結(jié)核分支桿菌藥物敏感性不同檢測(cè)方法結(jié)果的比較

1、    結(jié)核分支桿菌藥物敏感性不同檢測(cè)方法結(jié)果的比較        【摘要】目的比較不同標(biāo)準(zhǔn)和方法檢測(cè)結(jié)核分支桿菌耐藥性的結(jié)果。 方法對(duì)158株臨床分離的結(jié)核分支桿菌同時(shí)采用我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)絕對(duì)濃度法、WHO/IUATLD推薦標(biāo)準(zhǔn)1%比例法和絕對(duì)濃度法檢測(cè)藥物敏感性。 結(jié)果WHO/IUATLD規(guī)定的耐藥性標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的耐藥率為53.8%(85/158)，我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果為50.0% (79/158)(P>0.05，差異無(wú)顯著性)。WHO/IUATLD耐藥性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)出耐I

2、NH、SM、EMB、RFP率分別為41.8%（66/158)、34.2%（54/158)、22.1%（35/158) 、27.8%（44/158) ，我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的結(jié)果分別為34.2%（54/158)、30.4%（48/158)、18.4%（29/158)、27.2%（43/158)；經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩標(biāo)準(zhǔn)在檢測(cè)耐藥性時(shí)，除INH差異有顯著性 (218.4，P< 0.01)外，其余三種藥物的檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)顯著性。WHO/IUATLD耐藥性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用1%比例法和絕對(duì)濃度法檢測(cè)的結(jié)果一致。 結(jié)論耐藥性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)藥物敏感性檢測(cè)結(jié)果有較大影響，但相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)下采用不同的檢測(cè)方法并不影響藥物敏感性

3、結(jié)果。【關(guān)鍵詞】分支桿菌，結(jié)核；微生物敏感性試驗(yàn)Comparison of susceptibility testing results of M. tuberculosis by different methodsDING Beichuan，ZHAO Ting， GAI Yaru，et al. （Beijing Research Institute for Tuberculosis Control，Beijing 100035，China）【Abstract】ObjectiveTo compare the susceptibility testing results of M. tuberc

4、ulosis detected with different standards and methods. Method158 strains of M. tuberculosis isolated from clinical patients were detected for the drug sensitivity by Chinese standard and method ( absolute concentration method),1% resistance ratio and absolute concentration method of WHO/IUATLD standa

5、rd. ResultsThe drug - resistant rate detected by the standard of WHO/IUATLD was 53.8%（85/158)，while by the Chinese standard 50.0%（79/158). The drug-resistant rates to INH，SM，EMB and RFP by WHO/IUATLD standard were 41.8%（66/158), 34.2%（54/158), 22.1%（35/158) and 27.8%（44/158) respectively，whereas by

6、the Chinese standard 34.2%（54/158）， 30.4%（48/158 ），18.4%（29/158）and 27.2%（43/158 ) respectively. There was no significant difference between the results detected with WHO/IUATLD and Chinese standard, except for the results of INH. There was no significant difference between the results detected with

7、 WHO/IUATLD standard by 1% resistant ratio and absolute concentration methods. ConclusionThe results of drug - sensitivity were interfered by the detected standards but not by the tested methods.【Key words】Mycobacterium tuberculosis;Microbial sensitivity tests我國(guó)現(xiàn)行結(jié)核分支桿菌耐藥性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與世界衛(wèi)生組織/國(guó)際防癆及肺部疾病聯(lián)合會(huì)(WH

8、O/IUATLD)推薦的耐藥性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)存在一定差異1,2，造成兩者檢測(cè)結(jié)果的可比性較差。為了解不同標(biāo)準(zhǔn)和方法檢測(cè)結(jié)核分支桿菌藥物敏感性結(jié)果的差異，我們對(duì)158株臨床分離的結(jié)核分支桿菌采用不同的方法檢測(cè)藥物敏感性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。材料與方法一、 材料1. 標(biāo)本來(lái)源：本所中心實(shí)驗(yàn)室保存的北京地區(qū)19951998年從臨床復(fù)治患者分離的158株結(jié)核分支桿菌。2. 參比菌株來(lái)源：H37Rv由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；每批實(shí)驗(yàn)將該菌株做為參比對(duì)照。3. 檢測(cè)藥物：包括異煙肼(INH，批號(hào)：980903，含量：99.90%)、利福平(RFP，批號(hào)：980906，含量：99.78%)、鏈霉素(SM，批號(hào)：

9、9806103，含量：76.92%)和乙胺丁醇(EMB，批號(hào)：980704，含量：99.67%)，由衛(wèi)生部結(jié)核病控制中心國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室提供。4. 培養(yǎng)基：對(duì)照(不含藥)和含藥培養(yǎng)基均使用L-J培養(yǎng)基，由本實(shí)驗(yàn)室按相應(yīng)規(guī)程1, 2配制。二、 方法1. 待測(cè)菌株菌齡：L-J培養(yǎng)基傳代，37孵育3周。2. 絕對(duì)濃度法：藥物檢測(cè)濃度、方法和結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)1。3. WHO/IUATLD比例法：藥物檢測(cè)濃度參照WHO/IUATLD標(biāo)準(zhǔn)，使用L-J培養(yǎng)基，檢測(cè)方法和結(jié)果判定采用1%比例法2。4. WHO/IUATLD絕對(duì)濃度法：藥物檢測(cè)濃度參照WHO/IUATLD標(biāo)準(zhǔn)2，檢測(cè)方法和結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

10、采用絕對(duì)濃度法。簡(jiǎn)言之，待測(cè)菌株10-5 mg接種至對(duì)照(不含藥)和含藥的L-J培養(yǎng)基，37孵育4周觀察結(jié)果。耐藥結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)1。結(jié)果一、WHO/IUATLD 1%比例法與絕對(duì)濃度法檢測(cè)結(jié)果比較待測(cè)菌株采用WHO/IUATLD耐藥性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)絕對(duì)濃度法和1%比例法檢測(cè)，兩方法檢測(cè)出的耐藥率均為53.8%(85/185)，藥敏試驗(yàn)結(jié)果一致。說(shuō)明使用的測(cè)定方法對(duì)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)下的藥敏檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響。二、WHO/IUATLD 1%比例法與我國(guó)現(xiàn)行方法檢測(cè)結(jié)果的比較1. 藥物敏感性結(jié)果的比較：158株試驗(yàn)菌株經(jīng)不同檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和方法檢測(cè)耐藥性，結(jié)果見(jiàn)表1。表1WHO/IUATLD 1% 比例法

11、與我國(guó)現(xiàn)行方法藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較（菌株數(shù)）我國(guó)方法WHO/IUATLD 1%比例法合計(jì)敏 感耐 藥敏感73679耐藥07979合計(jì)7385158由表1可見(jiàn)：WHO/IUATLD標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的耐藥率為53.8%(85/158)，我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為50.0%(79/158)；經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)顯著性 (2=0.46，P>0.05)。2.各藥物檢測(cè)結(jié)果比較：見(jiàn)表25，可見(jiàn)WHO/IUATLD 1%比例法檢測(cè)出耐INH、SM、EMB和RFP率分別為41.8%(66/158)、34.2%(54/15)、22.1%(35/158)和27.8%(44/158)；我國(guó)現(xiàn)行方法檢測(cè)結(jié)果分別為34.2

12、%(54/158)、30.4%(48/158)、18.4%(29/158)和27.2(43/158)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩標(biāo)準(zhǔn)在檢測(cè)INH時(shí)，耐藥率差異具有顯著性(218.4，P<0.01)，其余三種藥物兩標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)顯著性(P>0.05)。表2WHO/IUATLD 1%比例法與我國(guó)現(xiàn)行方法檢測(cè)INH藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較（菌株數(shù)）我國(guó)方法WHO/IUATLD 1%比例法合計(jì)敏感耐藥敏感9113104耐藥15354合計(jì)9266158注：兩種方法檢測(cè)的耐藥率比較218.4，P< 0.01 表3 WHO/IUATLD 1%比例法與我國(guó)現(xiàn)行方法檢測(cè)SM藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較（菌株數(shù)）我國(guó)方

13、法WHO/IUATLD 1%比例法合計(jì)敏感耐藥敏感1046110耐藥04848合計(jì)10454158 注：兩種方法檢測(cè)的耐藥率比較20.52，P> 0.05 表4WHO/IUATLD 1%比例法與我國(guó)現(xiàn)行方法檢測(cè)EMB藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較（菌株數(shù)）我國(guó)方法WHO/IUATLD 1%比例法合計(jì)敏感耐藥敏感1218129耐藥22729合計(jì)12335158注：兩種方法檢測(cè)的耐藥率比較20.71，P> 0.05 表5WHO/IUATLD 1%比例法與我國(guó)現(xiàn)行方法檢測(cè)RFP藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較（菌株數(shù)）我國(guó)方法WHO/IUATLD 1%比例法合計(jì)敏感耐藥敏感1132115耐藥14243合計(jì)114441

14、58注：兩種方法檢測(cè)的耐藥率比較20.02，P> 0.05 討論近年來(lái)，結(jié)核病發(fā)病率上升以及結(jié)核分支桿菌對(duì)常用抗結(jié)核藥物的耐藥性特別是耐多藥性(MDR)的增多，對(duì)國(guó)家結(jié)核病規(guī)劃實(shí)施效果的影響正在日益增加3-7?；谀壳盃顩r，WHO/IUATLD建議，結(jié)核分支桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)的結(jié)果應(yīng)做為評(píng)價(jià)和改進(jìn)國(guó)家結(jié)核病控制措施的重要參考因素之一8。為使國(guó)際上結(jié)核分支桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)具有可比性，1997年WHO/IUATLD主持制定了標(biāo)準(zhǔn)化的結(jié)核分支桿菌藥物敏感性監(jiān)測(cè)指南1。該指南所規(guī)定的結(jié)核分支桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)濃度標(biāo)準(zhǔn)有別于我國(guó)過(guò)去和當(dāng)前規(guī)定的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中采取的藥物濃度。因此，需要評(píng)價(jià)耐藥性檢測(cè)時(shí)使用的藥

15、物濃度標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法對(duì)耐藥性檢測(cè)結(jié)果的影響，以便使我們檢測(cè)的耐藥性結(jié)果與國(guó)際上有可比性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：(1) 結(jié)核分支桿菌耐藥性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所得結(jié)果具有一定影響。部分藥物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的濃度相差較大(如INH，我國(guó)現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與WHO/IUATLD規(guī)定的檢測(cè)濃度相差達(dá)5倍)，不同檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果符合性較差。特別是對(duì)從復(fù)治患者分離的菌株，由于該部分菌株具有藥物接觸史，因此此類菌株經(jīng)過(guò)藥物篩選或可能因基因突變而導(dǎo)致待測(cè)菌株的最低抑菌濃度（MIC）發(fā)生變化。當(dāng)采用濃度較低的WHO/IUATLD標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)時(shí)，由于篩選出的耐藥菌株增加，會(huì)直接影響耐藥率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果；對(duì)于原發(fā)耐藥率的影響，尚需進(jìn)一步試驗(yàn)予以證實(shí)。

16、(2) 在相應(yīng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)下，使用的測(cè)定方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果不產(chǎn)生影響。盡管WHO/IUATLD推薦采用1%比例法進(jìn)行藥物敏感性的檢測(cè)，但不排斥使用其它經(jīng)質(zhì)量控制證實(shí)結(jié)果可靠的方法進(jìn)行耐藥性的檢測(cè)1，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明測(cè)定方法對(duì)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)下的檢測(cè)結(jié)果不產(chǎn)生影響。但應(yīng)注意的是我國(guó)目前規(guī)定的絕對(duì)濃度法，檢測(cè)時(shí)的接種菌量較大(每支培養(yǎng)基接種10-3 mg菌)。有資料顯示：較大的接種菌量可能造成耐藥性檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偽耐藥性，特別是檢測(cè)的藥物濃度較低時(shí)9。為此，Canetti等10曾建議：適宜的接種菌量應(yīng)控制待測(cè)菌株在對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)為100250個(gè)。這樣，在測(cè)定耐藥性時(shí)，每支培養(yǎng)基接種的活菌數(shù)量約相當(dāng)于10-

17、410-5 mg。 作者單位：丁北川（100035 北京結(jié)核病控制研究所）趙亭（100035 北京結(jié)核病控制研究所）蓋亞茹（100035 北京結(jié)核病控制研究所）屠德華 （100035 北京結(jié)核病控制研究所）參考文獻(xiàn)1，中國(guó)防癆協(xié)會(huì). 結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程. 北京：中國(guó)防癆協(xié)會(huì)，1995.2，WHO/IUATLD Global Working Group on Antituberculosis Drug Resistance Surveillance. Guideline for surveillance of drug resistance in tuberculosis. WH

18、O/IUATLD，1997.3，Cohn D, Bustreo F, Raviglion M. Drug resistance in tuberculosis: review of the world-wide situation and WHO/IUATLD global surveillance project. Clin Infect Dis, 1997, 24 Suppl 1：S121-S130.4，Kochi A, Vareldzis B, Styblo K. Multi-drug resistant tuberculosis and its control. Res Microbiol, 1993,144：104-110.5，Kim SJ, Hong YP. Drug resistance of Mycobacterium tuberculosis in Korea. Tuberc Lung Dis ,1992,73：219-224.6，F(xiàn)rieden DR, Sterling T, Pablos-Mendez A, et al. The emergence of drug-resistant tuberculosis in New York City. N Engl J Med,1993,328：521-526.7，Braun MM, Kibur