨床新用途J時(shí)珍國(guó)2006，17（7）：1