他克莫司與環(huán)孢菌素A對(duì)肝移植受者CD4CD8 T淋巴細(xì)胞亞群及共刺激分子的調(diào)節(jié)作用

1、他克莫司與環(huán)孢菌素A對(duì)肝移植受者CD4/CD8 T淋巴細(xì)胞亞群及共刺激分子的調(diào)節(jié)作用 11-01-30 11:42:00 編輯：studa20 作者：白楊娟, 王蘭蘭, 蔡 蓓, 鄒遠(yuǎn)高, 馮偉華, 嚴(yán)律南【摘要】 目的: 探討他克莫司（Tacrolimus, FK506）與環(huán)孢菌素A（CsA）對(duì)肝移植受者T淋巴細(xì)胞亞群共刺激分子的調(diào)節(jié)作用。方法: 采用熒光標(biāo)記單克隆抗體(mAb)結(jié)合流式細(xì)胞技術(shù), 測(cè)定移植術(shù)后使用FK506或CsA治療2月末的肝移植受者外周血T細(xì)胞亞群及其表面共刺激分子CD28、 CD152 和ICOS的表達(dá)情況。以健康志愿者（健康對(duì)照組）和患終末期肝臟疾病擬進(jìn)行肝移植者（

2、疾病對(duì)照組）為對(duì)照。結(jié)果: 疾病對(duì)照組T細(xì)胞亞群平衡紊亂、 共刺激分子表達(dá)異常（P0.05）。治療組肝移植受者T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)恢復(fù)至健康對(duì)照水平, T細(xì)胞表面CD28和ICOS分子表達(dá)顯著降低（P0.05）而CD152分子表達(dá)明顯升高（P0.05）。比較不同藥物治療組: CsA治療組CD4+T細(xì)胞表達(dá)和CD8+T細(xì)胞表面CD28、 CD152分子表達(dá)均明顯高于FK506治療組（P0.05）。結(jié)論: 在常規(guī)血藥濃度條件下FK506和CsA的對(duì)CD4/CD8T細(xì)胞亞群及共刺激分子的免疫調(diào)節(jié)作用存在差異。FK506對(duì)T細(xì)胞亞群的調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于CsA。FK506可同時(shí)抑制正性共刺激分子CD28和ICO

3、S表達(dá)并促進(jìn)負(fù)性共刺激分子CD152表達(dá), 而CsA對(duì)T細(xì)胞免疫抑制作用主要是通過(guò)促進(jìn)CD152分子的高表達(dá)介導(dǎo)。 【關(guān)鍵詞】 他克莫司; 環(huán)孢菌素A; CD28; CD152; ICOS; 肝移植 他克莫司（Tacrolimus, FK506）與環(huán)孢菌素A（Cyclosporine A, CsA）是目前國(guó)內(nèi)外器官移植術(shù)后臨床應(yīng)用最為普遍的免疫抑制劑。它們同屬鈣調(diào)磷酸酶抑制劑（Calcineurine inhibitor, CNI）類藥物, 主要通過(guò)抑制T細(xì)胞活化相關(guān)細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄激活及相應(yīng)細(xì)胞因子的表達(dá)發(fā)揮免疫抑制作用。T細(xì)胞活化相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)作為免疫細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的末期事件必然受到上

4、游信號(hào)的影響, 而共刺激信號(hào)分子在T細(xì)胞活化和功能效應(yīng)調(diào)節(jié)中扮演了重要角色, T細(xì)胞發(fā)生免疫活化或免疫耐受直接受這些信號(hào)分子的調(diào)控。盡管FK506與CsA同屬鈣調(diào)磷酸酶抑制劑類藥物, 但他們?cè)诿庖哒{(diào)節(jié)效應(yīng)、 用藥劑量和毒性作用等方面卻具有各自的特點(diǎn)。因此, 我們擬通過(guò)分析FK506和CsA對(duì)肝移植術(shù)后患者外周血T細(xì)胞亞群及其各亞群細(xì)胞表面共刺激分子CD28、 CD152（CTLA4）和ICOS的調(diào)節(jié)作用, 探討FK506與CsA對(duì)CD4/CD8T淋巴細(xì)胞亞群共刺激分子表達(dá)的影響。 1 對(duì)象和方法 1.1 研究對(duì)象 (1)接受CNI治療的肝移植受者（肝移植受者組）, 為2004-07/2004-

5、12在四川大學(xué)華西醫(yī)院肝移植中心接受同種異體肝移植的受者, 30例, 男性, 2862歲, 其中20例接受FK506抗排斥方案治療（FK506+激素+硫唑嘌啉或驍悉）, 10例接受CsA抗排斥方案治療（CsA+激素+硫唑嘌啉或驍悉）。根據(jù)使用的CNI不同, 進(jìn)一步分為FK506治療組和CsA治療組。于肝移植術(shù)后接受免疫抑制治療2月末采集外周血標(biāo)本進(jìn)行各指標(biāo)測(cè)定。(2)終末期肝臟疾病患者（疾病對(duì)照組）, 為擬接受肝移植的終末期肝臟疾病患者, 20例, 男性, 年齡2960歲, 其中肝癌13例, 肝硬化4例, 重癥肝炎3例。所有患者均未使用FK506、 CsA或其他相關(guān)免疫調(diào)節(jié)藥物。(3)健康對(duì)照

6、: 均為健康志愿者, 20例, 男性, 2050歲, 無(wú)相關(guān)疾病史, 均未使用過(guò)FK506、 CsA或其他相關(guān)免疫調(diào)節(jié)藥物。 1.2 方法 1.2.1 標(biāo)本采集和處理 采集EDTA抗凝外周全血標(biāo)本。留取部分全血用于FK506和CsA血藥濃度檢測(cè)后, 剩余標(biāo)本于采集后2 h內(nèi)以Ficoll淋巴細(xì)胞分離液制備單個(gè)核細(xì)胞后標(biāo)記檢測(cè)。 1.2.2 FK506血藥谷濃度測(cè)定 在ABBOTT IMX（ABBOTT公司, 美國(guó)）分析儀上使用Tacrolimus試劑盒（ABBOTT公司, 美國(guó)）以熒光偏振免疫原理測(cè)定FK506血藥谷濃度。 1.2.3 CsA血藥谷濃度測(cè)定 應(yīng)用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定C

7、sA血藥谷濃度。 1.2.4 T細(xì)胞亞群和共刺激分子表達(dá)測(cè)定 相應(yīng)熒光標(biāo)記單克隆抗體(mAb)20 L與單個(gè)核細(xì)胞懸液或全血100 L進(jìn)行30 min避光標(biāo)記反應(yīng), 溶血后使用EPICSXL型流式細(xì)胞儀（BECKMAN COULTER公司, 美國(guó)）測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。所用的熒光標(biāo)記mAb為: CD4FITC/CD8PE/CD3PECY5、 CD4PE、 CD8PE、 CD28FITC、 CD154FITC、 CD4FITC、 CD8FITC、 ICOSPE鼠抗人mAb（Immunotech公司, 法國(guó)）; IgG1FITC、 IgG1PE、 IgG2PE鼠抗人的同型對(duì)照mAb（Immunotech公

8、司, 法國(guó)）。分別測(cè)定T淋巴細(xì)胞表達(dá)率（CD3+ %）、 CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率（CD3+CD4+%）、 CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率（CD3+CD8+%）、 CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞的比值 (CD4/CD8)、 CD4+CD28+細(xì)胞表達(dá)率（CD4+CD28+%）、 CD8+CD28+細(xì)胞表達(dá)率（CD8+CD28+%）、 CD4+CD152+細(xì)胞表達(dá)率（CD4+CD152+%）、 CD8+CD152+細(xì)胞表達(dá)率（CD8+CD152+%）、 CD4+ICOS+細(xì)胞表達(dá)率（CD4+ICOS+%）和CD8+ICOS+細(xì)胞表達(dá)率（CD8+ICOS+%）。 1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS12

9、.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述和統(tǒng)計(jì)分析, T細(xì)胞亞群結(jié)果以xs表示, 組間比較采用t檢驗(yàn), 多組間比較采用方差分析; 共刺激分子的表達(dá)以中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示, 樣本間比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。 2 結(jié)果 2.1 肝移植受者FK506和CsA血藥谷濃度 FK506治療組受者FK506平均血藥谷濃度（c0）為9.04.4 g/L。CsA治療組受者CsA平均血藥谷濃度（c0）為18555 g/L。 2.2 肝移植受者組受者外周血T細(xì)胞亞群 疾病對(duì)照組患者外周血CD3+百分率接近健康對(duì)照水平（P0.05）, 但其CD4+CD3+百分率明顯高于健康對(duì)照組（P0.05）而CD8+CD3+百分率明顯低于健康

10、對(duì)照組（P0.05）, CD4/CD8比值明顯高于健康對(duì)照組（P0.05）。肝移植受者組外周血CD3+、 CD4+CD3+和CD8+CD3+百分率均恢復(fù)至健康對(duì)照水平。與疾病對(duì)照組比較, 肝移植受者組受者外周血CD3+百分率稍有回升, 其CD4+CD3+百分率明顯降低而CD8+CD3+百分率明顯回升（P0.05）, CD4/CD8比值明顯降低（P0.05）。進(jìn)一步分析不同藥物治療組T細(xì)胞亞群表達(dá)情況。FK506治療組受者外周血T細(xì)胞亞群表達(dá)與健康對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 與疾病對(duì)照組比較, CD3+百分率水平接近、 CD4+CD3+百分率明顯降低、 CD8+CD3+百分率明顯升高、 CD4/CD8比值明顯下降（P0.05）、 C