瓣蕊唐松草根莖中抗氧化性物質(zhì)的提取研究

1、瓣蕊唐松草根莖中抗氧化性物質(zhì)的提取研究         10-08-23 16:56:00     編輯：studa20                      作者：敖恩寶力格，邰麗華，胡日都胡 【摘要】  目的研究瓣蕊唐松草根莖中提取抗氧化性物

2、質(zhì)的最佳方法及工藝條件。方法用不同溶劑、不同條件對(duì)提取的根莖內(nèi)含物進(jìn)行抗氧化實(shí)驗(yàn)，抗氧化性的測(cè)定采用T-AOC法。結(jié)果瓣蕊唐松草根莖提取物具有抗氧化性;用乙醇與醋醇乙酯提取時(shí)抗氧化性較高;溫度因素對(duì)其抗氧化性影響很大;以乙醇為提取溶劑，最佳提取條件為固液比112.5，浸提時(shí)間60 min，提取溫度60。結(jié)論瓣蕊唐松草在天然抗氧化劑開發(fā)方面有較好的應(yīng)用前景。 【關(guān)鍵詞】  瓣蕊唐松草; 抗氧化性; 提取條件瓣蕊唐松草Thalictrum petaloideum為毛茛科唐松草屬植物，在內(nèi)蒙古自治區(qū)，主要分布于興安盟、呼倫貝爾盟、通遼市、赤峰市、錫林郭勒盟、烏蘭察布盟、大青山、蠻汗山、烏拉

3、山;分布廣，產(chǎn)量極多。其種子入蒙藥，根及根莖入中藥。蒙藥主治肺熱咳嗽，肺膿腫，失眠等;中藥主治腸炎，赤白痢疾，黃痘型肝炎，小兒熱癥等1。最近的研究發(fā)現(xiàn)同屬植物成分具有抗癌、抗凝等功效2，3。起藥效作用的主要成分是生物堿和皂苷4，5，而研究最多的是生物堿，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)和鑒定的唐松草屬植物源生物堿有十幾種。此外，汪冶等5對(duì)偏翅唐松草化學(xué)成分做了研究，分離出皂苷與黃酮類。但對(duì)瓣蕊唐松草的抗氧化作用的研究還處于一片空白。生理情況下，人體有1 %5 %的分子氧通過多種途徑產(chǎn)生氧自由基，過多的氧自由基通過損傷生物大分子，破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，促使疾病的發(fā)生與發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，氧自由基與衰老、腫瘤、炎癥、動(dòng)脈

4、硬化、肝和肺疾病等發(fā)生密切相關(guān)?？寡趸瘎┯捎谀芮宄梭w的這些自由基而具有預(yù)防癌癥、心血管疾病等疾病以及抗衰老的作用。而合成的抗氧化劑如BHA等可導(dǎo)致DNA的損傷及動(dòng)物惡性腫瘤的發(fā)生而其安全性受到質(zhì)疑，因此高效、安全的天然抗氧化劑的提取及其應(yīng)用無疑具有重要的意義6，7。我區(qū)瓣蕊唐松草資源豐富，以此為原料研制生產(chǎn)的成本較低，可創(chuàng)造經(jīng)濟(jì)及社會(huì)效益。通過研究，我們發(fā)現(xiàn)瓣蕊唐松草根莖含有抗氧化物，提取物的抗氧化作用與提取的溶劑、時(shí)間、溫度及固液比有關(guān)?，F(xiàn)將得出的最佳提取方案報(bào)道如下。1 材料與方法1.1 材料實(shí)驗(yàn)用瓣蕊唐松草采自內(nèi)蒙古赤峰市克什克騰旗，采摘后自然涼干，取根莖部分粉碎后保存于陰涼干燥處?？?/p>

5、抗氧化能力檢測(cè)用T-AOC(total antioxidation competence)試劑由南京建成生物工程研究所提供。甲醇、乙醇、醋酸乙酯、正丁醇等均為分析純。主要儀器有721型分光光度計(jì)，MP2002型電子分析天平，DK-600型電熱恒溫培養(yǎng)箱及TDZ4A-W5型離心機(jī)等。1.2 總抗氧化性的檢測(cè)方法T-AOC法浸提物總抗氧化性的檢測(cè)采用T-AOC法。其原理為：樣品中的抗氧化物質(zhì)，能使Fe3+還原成Fe2+，后者可與非啉類物質(zhì)形成穩(wěn)定的橙黃色絡(luò)合物，通過在520 nm比色可測(cè)出其總抗氧化能力的高低。1.3 溶劑對(duì)瓣蕊唐松草抗氧化物質(zhì)提取率的影響 用適當(dāng)?shù)娜軇┨崛∈亲畛Ｓ玫奶崛≈参锍煞值?/p>

6、方法。我們用4種不同極性的溶劑分別提取瓣蕊唐松草根莖中的抗氧化物。分別稱取根莖2.0 g，分別量取10 ml水、甲醇、乙醇、醋酸乙酯和正丁醇，35 恒溫培養(yǎng)箱中浸提60 min，6 000 r/min離心10 min，取上清液，4 冰箱內(nèi)保存。分別取各種上清液1 ml，加1 ml T-AOC試劑，2 ml T-AOC試劑與0.5ml T-AOC試劑，在37 水浴中反應(yīng)30 min后加試劑終結(jié)反應(yīng)，檢測(cè)520 nm處的吸光度。1.4 浸提時(shí)間對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響選取最佳溶劑，固液比為15的條件下，分別提取30，45，60，75，90及120 min。6 000 r/min離心10 min，取

7、上清液，定容至25 ml，測(cè)1 ml溶液的總抗氧化活性，確定最佳提取時(shí)間。1.5 浸提溫度對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響 選取最佳溶劑，固液比為15，最佳提取時(shí)間條件下，分別在25，35，45，60，90 時(shí)進(jìn)行浸提。6 000 r/min離心10 min，取上清液，定容至25 ml，測(cè)1 ml溶液的總抗氧化活性，確定最佳提取溫度。1.6 固液比對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響選取適當(dāng)溶劑，在最佳提取溫度、時(shí)間條件下，分別以1 5，17.5，110，112.5，115的固液比進(jìn)行提取。6 000 r/min離心10 min，取上清液，定容至25 ml，測(cè)1 ml溶液的總抗氧化活性，確定最佳提取固液比。1.7

8、 正交實(shí)驗(yàn)根據(jù)單因素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)提取瓣蕊唐松草根莖抗氧化物質(zhì)的正交表，進(jìn)行提取正交試驗(yàn)，以達(dá)到優(yōu)化提取條件的目的。     10-08-23 16:56:00     編輯：studa202 結(jié)果2.1 溶劑的選擇由圖1中可見，乙醇、醋酸乙酯提取物的抗氧化作用顯著，甲醇提取物抗氧化作用最低。因醋酸乙酯沸點(diǎn)高，后續(xù)度增大，故以乙醇作為適合的溶劑進(jìn)行進(jìn)一步的提取實(shí)驗(yàn)。2.2 浸提時(shí)間對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響由圖2可見，2045 min，吸光值增長(zhǎng)顯著，45 min后，吸光值增長(zhǎng)不再有明顯變化 ，所以，提取時(shí)間以45

9、min為佳。圖1 溶劑對(duì)提取物抗 圖2 浸提時(shí)間對(duì)搞氧化性氧化性的影響 物質(zhì)提取率的影響2.3 溫度對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響由圖3可見，提取溫度從15 升到45 ，吸光值增大，當(dāng)提取溫度高于45 時(shí)吸光值開始降低，可能溫度升高導(dǎo)致溶劑和提取物的極性變化及兩者之間親和力變?nèi)?，?dǎo)致提取率降低，提取物活性下降。因此，提取溫度以45 為佳。2.4 固液比對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響固液比對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響結(jié)果見圖4。由圖4可見，固液比在15110時(shí)，吸光值逐漸增大，當(dāng)固液比小于110時(shí)，吸光值開始降低。因此，提取固液比以110為佳。圖3 溫度對(duì)抗氧化性物質(zhì) 圖4 固液比對(duì)提取物提取率的影響 抗氧化性

10、的影響2.5 正交實(shí)驗(yàn)分別選取最佳時(shí)間、溫度、固液比及上下各一梯度，乙醇作為溶劑進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。見表12。由表2可見，影響提取率的各因素中，影響程度的排序?yàn)镃>A>B，即溫度因素對(duì)抗氧化物質(zhì)的提取影響最大。經(jīng)計(jì)算每個(gè)因素水平的K值，綜合直觀圖比較得出，理論上抗氧化物質(zhì)的最佳提取條件為A3B2C3，即固液比112.5，浸提時(shí)間60 min，提取溫度為60 。表1 乙醇提取瓣蕊唐松草根莖抗氧化含物正交實(shí)驗(yàn)表2 正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果3 結(jié)論氧自由基和脂質(zhì)過氧化關(guān)系到衰老和許多疾病包括癌、糖尿病、高血壓病與高血脂等的病因810。所以，尋找天然、高效、低毒的抗氧化劑已成為各國(guó)生物、醫(yī)學(xué)工作者共同的目

11、標(biāo)。瓣蕊唐松草作為民間草藥，其藥理價(jià)值逐漸被引起重視。最近的研究發(fā)現(xiàn)同屬植物具有抗癌，抗凝作用2，3，而癌癥與體內(nèi)自由基的產(chǎn)生有密切關(guān)系。因此，研究和開發(fā)抗氧化劑及防治與自由基有關(guān)的疾病有重大意義。通過本研究發(fā)現(xiàn)，瓣蕊唐松草根莖具有抗氧化性，用乙醇與醋酸乙酯提取時(shí)抗氧化性較高;溫度因素對(duì)其抗氧化性影響很大;以乙醇為提取溶劑，最佳提取條件為固液比112.5，浸提時(shí)間60 min、提取溫度60 。綜上所述，瓣蕊唐松草具有抗氧化作用，分布廣泛，產(chǎn)量極高，因此進(jìn)一步加強(qiáng)其抗氧化性和藥理研究，使其得到有效的開發(fā)和利用，對(duì)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重大意義和價(jià)值。但具體是哪種物質(zhì)對(duì)抗氧化起主要作用，尚需進(jìn)一步的研

12、究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 馬毓泉.內(nèi)蒙古植物藥志，第5卷 M. 呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1994：453.2 陳 琪，戚穗堅(jiān)，彭文烈，等. 新型植物來源生物堿-唐松草阿原堿對(duì)人體腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒性研究 J. 中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2001，40(4)：9.3 李詒光，羅永明，陳 杰. 唐松草屬植物的化學(xué)與藥理研究概況 J. 江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，13(2)：93.4 陳四保，高光耀，陳士林，等. 狹序唐松草中雙芐基異喹啉生物堿成分的研究 J. 中草藥，2005，36(4)：487.5 汪 冶，楊小生，趙 超，等. 滇產(chǎn)偏翅唐松草化學(xué)成分的研究J. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，

13、2002，14(5)：24.6 龔建武，王曉春. 山楂水提液清除氧自由基作用的研究 J. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，12(3)：568.7 扶 雄，于淑娟，閔亞光，等. 從甘蔗中提取天然抗氧化活性物質(zhì) J. 甘蔗糖業(yè)，2003，5：37.8 Vimala S, Adenan MI. Malaysian tropical forest medicinal plants: a source of Antural antioxidants J. Journal of Tropical Forest Products, 1999, 5:32.9 Wickens, Andrew P. Ageing and

14、 the free radical theory J. Respirantion Physiology. 2001,128(3):379.10 Huang D R, Proctor G R, Driscoll S D. Pyridones as potential antitumor agents : 4- pyridones and bioisosteres of 3-acetoxy-2-pyridone J. J Pharm Sci. 1980,69(3):1074.     10-08-23 16:56:00    &

15、#160;編輯：studa202 結(jié)果2.1 溶劑的選擇由圖1中可見，乙醇、醋酸乙酯提取物的抗氧化作用顯著，甲醇提取物抗氧化作用最低。因醋酸乙酯沸點(diǎn)高，后續(xù)度增大，故以乙醇作為適合的溶劑進(jìn)行進(jìn)一步的提取實(shí)驗(yàn)。2.2 浸提時(shí)間對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響由圖2可見，2045 min，吸光值增長(zhǎng)顯著，45 min后，吸光值增長(zhǎng)不再有明顯變化 ，所以，提取時(shí)間以45 min為佳。圖1 溶劑對(duì)提取物抗 圖2 浸提時(shí)間對(duì)搞氧化性氧化性的影響 物質(zhì)提取率的影響2.3 溫度對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響由圖3可見，提取溫度從15 升到45 ，吸光值增大，當(dāng)提取溫度高于45 時(shí)吸光值開始降低，可能溫度升高導(dǎo)致溶劑和提取

16、物的極性變化及兩者之間親和力變?nèi)?，?dǎo)致提取率降低，提取物活性下降。因此，提取溫度以45 為佳。2.4 固液比對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響固液比對(duì)抗氧化物質(zhì)提取率的影響結(jié)果見圖4。由圖4可見，固液比在15110時(shí)，吸光值逐漸增大，當(dāng)固液比小于110時(shí)，吸光值開始降低。因此，提取固液比以110為佳。圖3 溫度對(duì)抗氧化性物質(zhì) 圖4 固液比對(duì)提取物提取率的影響 抗氧化性的影響2.5 正交實(shí)驗(yàn)分別選取最佳時(shí)間、溫度、固液比及上下各一梯度，乙醇作為溶劑進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。見表12。由表2可見，影響提取率的各因素中，影響程度的排序?yàn)镃>A>B，即溫度因素對(duì)抗氧化物質(zhì)的提取影響最大。經(jīng)計(jì)算每個(gè)因素水平的K值

17、，綜合直觀圖比較得出，理論上抗氧化物質(zhì)的最佳提取條件為A3B2C3，即固液比112.5，浸提時(shí)間60 min，提取溫度為60 。表1 乙醇提取瓣蕊唐松草根莖抗氧化含物正交實(shí)驗(yàn)表2 正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果3 結(jié)論氧自由基和脂質(zhì)過氧化關(guān)系到衰老和許多疾病包括癌、糖尿病、高血壓病與高血脂等的病因810。所以，尋找天然、高效、低毒的抗氧化劑已成為各國(guó)生物、醫(yī)學(xué)工作者共同的目標(biāo)。瓣蕊唐松草作為民間草藥，其藥理價(jià)值逐漸被引起重視。最近的研究發(fā)現(xiàn)同屬植物具有抗癌，抗凝作用2，3，而癌癥與體內(nèi)自由基的產(chǎn)生有密切關(guān)系。因此，研究和開發(fā)抗氧化劑及防治與自由基有關(guān)的疾病有重大意義。通過本研究發(fā)現(xiàn)，瓣蕊唐松草根莖具有抗氧化性

18、，用乙醇與醋酸乙酯提取時(shí)抗氧化性較高;溫度因素對(duì)其抗氧化性影響很大;以乙醇為提取溶劑，最佳提取條件為固液比112.5，浸提時(shí)間60 min、提取溫度60 。綜上所述，瓣蕊唐松草具有抗氧化作用，分布廣泛，產(chǎn)量極高，因此進(jìn)一步加強(qiáng)其抗氧化性和藥理研究，使其得到有效的開發(fā)和利用，對(duì)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重大意義和價(jià)值。但具體是哪種物質(zhì)對(duì)抗氧化起主要作用，尚需進(jìn)一步的研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 馬毓泉.內(nèi)蒙古植物藥志，第5卷 M. 呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1994：453.2 陳 琪，戚穗堅(jiān)，彭文烈，等. 新型植物來源生物堿-唐松草阿原堿對(duì)人體腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒性研究 J. 中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2001，40(4)：9.3 李詒光，羅永明，陳 杰. 唐松草屬植物的化學(xué)與藥理研究概況 J. 江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，13(2)：93.4 陳四保，高光耀，陳士林，等. 狹序唐松草中雙芐基異喹啉生物