sop液相色譜崗位分析方法性能標準、其他要求和步驟

1、中華人民共和國安徽出入境檢驗檢疫局The Chemical Laboratory of AHCIQ標準操作程序Sta ndard Operati on Procedure液相色譜崗位分析方法性能標準、其他要求和步驟Concerning the Performa nee of An alytical Methodsand the Interpretation of Results at LC Post方法編號SOP-LC-XXX批準人起草人版本/版次簽發(fā)人修訂次數(shù)簽發(fā)日期驗證人實施日期驗證日期2 / 21安徽出入境檢驗檢疫局化學技術中心液相色譜崗位分析方法性能標準、其他要求和步驟1定義1.1 準

2、確度 檢測結果與可接受參考值之間的符合度。 通過測定真實性和精密度來確定。1.2 誤差指測試樣品符合規(guī)定的概率， 盡管獲得的是不符合規(guī)定的測定 （是一個假的不 符合規(guī)定的決定 ）。1.3 分析物將要檢測、鑒別和 /或定量的物質以及分析過程中產生的衍生物。1.4 誤差測試樣品確實不符合規(guī)定的概率， 盡管獲得的是符合規(guī)定的測定 （是一個假的 符合規(guī)定的決定 ）。1.5 偏差指檢測結果與可接受參考值之間的差異。1.6 標準校準 用參考基準值的測量值來代表所測物質量的測量手段。1.7 認證過的基準物質 （CRM）CRM 指一種有特定分析物含量賦值的物質材料。1.8 共色譜法 指一個將提取物在進行色譜分

3、離之前分成兩個部分的過程。第一部分進行色 譜分離。第二部分與要測定的標準分析物混合。 然后將該混合物也進行色譜分離。 所加標準分析物的量必須與提取物中分析物的估計值相差不大。 設計此方法是要 提高采用色譜法時分析物的鑒別，特別是在沒有適宜的內標物可用時。1.9 協(xié)同試驗 用相同的方法對相同的樣品進行分析以確定該方法的性能特性。該試驗包括 隨機測定誤差和實驗室偏差。1.10 確認方法 能提供全面或補充信息使物質得到明確地鑒定，并且能在感興趣的水平進行 定量的方法。1.11 決定限度（CCa）CCa指等于和高于此值時，可以用a誤差概率得出認為樣品不符合規(guī)定的結論的限度。1.12 檢測容量（CCB）

4、CCB指可以用B誤差概率檢測、鑒別和/或定量樣品中物質的最小含量。 對 于3 / 21未確定允許限量的物質，檢測容量是指用1B統(tǒng)計學概率方法能夠檢測出真正污染的樣品的最低濃度。對于已經建立允許限量的物質，檢測容量則是指用 1B統(tǒng)計學概率方法能夠檢測出允許限量濃度的濃度。1.13 添加樣品材料被已知量的待測物強化的樣品。1.14 實驗室間試驗 （比對）由兩個或多個實驗室依照預先確定的測定檢測性能條件， 對同樣品的檢測 進行組織、性能和評價測試。 根據目的，試驗可以分為協(xié)作試驗和熟練程度試驗。1.15 內標（IS）一種理化特性與待測分析物盡可能相同， 并且樣品中不存在的物質。 它被加 到每份樣品中

5、及每一個校準標準中。1.16 實驗室樣品被送到實驗室作檢查和測試而準備的一種樣品。1.17 關心水平樣品中明顯地確定其符合法規(guī)規(guī)定的物質或分析物的濃度。1.18 最低要求性能限度 （MRPL） 樣品中至少必須檢測和確認的分析物的最低含量。1.19 性能特點 可以歸結于分析方法的使用特點。這可以是特異性、準確性、真實性、精密度、重復性、重現(xiàn)性、回收率、檢測性能和抗耐性。1.20 分析方法的性能標準 可以來判斷該方法是否適合于其目的、 并產生可靠結果的性能特點要求。1.21 允許限度法規(guī)中確定的物質的最高殘留限量、最高水平和其他最大耐受量。1.22 精密度在規(guī)定（預先確定 ）條件下，獲得的相互獨立

6、的檢測結果之間的一致程度。精 密度測定通常用不精確性表示并以檢測結果的標準偏差來計算。 標準偏差大則精 密度就低。1.23 熟練試驗允許實驗室選擇其自己的方法來分析同一個樣品， 假設這些方法在常規(guī)條件 下使用。試驗必須按照相應的標準操作程序來設計或執(zhí)行， 并可用來評價方法的 重現(xiàn)性。1.24 定性方法 一種可以根據物質的化學、生物學或物理特性鑒別該物質的分析方法。1.25 定量方法 一種可以確定物質的數(shù)量或質量特性， 以便可以用適當單位的數(shù)值表4 / 21示的分析方法。1.26 試劑空白測定 不用測試物或用相當數(shù)量的溶劑替代測試物而進行的全部分析過程。1.27 回收率 在分析過程中回收到物質的

7、實際濃度百分比。如果是沒有認證過的基準物 質，應在方法確認試驗中予以測定。1.28 基準物質指其一種或幾種特性已經被確認方法所證實， 從而可以用來校正設備或校驗 測定方法的物質。1.29 重復性 在重復條件下的精密度。1.30 重復條件 在同一個試驗室由同一個操作人， 用相同的儀器、 相同的方法對同一個檢測 項目進行檢測，獲得的獨立檢測結果的條件。1.31 重現(xiàn)性 在重現(xiàn)條件下的精密度。1.32 重現(xiàn)條件 在不同試驗室由不同的操作人， 用不同的儀器、 相同的方法對同一個檢測項 目進行檢測，獲得的獨立檢測結果的條件。1.33 抗耐性 分析方法對試驗條件，可以表示為樣品材料、分析物、貯存條件、環(huán)境

8、和或 樣品制備條件等改變的敏感性， 在此條件下， 該方法可以按現(xiàn)有方法應用或作特 別的輕微修正。對于實際中可能遇到的各種變化 （如試劑的穩(wěn)定性、樣品的組分、酸度、溫度 ）的所有試驗條件，任何能夠影響分析結果的變化都應盡可能的指出。1.34 樣品空白測定 對不含分析物的樣品的測試部分進行的完整分析過程。1.35 篩選方法用來測定關注水平的某一物質或某類物質的存在方法。 這些方法具有對樣品 的高吞吐量能力， 并被用來對大量的樣品進行審定， 以確定是否潛在地不符合規(guī) 定。它們應該特別地設計，以避免出現(xiàn)符合的假結果。1.36 單一實驗室試驗 （ 室內確認 ）一種由一個實驗室在適當長的時間間隔內， 在不

9、同的條件下， 用一種方法來 分析相同或不同的測試材料的分析試驗。1.37 特異性一種區(qū)別被測分析物與其他物質的能力的方法。 這種特性是所述測定技術的 主要功能，但是可以根據化合物或基質的類別而變化。1.38 標準添加指測試樣品被分為兩個（或多個 ）測試部分的過程。其中一部分直接分析，另 一部分在分析前被添加了已知數(shù)量的標準分析物。 所加標準分析物的量必須是樣 品中估計的分析物的量的 2 倍到 5 倍之間?？紤]到分析過程的回收率，設計此 步驟是要5 / 21確定樣品中的分析物的含量。1.39 標準分析物 一種已知的，并被認證過含量和純度，用作分析中參照物的分析物。1.40 物質特定的或有確定化學

10、組成的物質及其代謝物。1.41 測試部分指從進行檢測或觀察的測試樣品分出的物質的量。1.42 測試樣品 指由一種實驗室樣品制備，并由此獲取測試部分的一種樣品。1.43 真實度 從大量的測試結果獲得的平均值與可接受的參照值之間的符合程度。 真實度 通常以偏差表示。1.44 單位指 ISO 31（20）和歐盟指令 71/354/EC 中所述的那些單位。1.45 確認 通過檢查和提供有效的證據，以確定一個特定計劃應用的具體要求得到實行。1.46 實驗室內重復性在同一個試驗室，在適當長的時間間隔內和在規(guī)定 （預先確定）的條件下 （涉及 到如方法、測試材料、操作人員、環(huán)境 ）獲得的精密度。2. 分析方法

11、性能標準和其他要求2.1總體要求2.1.1 樣品處理樣品應該以有最大機會檢測出物質的方式獲得、 處理和加工。 樣品處理過程6 / 21應防止偶然污染或丟失分析物的可能性。2.1.2 方法性能2.121 回收率在樣品分析過程中，如果采用了一個固定的回收率校正因子，則應對每一批 樣品測定回收率。如果回收率在限度以內，才能采用固定的回收率校正因子。否 則，應采用從該批樣品獲得的特定回收率因子，除非采用標準添加程序（見3.5）或用內標法來定量測定樣品中分析物，才可應用樣品中分析物的特定回收率因 子。2.1.2.2 特異性在試驗條件下一個方法應能區(qū)分分析物和其他物質之間的差別。必須提供這種區(qū)別估計可能達

12、到的程度。當采用所述的測定技術時需要克服任何可預見的來 自物質（如同族物、同類物、要檢測的殘留物）代謝產物的干擾。特別重要的是要 調查來自基質組分的干擾。2.2 篩選方法只有那些以記錄的可追溯方式證明其有效，并且在測定的水平假符合串v5%（3-誤差）的分析技術才可用于指令 96/23/EC 規(guī)定的篩選目的。在出現(xiàn)可疑 結果時，應用確認方法進行確認。2.3 有機殘留物和污染物的確認方法有機殘留物或污染物的確認方法應提供關于分析物化學結構的信息。因此僅根據色譜分析而不采用光譜檢測的方法不適于單獨作為確認方法。但是，如果一個技術缺乏足夠的特異性，應該通過包括合適的凈化，色譜分離和光譜檢測等分 析技術

13、來達到所需的特異性。以下方法或方法聯(lián)合被認為是適于鑒定所指定的物質組的有機殘留物或污 染物。表1有機殘留物或污染物的確認方法（液相色譜部分）限度只要符合或在線或離線色譜分離只 要采用全掃描技術或采用至少3（B組）或4（A組）個鑒別點作為不記 錄全部質譜的技術測疋技術96/23/EC附錄1物質帶有質譜檢測的液譜A和B組帶紅外光譜檢測的液譜A和B組帶二級管矩陣檢測全程掃 描的液譜7 / 21必須滿足紅外光譜吸收的特殊要求2.3.1 共同的性能標準和要求確認方法應提供關于分析物化學結構的信息。 當有一個以上化合物給出相同 反應時，那么該方法不應區(qū)別不開這些化合物。僅根據色譜分析而不采用光譜檢 測的方

14、法不適于單獨作為確認方法。如果在方法中使用內標物，內標物應在提取過程開始時就加入到測試部分。 根據可能性，內標物應采用穩(wěn)定性同位素標記的分析物一特別適用于質譜檢測，或結構與分析物類似的化合物。當沒有適宜的內標物可用時，分析物的鑒別應采用混合色譜來確認。此時， 只需獲得一個峰，增高的峰的高度（或面積）應等于加入的分析物的量。對于 LC， 半峰高處的峰寬應在原始峰寬的 90%110%范圍內，保留時間應在 5%范圍內 變化。參照物或含有等于或接近允許限度或判定限度（超標控制對照樣品）的已知 量的分析物添加材料，以及陰性控制材料和試劑空白最好應當在整個過程中與每 一批分析的樣品一塊進行操作。注入提取物

15、到分析儀器的順序如下：試劑空白， 陰性控制材料，需要確認的樣品，陰性控制材料，最后是超標控制對照樣品。任 何與這種順序不同的變化應被證明是適宜的。232 對定量分析方法的額外性能標準和其他要求2.321 定量方法的真實度在重復分析己鑒定的參照材料時，試驗測定的回收率折算己知值的平均質量 范圍的指導范圍如表 2。表2定量方法的最低真實度真值含量（mg/kg）偏差范圍（%）v0.001-50+200.0010.01-30+100.01010-20+101010001010000v5在沒有認證過的基準物質可使用時，通過向空白基質中加入已知量的分析物 得到的回收率來評價測定的

16、真實度是可以接受的。 用平均回收率折算的數(shù)據只有 落在表 2B組必須滿足紫外光譜吸收的特殊要求帶熒光檢測的液譜帶紫外/可見光檢測（單一波長）的液譜只適用于自然發(fā)射熒光的分子和經 過轉化或衍生后發(fā)射熒光的分子只要采用至少兩個不同的色譜系統(tǒng)或第二個獨立的檢測方法8 / 21所示的范圍內才可接受。2.3.2.2 定量方法的精密度對于測試物中的禁用物質，精密度實驗應在方法測定低限、兩倍方法測定低 限和十倍方法測定低限三個水平進行；對于已制定 MRL 的，精密度實驗應在方 法測定低限、MRL、選一合適點三個水平進行；對于未制定 MRL 的，精密度實 驗應在方法測定低限、常見限量指標、選一合適點三個水平進

17、行。重復測定次數(shù)至少為 6。實驗室內部的變異系數(shù)參考范圍見表 3表3實驗室內變異系數(shù)被測組分含量實驗室內變異系數(shù)（CV，%）0.1 g/kg431/kg3010 g/kg21100 g/kg151 mg/kg1110 mg/kg7.5100 mg/kg5.31000 mg/kg3.81 %2.710 %2.0100 %1.3注：對于低于lOOyfkg的質量范圍，用Horwitz公式計算會得出不可接受的高值。 因此， 歐盟對低于100卩g/kg的質量范圍時僅其CVs應盡可能地低。液相色譜工作崗位依據GB/T 27404-2008實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測執(zhí)行此要求。對于在重復性條件下進行的

18、分析，實驗室內CV 應特別地位于上述數(shù)值的1/22/3 之間。對于在實驗室內重現(xiàn)性條件下進行的分析，實驗室內的CV 不應大于重現(xiàn)性 CV。對于有規(guī)定的允許限度的物質，方法應達到實驗室內的重現(xiàn)性不大于在0.5倍允許限度的濃度時相應得到的重現(xiàn)性 CV。2.3.3 質譜檢測性能標準和其他要求質譜分析作為確證方法適合的原則是僅用于在線或離線色譜分離之后。2.3.3.1 色譜分離對 LC-MS 操作，色譜分離應該選用合適的液相色譜柱。在任何情況下，檢 測條件下分析物最小可接受的保留時間是色譜柱死體積相應保留時間的二倍。測試部分分析物的保留時間（相對保留時間）應在特定保留時間平臺內與校正的標 準保留時間一致。保留時間平臺應與色譜儀分辨率