反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的患者T輔助細(xì)胞免疫應(yīng)答方式的研究

1、反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的患者T輔助細(xì)胞免疫應(yīng)答方式的研究    #e#                      作者：楊桂艷，姜英華，吳洪秋，曾偉榮【關(guān)鍵詞】  T輔助細(xì)胞摘要：目的：研究不明原因反復(fù)體外受精胚胎移植(試管嬰兒，IVF-ET)失敗的患者機(jī)體T輔助細(xì)胞1（Th1）及T輔助細(xì)胞2(Th2)免疫應(yīng)答方式，為治療不明原因反復(fù)

2、體外受精-胚胎移植失敗提供理論依據(jù)。方法：將不明原因的三次及三次以上IVF-ET失敗的患者作為研究對(duì)象，一個(gè)周期IVF-ET成功妊娠的患者作為對(duì)照組，抽取非治療周期靜脈血分離單個(gè)核細(xì)胞并于37，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，分離上清，ELISA法測(cè)定上清液中INF-/IL10含量，計(jì)算INF-/IL10的比值，從而反映機(jī)體Th1、Th2細(xì)胞的免疫應(yīng)答方式。結(jié)果：反復(fù)IVF-ET失敗的患者9例中有7例TH1細(xì)胞因子（INF-）濃度是Th2細(xì)胞因子（IL10）的3倍，有顯著性差異；反復(fù)IVF-ET失敗的患者9例中有4例機(jī)體Th1細(xì)胞因子（INF-）是Th2細(xì)胞因子（IL10）的9倍，呈Th1強(qiáng)勢(shì)反

3、應(yīng)，而對(duì)照組9例中僅1例且發(fā)生早期流產(chǎn)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：部分反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的患者機(jī)體Th1 Th2免疫應(yīng)答失衡，呈Th1優(yōu)勢(shì)反應(yīng)，提示細(xì)胞免疫過(guò)強(qiáng)。關(guān)鍵詞：  反復(fù)體外受精-胚胎移植失??；  T輔助細(xì)胞；  優(yōu)勢(shì)反應(yīng)Study on T Helper Cell Immune Response Type in Women with Unexplained Recurrent IVF-ET FailureAbstract： Objective：To study the Th1 and Th2 response type in women with un

4、explained recurrent IVF-ET failure, and to provide theoretic evidence on dealing with recurrent IVF-ET failure. Method： Blood sample was taken from 9 women received 3 unexplained failure IVF-ET cycles (study group), while 9 women with successful IVF-ET cycle being controlled. The lymphocyte was sepa

5、rated, and then was cultured at 37，5%CO2 for 72 hours, concentration of INF-,IL10 was measured by ELISA，the INF-/IL10 rate was calculated. Result： 7 from 9 in study group had INF-/IL10 rate more than 3, while only 2 from 9 in control group and 4 from 9 in study group had INF-/IL10 rate more than 9,

6、while only 1 from 9 in control group and the patient got early abortion. Conclusion： Large partial women with unexplained recurrent IVF-ET failure had T helper cell immune respond imbalance. Th1 cytokines was strong response in large partial women with unexplained recurrent IVF-ET failure, and it wa

7、s obvious in some patients.Key words：  Reccurent unexplained IVF-ET failure；  T helper cell；  Strong response體外受精-胚胎移植是一種有效的使輸卵管阻塞、男方少弱精及各類(lèi)難治性不孕癥夫婦喜得后代的技術(shù)，其一個(gè)治療周期的妊娠率達(dá)40%左右，累計(jì)妊娠率高達(dá)80%，已知的反復(fù)植入失敗的原因有：年齡過(guò)大卵子老化、卵巢反應(yīng)不良可供選擇的優(yōu)質(zhì)胚胎少、子宮內(nèi)膜嚴(yán)重受損、輸卵管積水等，但也有一些患者雖然植入優(yōu)質(zhì)胚胎、子宮內(nèi)膜正常、染色體檢查正常仍然反復(fù)種植失敗，有學(xué)者認(rèn)為與

8、機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān)，因此我們研究了反復(fù)不明原因種植失敗的患者血清中單個(gè)核細(xì)胞的INF-/IL10的含量及比值了解 T 輔助細(xì)胞的免疫應(yīng)答方式，介紹如下：1  材料與方法1.2  研究方法：10ml靜脈血抗凝，淋巴細(xì)胞分離液梯度離心分離單個(gè)核細(xì)胞，加入含5% 人血清白蛋白及植物血凝素的1640培養(yǎng)液1ml，將淋巴細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至2×106/ml，置37，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，分離上清，于-70低溫冰箱保存待測(cè)。INF-IL10試劑盒購(gòu)于深圳晶美工程有限公司，采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定標(biāo)本中INF-|IL10的含量（標(biāo)本按1：8稀釋?zhuān)?1.3 

9、; 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用X2檢驗(yàn) 。     2  結(jié)果 2.1  IFN-/IL-10>1：研究組9例中7例（77.77%），而對(duì)照組9例中僅4例（44.44%）,其中1例發(fā)生早期流產(chǎn)（No.2），P>0.05。2.2  IFN-/IL-10>3：研究組9例中7例（77.77%），而對(duì)照組9例中僅2例（22.22%）,其中1例發(fā)生早期流產(chǎn)（No.2），P<0.05。2.3  IFN->9倍IL-10：研究組9例中4例（44.44%），而對(duì)照組9例中僅1例（11.11%）,發(fā)生早

10、期流產(chǎn)（No.2），P>0.05，見(jiàn)表1。表1  各標(biāo)本IFN-與IL-10的含量（略）3  討論   體外受精胚胎移植是有效的治療難治性不孕的技術(shù)，其費(fèi)用高成功率低令患者憂心忡忡，如何提高成功率長(zhǎng)期以來(lái)是生殖醫(yī)生及胚胎學(xué)家探討的主要問(wèn)題，如囊胚移植、培養(yǎng)液及移植管的改進(jìn)、移植方法改良等使成功率有所提高，但仍在40%左右徘徊，不能有所突破。尤其是反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的患者，通過(guò)切除輸卵管積水、宮腔粘連分離等手段使一部分患者成功妊娠，但仍有相當(dāng)一部分的患者多次的取卵移植雖然有評(píng)分很高的優(yōu)質(zhì)胚胎仍然不能如愿以?xún)?，作者認(rèn)為可能與機(jī)體的免疫狀態(tài)異常有

11、關(guān)。   機(jī)體免疫效應(yīng)類(lèi)型主要分為細(xì)胞免疫和體液免疫兩類(lèi)，兩者之間的協(xié)調(diào)依靠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞來(lái)維持，根據(jù)分泌的細(xì)胞因子不同，T輔助細(xì)胞分為T(mén)h1細(xì)胞及Th2細(xì)胞，前者分泌IL2及IFN-，后者分泌IL6及IL10,分別調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫和體液免疫，這兩類(lèi)細(xì)胞通過(guò)分泌不同的細(xì)胞因子交互調(diào)節(jié)維持Th1/Th2間的動(dòng)態(tài)平衡，如某種因素打破了這一平衡則可能導(dǎo)致與免疫有關(guān)的疾病，如類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、甲狀腺疾病等。近年來(lái)有學(xué)者研究反復(fù)不明原因流產(chǎn)的患者機(jī)體T輔助細(xì)胞失衡，呈Th1強(qiáng)勢(shì)反應(yīng)，并認(rèn)為通過(guò)夫血淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫可重新調(diào)節(jié)Th1/Th2間的平衡，下調(diào)Th1型細(xì)胞因子，上調(diào)Th2型細(xì)胞

12、因子1，2，從而有效的治療不明原因反復(fù)性流產(chǎn)。本文作者由此得到啟發(fā)，推測(cè)不明原因的反復(fù)的優(yōu)質(zhì)胚胎的種植失敗可能是因?yàn)榘l(fā)生了早期的流產(chǎn)，在種植的10d之內(nèi)發(fā)生了免疫排斥。我們通過(guò)測(cè)定反復(fù)的不明原因種植失敗的患者的血單個(gè)核細(xì)胞分泌IFN-和IL-10的含量得出以下結(jié)論：反復(fù)的不明原因種植失敗的患者9例中有7例（77.77%）呈TH1細(xì)胞強(qiáng)勢(shì)應(yīng)答，表現(xiàn)為IFN-與IL-10的比值大于3倍以上，而對(duì)照組9例中僅2例（22.22%） 的患者呈Th1細(xì)胞強(qiáng)勢(shì),有顯著性差異；在研究組中有4例（44.44%）IFN-含量高于IL-10九倍以上，而對(duì)照組僅1例，且發(fā)生了自然流產(chǎn)。   眾所周

13、知，胚胎是同種半異體抗原，在體外受精-胚胎移植過(guò)程中，數(shù)個(gè)優(yōu)質(zhì)胚胎被直接移植入子宮，其是否能夠在母體子宮內(nèi)生存、生長(zhǎng)和發(fā)育而不被排斥，除了胚胎本身的發(fā)育潛能、染色體外其中發(fā)生在母胎界面的免疫也起著一定的作用。近年來(lái)許多學(xué)者用Thl/Th2型細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)機(jī)制研究母胎界面的免疫。Kent發(fā)現(xiàn)Th1型細(xì)胞因子干擾滋養(yǎng)細(xì)胞的侵蝕，抑制子宮內(nèi)膜蛻膜化3。反復(fù)自然流產(chǎn)婦女蛻膜細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)量胚胎毒性細(xì)胞因子，Thl/Th2平衡偏向Thl，而Thl類(lèi)細(xì)胞因子對(duì)胚胎有害，Th1型細(xì)胞因子可引起自然殺傷細(xì)胞的活化浸潤(rùn)，導(dǎo)致胎兒死亡，誘發(fā)妊娠早期人絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡4。Th2細(xì)胞因子被認(rèn)為是免疫調(diào)節(jié)性因子，下調(diào)Thl

14、反應(yīng)，誘導(dǎo)母體對(duì)胎兒同種移植產(chǎn)生免疫耐受，IL10可能是促進(jìn)成功妊娠滋養(yǎng)層生長(zhǎng)的自然反應(yīng)，可減弱胎兒組織的人白細(xì)胞抗原I和II類(lèi)分子的表達(dá)，保護(hù)胎兒免遭母體免疫系統(tǒng)的排斥5。   本研究提示，Th1的強(qiáng)勢(shì)反應(yīng)可能是不明原因反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的原因之一，有必要擴(kuò)大樣本排除混雜因素進(jìn)行進(jìn)一步的研究。夫血淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫是否對(duì)部分反復(fù)失敗的患者有利、是否可以下調(diào)這類(lèi)患者Th1型細(xì)胞因子是值得進(jìn)一步探討的問(wèn)題。參考文獻(xiàn)：1  趙愛(ài)民，林其德.Th1/Th2細(xì)胞因子與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，20 suppl:351-352.2  邱麗

15、華，林其德，洪燕，等原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)患者主動(dòng)免疫治療前后T輔助細(xì)胞1、2型細(xì)胞因子的變化.中華婦產(chǎn)科雜志，2001，36（7）：408-4103  kent AS, Sulivan MH, Sun MY, et al. Effect of interleukin 6 and tumor necrosis factor on prostagland in production by cultured human fetal membranesJ.Prostaglandins,1993,46(4):351-359.4  邢福祺，孔令紅，陳士嶺，等腫瘤壞死因子和干擾素誘導(dǎo)人絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡的研究J.中華婦產(chǎn)科雜志