RPHPLC法測定熟地黃中5

1、RPHPLC法測定熟地黃中5(1)作者： 秦向陽，周軍，李曉曄，孫曉莉【關(guān)鍵詞】 熟地黃RPHPLC determination of 5hydroxymethylfurfural in prepared rehmannia root【Abstract】 AIM: To develop a HPLC method for the determination of 5hydroxymethylfurfural (5HMF) in prepared rehmannia root. METHODS: The RPHPLC method was used. The analytical column

2、was a ZODBAXC18（4.6 mm150 mm, 5 m） and the mobile phase consisted of methanol 0.01 mol/L phosphoric acid aqueous solution (7030). The wavelength was set at 284 nm with the Detector and the flowrate 0.8 mL/min, the column temperature 25 and the injection volume 20 L. RESULTS: Over the range of 0.44-2

3、.18 g, a good linear relation existed between 5HMF and the peak area (r=0.999 9, n=5). The average recovery of the added sample was 99.0% and RSD 0.8% (n=6). CONCLUSION: The proposed method can be used for quantitatively analyzing 5HMF in a convenient and economic way, with high accuracy and good re

4、producibility. This method for the determination of 5HMF in prepared rehmannia root can be popularized.【Keywords】 radix rehmanniae praeparata; reversed phase highperformance liquid chromatography; 5hydroxymethylfurfural【摘要】 目的：建立測定熟地黃中5羥甲基糠醛(5HMF)含量的方法. 方法：采用反相高效液相色譜法，以ZODBAXC18(4.6 mm150 mm，5 m)為色譜

5、柱，流動相為甲醇與0.01 mol/L磷酸溶液(7030)，檢測波長為284 nm，流速0.8 mL/min，柱溫：25，進(jìn)樣量：20 L . 結(jié)果：5HMF在0.442.18 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.9999，5HMF平均加樣回收率為99.0%，RSD為0.8%（n6）. 結(jié)論：采用反相高效液相色譜法簡便、快捷、可靠性高，準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好，確定是一種值得推廣應(yīng)用的檢測熟地黃中5HMF的含量方法.【關(guān)鍵詞】 熟地黃；反相高效液相色譜法；5羥甲基糠醛0引言熟地黃首載于本草圖經(jīng)，為玄參科多年生草本植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch的根，經(jīng)加工炮制而成. 熟

6、地黃在臨床上應(yīng)用較為廣泛1. 熟地黃含有梓醇、糖類、甙類、5羥甲基糠醛(5HMF)等化學(xué)成分，其中5HMF是熟地黃質(zhì)量控制的量化指標(biāo)之一2. 文獻(xiàn)報道生地黃炮制成熟地黃后5HMF的含量增加20倍左右3. 而5HMF對人體橫紋肌及內(nèi)臟有損害4；具有神經(jīng)毒性，能與人體蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生積蓄中毒5. 熟地黃中5HMF含量測定報道較少，如薄層掃描法（TLCS）3，6. 但TLCS法操作復(fù)雜、受試條件重復(fù)性差. 我們采用RPHPLC法測定了3種不同產(chǎn)地的生地黃經(jīng)相同方法加工炮制而成的熟地黃中5HMF的含量，建立了測定熟地黃中5HMF含量的方法.1材料和方法DIONEX Summit 680高效液相色譜儀(美

7、國)：P680 HPLC PUMP，Thermostatted Column Compartmemt TCC100, PDA100 Photodiode Array Detector，Chromenleon Chromatography Management System；SK250LH型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）. 5HMF對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111626-200301）；熟地黃（西安市藥材公司提供，經(jīng)第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所王四旺主任藥師鑒定為玄參科多年生草本植物地黃的根炮制而成）；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑為分析純.1.2.1色譜條件色譜柱：ZODB

8、AXC18分析柱（4.6 mm150 mm,5 m）；流動相：甲醇-0.01 mol/L磷酸溶液(7030)；流速：0.8 mL/min；柱溫：25；檢測波長：284 nm；進(jìn)樣量：20 L.1.2.2供試品溶液與對照品溶液的制備取本品細(xì)粉2.0 g，精密稱定，置于25 mL量瓶中,加甲醇20 mL，密塞，超聲提取1 h，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，過濾提取液，精密吸取2.5 mL置于25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液. 另精密稱取5HMF對照品10.9 mg，加甲醇溶解并定容至25 mL量瓶中，制成0.436 g/L的對照品溶液.1

9、.2.3線性關(guān)系精密吸取0.5，1，1.5，2，2.5 mL對照品溶液，分別置10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 m微孔濾膜濾過，分別精密吸取20 L進(jìn)樣，測定峰面積.1.2.4精密度試驗(yàn)在室溫條件下，取質(zhì)量濃度為0.0654 g/L的5HMF對照品溶液連續(xù)6次進(jìn)樣，每次20 L.1.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述制備的供試品溶液，室溫放置，在0，1，2，4，6，8 h分別進(jìn)樣20 L.1.2.6重現(xiàn)性試驗(yàn)取熟地藥材細(xì)粉6份，每份2.0 g，分別置于25 mL量瓶中，加入甲醇20 mL，依2.2項下方法制備供試品溶液并測定.1.2.7加樣回收試驗(yàn)精密稱定6份已知含量的熟地黃細(xì)粉120

10、 mg置于10 mL量瓶中，分別精密加0.436 mg/L的5HMF對照品溶液1 mL，然后加入甲醇7 mL，搖勻，按上述方法制備供試品溶液并測定.1.2.8樣品測定精密稱取3種不同產(chǎn)地的生地黃經(jīng)相同方法加工炮制而成熟地黃各2.0 g，分別置于25 mL量瓶中, 加入甲醇20 mL，按2.2項下方法制備供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測定5HMF峰面積.2結(jié)果以5HMF對照品進(jìn)樣量（g）為橫坐標(biāo)（X），以測定的5HMF峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得回歸方程為：Y=58.48 8012.12X，r=0.9999 (n=5，P0.05). 結(jié)果表明5HMF在0.4362.18 g

11、范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系. 6次重復(fù)進(jìn)樣測得5HMF峰面積RSD為0.7%，表明儀器精密度良好. 穩(wěn)定性試驗(yàn)測得8 h內(nèi)5HMF峰面積的RSD為1.3%，結(jié)果表明，5HMF在甲醇溶液中8 h內(nèi)穩(wěn)定. 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)中測定的6份熟地藥材細(xì)粉中，5HMF的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.81 mg/g，RSD=1.0%. 加樣回收試驗(yàn)測定5HMF的平均回收率為99.0%，RSD=0.8%. 樣品測定，根據(jù)測定的5HMF峰面積計算樣品中5HMF的含量（表1, 圖1）.表1熟地黃中5HMF的含量測定（略）3討論在本實(shí)驗(yàn)給定的條件下，基線平穩(wěn)，出峰時間短，峰型好. 張清波等6曾報道HPLC測定熟地黃中5HMF的含量，

12、但我們在其給定的流動相和檢測波長下，以ZODBAXC18分析柱為色譜柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)5HMF的色譜峰出現(xiàn)拖尾和分叉現(xiàn)象，且流動相極性太低，出峰時間較長. 因此，我們對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行改進(jìn). 本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請不要用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請聯(lián)系我們。在提取熟地黃中5HMF的過程中，我們曾用氯仿、甲醇、乙醇、水四種溶劑及甲醇、乙醇的水溶液，由于在加熱的過程中熟地中的糖類物質(zhì)會轉(zhuǎn)變?yōu)?HMF3，因此我們選用超聲方法進(jìn)行處理. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)用不同溶劑按相同的方法進(jìn)行提取，5HMF的含量和色譜圖的差異較明顯，其中，甲醇的提取物基本上出現(xiàn)單峰. 本文測定的熟地黃中5HMF的含量高于文獻(xiàn)報道值3， 是炮制方法的不同還是測定方法精密度和準(zhǔn)確度的提高造成熟地黃中5HMF含量差異，有待進(jìn)一步研究.【參考文獻(xiàn)】1 黃霞. 熟地黃現(xiàn)代研究進(jìn)展J. 內(nèi)蒙古中醫(yī)藥, 2004,23(5):25-26.2 馮建明，趙仁. 三種地黃炮制品現(xiàn)代研究進(jìn)展J云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2000,23(12):40-423 劉美麗,白玫,白榮枝,等. 地黃的炮制研究I：熟地黃中5羥甲糖醛的提取分離