低溫保存對(duì)白血病源性樹突狀細(xì)胞的影響

1、    作者：黃友章，沈建良，王立新，向丹，鄭培浩，岑堅(jiān)，宮立眾，劉毅，楊平地【摘要】  本研究觀察低溫保存對(duì)白血病源性樹突狀細(xì)胞(LDCs)的生物學(xué)特性和功能的影響。 取急性、慢性髓系白血病骨髓細(xì)胞，將其一部分細(xì)胞立即檢測，一部分細(xì)胞立即培養(yǎng)，一部分細(xì)胞加入細(xì)胞保護(hù)劑低溫保存一定時(shí)間復(fù)溫后培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)加入組合細(xì)胞因子并培養(yǎng)12天，然后分別檢測3組細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞免疫表型、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)及細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)效應(yīng)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行相互比較分析。結(jié)果表明：在細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面，急性、慢性髓系白血病患者骨髓細(xì)胞在

2、不染色或在瑞氏染色下僅見白血病細(xì)胞，而未觀察到"樹突狀"細(xì)胞，但經(jīng)組合的細(xì)胞因子培養(yǎng)后，均出現(xiàn)了"樹突狀"形態(tài)的細(xì)胞，低溫保存前、后二者比較，無明顯差異；在細(xì)胞表面免疫標(biāo)志表達(dá)方面，經(jīng)組合細(xì)胞因子培養(yǎng)的細(xì)胞與未培養(yǎng)的細(xì)胞相比，細(xì)胞表面表達(dá)的CD80、CD54、HLADR、CD1a、CD83、CD86明顯上調(diào)，而CD14表達(dá)則明顯下調(diào)，低溫保存前、后的細(xì)胞在上述幾種細(xì)胞表面免疫表達(dá)指標(biāo)方面相比較無明顯差異；低溫保存后的白血病細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)后，不僅有明顯的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，而且在與T細(xì)胞作用后T細(xì)胞表面抗原CD8和CD25免疫標(biāo)記細(xì)胞明顯增多，明顯地表現(xiàn)了CTL

3、殺傷自體白血病細(xì)胞的效應(yīng)。結(jié)論：髓系白血病細(xì)胞在組合細(xì)胞因子培養(yǎng)條件下，可誘生為LDC；LDC的誘生在生物學(xué)特性方面不受低溫保存的影響。 【關(guān)鍵詞】  白血病細(xì)胞    Influence of Cryopreservation on Leukemic Dendritic Cells Derived from Leukemia Patients       Abstract    This study was aimed to  investigate the influen

4、ce of cryopreservation on  biological properties and function of  leukemic dendritic cells(LDCs)  derived  from patients with acute or chronic leukemia.   Some fresh leukemic cells were detected immediately; some were cultured immediately; some were

5、cryopreserved in 80 with 5% DMSO-6% HES as cryopreservor. After being thawed , they were cultured. The combination of rhGMCSF, rhIL4, rhTNF and other cytokines were added into the culture system. 12 days later, LDCs were assayed for morphology, immunophenotype, mixed lymphocytic reaction (MLR) 

6、 and CTL cytotoxicity on  autologous leukemic cells.  The results showed that  both fresh and cryopreserved leukemic cells obtained from patients  with acute or chronic leukemia revealed  typical DC morphologically by means of using  c

7、ombinations of cytokines in culture,  but there was no significant difference between preor post cryopreservations. LDCs also upregulated the expression of CD80, CD54, HLADR，CD1a, CD83 and CD86, and downregulated the expression of CD14, but there was also no difference as compared with LDC

8、s befor cryopreservation.  LDCs derived from leukemic cells were also capable of stimulating MLR and inducing CTL which could kill autologous leukemic cells obviously. It is concluded that  leukemic cells, regardless of fresh or frozen, can induce  LDCs after culture wi

9、th   cytokine combination. The LDCs can induce CTL targeting autologous leukemic cells, and may be used to  treat MRD as immunotherapy. The induction and biological properties of LDCs are not influenced by cryopreservation.    Key words    leukemic cell; dendr

10、itic cell; cryopreservation    白血病化療后的復(fù)發(fā)率高達(dá)90以上，即使造血干細(xì)胞移植后也有一定比例的復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)原因是因?yàn)榇嬖谖⑿埩舨。∕RD）。針對(duì)MRD的治療，目前有化療、免疫治療等手段，其中樹突狀細(xì)胞（DC）介導(dǎo)的過繼免疫治療最具特異性和應(yīng)用前景1，已知白血病細(xì)胞在細(xì)胞因子作用下可誘導(dǎo)生成DC，這種白血病源性樹突狀細(xì)胞(LDC)既能表達(dá)白血病抗原，又具有致敏T淋巴細(xì)胞的作用。致敏的T淋巴細(xì)胞可特異性殺滅白血病細(xì)胞。然而，在白血病初發(fā)時(shí)，由于白血病細(xì)胞多，腫瘤負(fù)荷大，免疫功能差等因素的影響，應(yīng)用LDC治療療效差，如果在病人獲完全緩解后，其體

11、內(nèi)白血病細(xì)胞已十分稀少，細(xì)胞免疫功能等也基本恢復(fù)，此時(shí)應(yīng)用DC治療MRD療效應(yīng)該明顯。DC雖然可低溫保存，但其功能會(huì)受到一定損傷2，若能在治療前將白血病細(xì)胞先期保存，待白血病取得完全緩解時(shí)，復(fù)蘇白血病細(xì)胞并誘生為DC，用自身DC進(jìn)行過繼免疫治療，臨床應(yīng)用會(huì)十分方便，但急性、慢性髓系白血病細(xì)胞低溫保存后誘生的白血病源性樹突狀細(xì)胞的功能如何？未見報(bào)道，本研究試圖觀察低溫保存白血病細(xì)胞對(duì)白血病源性樹突狀細(xì)胞(LDC)生物學(xué)特性和功能方面的影響。     白血病細(xì)胞來源與分組    經(jīng)臨床、血液檢查、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)

12、標(biāo)準(zhǔn)確診的初發(fā)髓系白血病18例(M0 1例， M1 3例， M2 2例， M3 2例， M4 3例， M5 2例， M6 2例， CML 3例），研究用骨髓25例，其中2例在培養(yǎng)中失敗，5例患者在治療過程中骨髓未達(dá)到完全緩解)。在肝素抗凝下抽取患者骨髓>30 ml，一部分細(xì)胞立即檢測(C組)，一部分細(xì)胞立即進(jìn)行LDC誘導(dǎo)培養(yǎng)(T1組)，另一部分細(xì)胞低溫保存，在患者白血病完全緩解時(shí)復(fù)溫細(xì)胞后進(jìn)行LDC誘導(dǎo)培養(yǎng)(T2組)。采集時(shí)患者的骨髓細(xì)胞形態(tài)分類： M0、M1、M2、M3和M4的原始粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞占73.25%（36%-89%），淋巴細(xì)胞占4.75%（3%-10%）；M4和M5的原始

13、粒細(xì)胞、幼稚單核細(xì)胞占45.6%（32%-71%），淋巴細(xì)胞占2.2%（1%-3%）；M6的原始粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞占27%（25%-29%），原始、早幼紅占14%（13%-15%），淋巴細(xì)胞占4%；CML的原始粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞占5%（4%-7%），中幼粒細(xì)胞占37.3%（20%-50%），淋巴細(xì)胞占3%（2%-4%）。    細(xì)胞保護(hù)劑、白血病細(xì)胞低溫保存與復(fù)溫    取二甲亞砜10 ml、羥乙基淀粉12 g、白蛋白20 g、加入RPMI 1640培養(yǎng)液（Gibco公司產(chǎn)品）內(nèi)至100 ml，4冰箱預(yù)冷作為細(xì)胞保護(hù)劑。取白血病患者骨髓，將有核細(xì)胞調(diào)整至

14、1×1010/L，置4冰箱1小時(shí)，緩慢加入等體積的保護(hù)劑，使二甲亞砜終濃度5%（V/V）、羥乙基淀粉終濃度6%(W/V)、白蛋白終濃度10%(W/V)。分裝于聚丙烯小管(2毫升/管)，置80冰箱過夜，液氮液相中保存。待檢定時(shí)，取出細(xì)胞小管，放入40水浴復(fù)溫，小管內(nèi)細(xì)胞全部融化后立即吸出細(xì)胞懸液，以5倍含10%胎牛血清(FCS)的RPMI 1640培養(yǎng)液稀釋， 400×g離心10分鐘，去上清，洗滌1次，制成細(xì)胞懸液。    LDC的誘導(dǎo)培養(yǎng)3和自體原代白血病細(xì)胞培養(yǎng)    取上述患者低溫保存前、后的骨髓細(xì)胞，用細(xì)胞分離液(1.077 g

15、/cm3)分離，收集單個(gè)核細(xì)胞(MNC)，離心洗滌3次，用含10% FCS的RPMI 1640培養(yǎng)液制備MNC懸液(細(xì)胞形態(tài)分類： M0-M5患者的原早幼細(xì)胞>90%，M6患者的原早幼細(xì)胞>75%，CML患者原早幼粒細(xì)胞>45%)。將MNC移入組織培養(yǎng)瓶(80 ml， Costar)中，每瓶20 ml(3×109/L)，37、5% CO2條件下培養(yǎng)2小時(shí)，收集非黏附細(xì)胞，在5毫升/瓶(2×109/L)細(xì)胞中加入rhGMCSF(1×107U/L，先靈葆雅)、rhIL4(5×106U/L，  PeproTechEC)、2

16、0%FCS的RPMI 1640培養(yǎng)液，從第8天起，再加入rhTNF(5×104U/L，PeproTechEC)和LPS(1×104 ng/L，Sigma)，在培養(yǎng)全過程中隔日半量換液，37、5% CO2條件下培養(yǎng)12天。不加細(xì)胞因子者為自體原代白血病細(xì)胞培養(yǎng)。    細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞表面免疫表型檢測    從培養(yǎng)第1天起至培養(yǎng)結(jié)束，逐日在倒置顯微鏡下低倍鏡觀察培養(yǎng)細(xì)胞。定期取培養(yǎng)細(xì)胞，離心涂片，瑞氏染色，油鏡下觀察。將有膜性面紗狀、梭狀或扁平狀突起的細(xì)胞定為"樹突狀"細(xì)胞。流式細(xì)胞儀(Epics XLAD2517,

17、Beckman Coulter)檢測細(xì)胞表面免疫表型，CD80、CD54、CD1a、CD83、CD86、CD14、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56、CD25和HLADR單克隆抗體均為PharMingen公司產(chǎn)品。    混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)和MTT檢測2    混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)  在白血病完全緩解期取患者外周血20 ml，肝素抗凝，用細(xì)胞分離液(1.077g/cm3)分離出單個(gè)核細(xì)胞，離心洗滌3次，37、5% CO2條件下培養(yǎng)2小時(shí)，取非黏附細(xì)胞，用含20%   FCS的RPMI 1640培養(yǎng)液配制淋巴細(xì)胞懸

18、液備用。    收集上述經(jīng)LDC方法培養(yǎng)的LDC和生長良好的自體原代白血病細(xì)胞，加入絲裂霉素C(0.0025 mg/ml),37孵育20分鐘，洗滌3次，用含10%FCS的RMPI 1640培養(yǎng)液懸浮，分別稱LDC實(shí)驗(yàn)細(xì)胞和自體原代白血病實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。    MTT檢測  實(shí)驗(yàn)分為： 單純淋巴細(xì)胞組：僅含淋巴細(xì)胞。單純LDC實(shí)驗(yàn)細(xì)胞組：僅含LDC實(shí)驗(yàn)細(xì)胞；單純自體原代白血病實(shí)驗(yàn)細(xì)胞組：僅含自體原代白血病實(shí)驗(yàn)細(xì)胞；LDCs實(shí)驗(yàn)細(xì)胞加淋巴細(xì)胞組：含LDCS實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與自體淋巴細(xì)胞；自體原代白血病實(shí)驗(yàn)細(xì)胞加淋巴細(xì)胞組：含自體原代白血病實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與自體

19、淋巴細(xì)胞。    上述各組終體積為200 l(96孔平底培養(yǎng)板，每組復(fù)孔3個(gè))，37、5% CO2條件下培養(yǎng)72小時(shí)，進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)：每孔加入MTT(0.5 g/L，F(xiàn)luka)溶液20 l，再孵育4小時(shí)終止培養(yǎng)， 400×g離心5分鐘，棄孔內(nèi)培養(yǎng)液。每孔中加入DMSO(150 l)，振蕩10分鐘，用酶聯(lián)免疫儀(490 nm)測定各孔OD值。為了表達(dá)方便，根據(jù)各組OD值的不同，我們?cè)O(shè)計(jì)了以剌激指數(shù)表示。    LDC的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的剌激指數(shù)為： LDC實(shí)驗(yàn)細(xì)胞加淋巴細(xì)胞組OD值(單純淋巴細(xì)胞組OD值+單純LDC實(shí)驗(yàn)細(xì)胞組OD值)/(單純淋巴

20、細(xì)胞組OD值+單純L-DC實(shí)驗(yàn)細(xì)胞組OD值)。    自體原代白血病細(xì)胞（ALC）的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的剌激指數(shù)為：自體原代白血病細(xì)胞加淋巴細(xì)胞組OD值(淋巴細(xì)胞組OD值+自體原代白血病細(xì)胞組OD值)/(淋巴細(xì)胞組OD值+自體原代白血病細(xì)胞組OD值)。    細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞效應(yīng)3    CTL誘導(dǎo)  取患者白血病完全緩解期的外周血淋巴細(xì)胞，用何學(xué)鵬等6報(bào)道方法分離T細(xì)胞。在1×106/ml的淋巴細(xì)胞內(nèi)加入含rhIL2( 200 U/ml，遠(yuǎn)策藥業(yè)公司產(chǎn)品)的20% FCS的RPMI 1640培養(yǎng)液，5毫升

21、/瓶，37，5% CO2條件下，隔日半量換液，培養(yǎng)5天收集T細(xì)胞。    實(shí)驗(yàn)分組  TC組：僅為T細(xì)胞；LDC組:僅為LDC；LDC+TC組：T細(xì)胞內(nèi)加入LDC(31)；ALC+TC組：T細(xì)胞內(nèi)加入生長良好的自體原代白血病細(xì)胞(31)。 上述各組細(xì)胞繼續(xù)在含rhIL2的PRMI 1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，第3天半量換液，第5天用不加rhIL2的培養(yǎng)液半量換液，第7天時(shí)，檢測各效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞表面標(biāo)記，收集各組細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞。    CTL效應(yīng)測定  取對(duì)應(yīng)患者生長良好的2×106自體原代白血病細(xì)胞，加200

22、Ci鉻酸鈉，37孵育1小時(shí)，離心洗滌3次，即靶細(xì)胞。按不同效靶比加入效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞，終體積200 l，每組3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)5小時(shí)后， 400×g離心5分鐘，取100 l上清液測cpm值。設(shè)自發(fā)釋放孔（1.0×104靶細(xì)胞加培養(yǎng)液）、最大釋放孔（1.0×104靶細(xì)胞加蒸餾水），結(jié)果以3孔均值表示。按下述公式計(jì)算各組殺傷活性：    殺傷活性(%)=（實(shí)驗(yàn)孔cpm-自發(fā)釋放孔cpm）/（最大釋放孔cpm-自發(fā)釋放孔cpm）×100    數(shù)據(jù)處理    采用STATA  4.0統(tǒng)

23、計(jì)分析軟件進(jìn)行配對(duì)或獨(dú)立t檢驗(yàn)分析，各組值以±SD表示。    結(jié)    果    不染色倒置顯微鏡下觀察    18例患者骨髓原代白血病細(xì)胞經(jīng)LDC誘導(dǎo)培養(yǎng)，在5天左右，均有較多“樹突狀”細(xì)胞和細(xì)胞簇出現(xiàn)，9天形成較多，繼續(xù)培養(yǎng)至12天，未見明顯增多。低溫保存復(fù)溫后的原代白血病細(xì)胞經(jīng)LDC培養(yǎng)后，5天同樣出現(xiàn)"樹突狀"細(xì)胞和細(xì)胞簇，10天形成較多，繼續(xù)培養(yǎng)至12天，也未見增多。這種“樹突狀”細(xì)胞在立即檢測的C組中未檢測到，比較保存前的T1組與保存后的T2組培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞數(shù)，

24、二者差異不明顯，倒置顯微鏡下“樹突狀”細(xì)胞形態(tài)見圖1。    Figure 1. Dendritic cells cultured for 12 days observed by iverted microscopy  (40×10 ).    瑞氏吉姆薩染色形態(tài)分類    白血病細(xì)胞立即（T1組）或低溫保存復(fù)溫后（T2組）經(jīng)LDC培養(yǎng)12天后，細(xì)胞涂片，瑞氏吉姆薩染色，分類計(jì)數(shù)，100%為“樹突狀”細(xì)胞，并未見到培養(yǎng)前的那種白血病細(xì)胞，T1組與T2組比較，差異不明顯，而這種“樹突樣”細(xì)胞在立即檢測的C組

25、中未檢測到，瑞氏吉姆薩染色“樹突狀”細(xì)胞見圖2。    Figure 2.  Dendritic cells  cultured for  12 day (Giemsa's staining, 100×10).    細(xì)胞表面抗原    T1組細(xì)胞或T2組細(xì)胞，經(jīng)LDC培養(yǎng)12天后，細(xì)胞表面抗原發(fā)生了明顯改變，T1組或T2組的細(xì)胞表面抗原與C組細(xì)胞的表面抗原相比，其CD1a、CD83、CD80、CD86、CD54、HLADR的表達(dá)均明顯上調(diào)，而CD14的表達(dá)

26、則明顯下調(diào)， T1組與T2組比較差異不明顯（表1）。    混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)    白血病初發(fā)時(shí)，血液內(nèi)白血病細(xì)胞占優(yōu)勢，一般無法分離患者自身淋巴細(xì)胞，所以培養(yǎng)出的T1組LDC也就無法進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)；只有在白血病完全緩解(CML為慢性期)，淋巴細(xì)胞恢復(fù)正常時(shí)，才能獲取患者自身淋巴細(xì)胞。此時(shí)復(fù)溫低溫保存的白血病原代細(xì)胞（T2組），一部分細(xì)胞經(jīng)LDC培養(yǎng)，一部分細(xì)胞不加任何細(xì)胞因子直接培養(yǎng)，獲得細(xì)胞，對(duì)患者的自身淋巴細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)。結(jié)果顯示：混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)加入經(jīng)LDC培養(yǎng)的細(xì)胞，淋巴細(xì)胞表現(xiàn)有明顯的剌激反應(yīng)（剌激指數(shù)明顯增高），而未加組合

27、細(xì)胞因子培養(yǎng)的原代白血病細(xì)胞（ALC）對(duì)淋巴細(xì)胞未表現(xiàn)出剌激反應(yīng)（剌激指數(shù)未見明顯變動(dòng)）（圖3）。    細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞效應(yīng)    和混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)同理，經(jīng)LDC培養(yǎng)的細(xì)胞與    Figure 3.  Mixed lymphocyte reaction (±SD). ALC： antologus leukemic cells. LDC: leukemic dentritic cells.    白血病完全緩解期的T細(xì)胞作用后，T細(xì)胞表面抗原的表達(dá)發(fā)生了明顯改變，CD8和CD25的

28、免疫標(biāo)記細(xì)胞明顯增多，而未經(jīng)LDC培養(yǎng)的白血病細(xì)胞與這樣的T細(xì)胞作用后，T細(xì)胞表面抗原的表達(dá)未發(fā)生改變（表2）。這種細(xì)胞表面抗原表達(dá)發(fā)生了明顯改變的T細(xì)胞與自身原代白血病細(xì)胞作用后，自身原代白血病細(xì)胞活力明顯降低，表現(xiàn)出細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞效應(yīng)，而未發(fā)生改變T細(xì)胞對(duì)自身原代白血病細(xì)胞活力未見影響（圖4）。    討    論    急性、慢性髓系白血病細(xì)胞通常是指有典型細(xì)胞形態(tài)的原始粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞或原始單核細(xì)胞、幼稚單核細(xì)胞，它們多不具備只有DC才能高表達(dá)的主要組織相容性復(fù)合物分子（HLA類和或類）、CD80、CD86、CD40、CD

29、83和CD1a，也不表現(xiàn)只有具備抗原性的細(xì)胞才有的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，更沒有DC呈遞特異性CTL反應(yīng)。在本實(shí)驗(yàn)中，成功地在組合細(xì)胞因子作用下進(jìn)行培養(yǎng)的急性、慢性髓系白血病細(xì)胞有18例，培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)未再見到原始粒細(xì)胞、早幼粒粒細(xì)胞或原始單核細(xì)胞、幼稚單核細(xì)胞，而出現(xiàn)了典型的DC形態(tài)，細(xì)胞表面的CD80、CD54、HLADR、CD1a、CD83、CD86表達(dá)上調(diào)，CD14表達(dá)下調(diào)。可以初步認(rèn)為，這些細(xì)胞具備了DC的特點(diǎn)，是由白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來的DC。白血病細(xì)胞經(jīng)低溫保存復(fù)溫后培養(yǎng)生成的LDC，在細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面抗原表達(dá)方面，與未經(jīng)過低溫保存的白血病細(xì)胞來源的LDC比較，差異不明顯。低溫保存復(fù)溫后的白

30、血病細(xì)胞培養(yǎng)生成的DC，還表現(xiàn)有兩方面的作用：一是有明顯的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，說明這種DC有明顯的抗原性；二是與T細(xì)胞作用后，T細(xì)胞表面抗原CD8和CD25的表達(dá)明顯增高，這種T細(xì)胞能殺傷自身白血病細(xì)胞，表現(xiàn)了DC特異的呈遞功能。所有這些均提示了低溫保存對(duì)白血病源性DC的誘導(dǎo)無明顯影響，同時(shí)也進(jìn)一步證實(shí)了LDC所具有的生物學(xué)特性和功能。    Steinman和Cohn在1973年首次發(fā)現(xiàn)抗原呈遞細(xì)胞DC以來，相繼有人認(rèn)為，慢性髓系白血病細(xì)胞和急性白血病細(xì)胞在細(xì)胞因子的作用下亦能向DC分化，這樣的DC具有很強(qiáng)呈遞白血病相關(guān)抗原的能力，可誘導(dǎo)抗白血病免疫反應(yīng)5，6。多能造血干細(xì)胞與白血病克隆共存于骨髓，成功的抗白血病治療后，雖然骨髓正常造血干細(xì)胞的造血功能得以恢復(fù)，但大多數(shù)病例仍存在少量白血病克隆，這些白血病克隆是復(fù)發(fā)的根源。因此，化療后白血病緩解可能是暫時(shí)的，白血病治療的挑戰(zhàn)就在于防止復(fù)發(fā)，人們?cè)噲D在體外誘導(dǎo)AML細(xì)胞分化成DC，將LDC用作體內(nèi)抗白血病疫苗或先在體外生成抗白血病T細(xì)胞（CTL）再用于病人，