生物指示劑的實驗評價

1、摘要： 目的比較3 培養(yǎng)快速閱讀生物指示劑與48 h培養(yǎng)生物指示劑的檢測結(jié)果。方法兩種指示劑及留點(diǎn)溫度計置于測試包中，在134脈動真空滅菌器中分別作0.5 min、1 min、2 min、3 min、4 min的滅菌后觀察，培養(yǎng)結(jié)果。結(jié)果兩種培養(yǎng)方法的芽胞陽性率基本一致，3 h培養(yǎng)生物指示劑結(jié)果顯示出有芽胞被滅活，但酶仍存活的現(xiàn)象；3個測試點(diǎn)以上層中相對難滅菌。 結(jié)論兩種指示劑的結(jié)果是一致的，快速培養(yǎng)儀能及早通過熒光發(fā)現(xiàn)3 h培養(yǎng)指示劑的酶存活，大大縮短了培養(yǎng)時間。關(guān)鍵詞：生物指示劑； 生物檢測； 嗜熱脂肪桿菌芽胞； 脈動真空滅菌器； 控制感染中圖分類號：R187+.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：

2、1005-4529(2000)03-0202-02生物檢測法是壓力蒸氣滅菌效能測定的直接而可靠的方法及指標(biāo)，27 d才得出結(jié)果，為此，我院選用3 h(B組)培養(yǎng)快速閱讀生物指示劑的培養(yǎng)方法檢測滅菌效果。為了了解快速培養(yǎng)生物指示劑培養(yǎng)結(jié)果的準(zhǔn)確性，我們將快速培養(yǎng)與48 h(A組)培養(yǎng)的結(jié)果作對比觀察，現(xiàn)報告如下。1材料與方法1.1指示劑及分組將A、B兩組，每組包括3M生物指示劑各2支及留點(diǎn)溫度計1支共同置于每個測試包的中間位置。A組為3M Attest 1262自含式生物指示劑，培養(yǎng)條件為56 48 h的培養(yǎng)鍋培養(yǎng)；B組為3M Attest 1292生物指示劑，培養(yǎng)條件為60 3 h的快速閱讀生

3、物檢測儀；然后將3個同樣的測試包分別置于滅菌器柜內(nèi)的上層中間(A1，B1)、下層后(A2，B2)、下層前(A3，B3)的位置，在真空度-0.086 MPacm2、蒸汽壓力0.2 MPacm2、溫度134的條件下分別作用0.5、1、2、3、4 min滅菌。1.2檢測將指示劑取出，按規(guī)定條件觀察培養(yǎng)結(jié)果。A組肉眼觀察指示劑變黃色為陽性，B組以檢測儀閱讀判別陽性結(jié)果，此時閱讀結(jié)果雖為陽性，但肉眼觀察指示劑仍未變黃色，如果經(jīng)更長時間培養(yǎng)指示劑變黃，表明芽胞及細(xì)菌酶全部存活；如仍不變?yōu)辄S色，表明芽胞已滅活，但酶仍存活。2結(jié)果2.1指示劑測試包中的留點(diǎn)溫度計每次均顯示溫度為134±0.5。所有作

4、對照的未經(jīng)滅菌的指示劑芽胞及酶均為陽性。2.2滅菌效果滅菌4 min A，B組共36支全部為陰性反應(yīng)；滅菌0.5 min A，B組均為陽性反應(yīng)。2.3陽性率兩組檢測結(jié)果見表1。表1顯示滅菌時間越短，陽性率越高。表1A，B組檢測陽性(支)滅菌時間(min)A組B組-+-+4.01801803.01711352.01711261.03151170.50180182.4不同部位的測試包兩組陽性率如表2。 表2A，B兩組不同位置培養(yǎng)陽性(支)組別上層中下層后下層前A組141011B組1715142.5試劑開始變黃色時間在觀察培養(yǎng)結(jié)果過程中，發(fā)現(xiàn)試劑開始肉眼變黃色的時間A組為8 h左右、B組為6 h左右

5、。 3討論3.14 min滅菌A組、B組指示劑的芽胞及酶均陰性，從而證實了細(xì)菌芽胞在132134下的熱死亡時間為34 min1的有關(guān)理論。3.2在實際工作中，滅菌后的檢測應(yīng)盡快得出結(jié)果，以便能夠及時將滅菌物品用于臨床。過去的常規(guī)培養(yǎng)檢測方法需要7 d才有結(jié)果。雖然3M普通生物指示劑的檢測可縮短至48 h，但是，比起快速儀的3 h出結(jié)果，仍然有相當(dāng)?shù)臅r間差距。由于快速儀的時間短，其檢測的可靠性自然受到質(zhì)疑。本實驗結(jié)果表明，快速儀檢測單純芽胞陽性率40%與培養(yǎng)鍋38.9%是幾乎相同的，指示劑的存活時間與滅活時間完全是一致的，分別為30 s和4 min，因此，在實際工作中完全可以使用快速儀代替培養(yǎng)鍋

6、以縮短得出培養(yǎng)結(jié)果的時間，提高實際工作效率。3.3快速儀的檢測原理是它能及早識別芽胞生長初始階段時，某種酶被激活后使非熒光基質(zhì)轉(zhuǎn)換為熒光物質(zhì)，通過識別熒光物質(zhì)來確定陽性結(jié)果。如滅菌徹底，芽胞及酶皆被滅活，試劑不會變色；如滅菌不徹底，芽胞及酶都有活性，指示菌進(jìn)入營養(yǎng)適宜的條件下，經(jīng)過遲緩期后即進(jìn)入對數(shù)生長期2，試劑變?yōu)辄S色。但是因為酶的熱抗力比芽胞強(qiáng)，所以B組在13 min的各時段中，有芽胞被滅活，酶仍有活性的狀況，這狀況亦視為滅菌失敗。從表1可以看出，快速儀檢測酶活性的變化是培養(yǎng)鍋不能檢測的。本實驗的B組指示劑中，芽胞陰性而酶陽性占21.7%，這一指標(biāo)能較好的反映滅菌的交界階段不達(dá)標(biāo)的滅菌過程

7、，也顯示了因為快速儀能檢測細(xì)菌酶的活性，故有比培養(yǎng)鍋更加敏感的特性。另外，培養(yǎng)溫度愈高芽胞復(fù)蘇生長所需時間愈短，所以B組快速儀指示劑肉眼變黃時間比培養(yǎng)鍋短。3.4滅菌器柜內(nèi)測試包及生物指示劑放置點(diǎn)不同，可能產(chǎn)生不同的滅菌效果，從表2可看出，上層中的位置高于下層后及下層前(接近排氣口)，估計滅菌的最難點(diǎn)是在上層中。但本實驗未能在實驗數(shù)據(jù)上加以證實，還需要更進(jìn)一步的觀察。何曙云（中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院， 廣東 廣州 510060）邵珍紅（中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院， 廣東 廣州 510060）劉宇英（中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院， 廣東 廣州 510060）陳金蓮（中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院， 廣東 廣州 510060）溫冬梅（中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院， 廣東 廣州 510060）參考文獻(xiàn)1，鐘秀玲，程棣妍. 現(xiàn)代醫(yī)院感染護(hù)理學(xué)M. 北京：人民軍醫(yī)出版社, 1995. 231.2，楊瀏，柴輝，劉細(xì)梅.