中藥抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的概況

1、中藥抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的概況         【關(guān)鍵詞】  C6膠質(zhì)瘤 細(xì)胞凋亡 中藥腦膠質(zhì)瘤目前尚缺乏有效化療藥物，患者預(yù)后較差，術(shù)后平均生存時(shí)間2年。因此，除了研究新的靶向分子療法外，尚需開發(fā)更加安全有效的藥物或開展中西醫(yī)結(jié)合綜合治療，對(duì)于延長(zhǎng)膠質(zhì)瘤患者生存期很有意義。本文就近年中藥抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的研究進(jìn)展綜述如下。   1  誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡    近年來，中藥干預(yù)腫瘤細(xì)胞凋亡的研究日益增多，熱點(diǎn)多集中

2、于Fas系統(tǒng)、TNFd系統(tǒng)、Bcl2家族、線粒體膜電位、脂質(zhì)過氧化等方面。   Bcl2高表達(dá)能抑制多種因素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，提示Bcl2可能參與凋亡的信號(hào)途徑的最后步驟的調(diào)節(jié)。周立祥1等研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素（quercetin，QUE）通過抑制Bcl2蛋白產(chǎn)物的表達(dá)來誘導(dǎo)C6細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)隨著Bcl2的被抑制，p53表現(xiàn)出被激活趨勢(shì)。腫瘤抑制基因p53作為一種轉(zhuǎn)錄因子可結(jié)合于許多重要的細(xì)胞蛋白，參與基因的表達(dá)調(diào)控，在存活中起重要作用。槲皮素誘導(dǎo)DNA損傷后，細(xì)胞有時(shí)間進(jìn)行DNA 損傷修復(fù)，如果不能修復(fù)，則p53誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)p53(野生型wt

3、p53)的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)處理組p53蛋白表達(dá)水平增強(qiáng)，說明槲皮素激活了p53的表達(dá)，并最終啟動(dòng)細(xì)胞凋亡。徐英輝等觀察到，莪術(shù)提取物欖香烯能有效抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性增殖，對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖抑制作用呈劑量依賴性，隨著藥物濃度的增加，欖香烯的抑制作用增強(qiáng)。在同一作用濃度下具有時(shí)間依從性關(guān)系，隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制作用增強(qiáng)。認(rèn)為下調(diào)Bcl2Bclx1基因及蛋白質(zhì)表達(dá)可能是欖香烯誘導(dǎo)凋亡、抑制C6細(xì)胞增殖的主要機(jī)制。   Bax基因是 Bcl2同源基因，其過表達(dá)可拮抗 Bcl2的保護(hù)效應(yīng)而使細(xì)胞走向凋亡。Bcl2 蛋白與Bax蛋白的比值影響著細(xì)胞受到刺激后發(fā)生凋亡的比率。宋萍等

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Bax基因蛋白的高表達(dá)可能是鮮壁虎誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤凋亡的重要分子機(jī)制。研究認(rèn)為，蛤蚧可誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡，使Bax基因表達(dá)增高，并認(rèn)為C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡機(jī)制可能與Bax基因上調(diào)有關(guān)。周幽心等研究表明，雷公藤甲素與雷公藤紅素在一定濃度提高促凋亡基因Bax的表達(dá)而降低抑凋亡基因Bcl2的表達(dá)，導(dǎo)致決定細(xì)胞凋亡發(fā)生與發(fā)展的BaxBcl2比值顯著提高。   編碼蛋白Cmyc是真核細(xì)胞內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子，可誘導(dǎo)下游報(bào)道基因mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，參與細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控。其表達(dá)異常增加可干擾細(xì)胞增殖和凋亡的動(dòng)態(tài)平衡，誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成。鄧惠研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿抑制了C6

5、細(xì)胞的惡性增殖和Cmyc基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，轉(zhuǎn)錄過程被抑制，使腫瘤細(xì)胞中RNA的合成減少，原癌基因Cmyc蛋白表達(dá)受抑制，降低了C6細(xì)胞惡性度。這可能是苦參堿抑制大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6增殖作用的機(jī)制之一。Kim證實(shí)，人參皂苷GRh2可以通過ROS及Caspase激活通路誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。   2  影響C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)    細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是指細(xì)胞接受胞外信號(hào)刺激，引起多種信號(hào)分子的轉(zhuǎn)換，而產(chǎn)生生物學(xué)功能。各種細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)分子通過細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，調(diào)節(jié)代謝酶、離子通道、轉(zhuǎn)錄因子等的活性，從而產(chǎn)生多種生物效應(yīng)。研究表明，如果

6、控制細(xì)胞增殖、分化的信息傳遞通路中某一環(huán)節(jié)的異常，可引起細(xì)胞生長(zhǎng)失控，導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)。研究發(fā)現(xiàn)，抗腫瘤中草藥可從多條途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，而發(fā)揮抗腫瘤作用。   2.1  對(duì)Ca2+依賴性蛋白激酶途徑的影響  Ca2+信使分子參與許多重要的生命活動(dòng)，如調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、環(huán)核苷酸的代謝、磷酯酰肌醇循環(huán)和DNA 的合成等。許多學(xué)者認(rèn)為，它處于多種細(xì)胞信號(hào)傳遞途徑的中心地位。細(xì)胞內(nèi)鈣離子主要源于細(xì)胞外的鈣離子通過分布于細(xì)胞膜上的離子通道內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)鈣貯庫(kù)的鈣釋放。呂曉川等研究顯示，柴胡皂苷元D(Saikogenin D，SGD)能劑量依賴性地引起

7、神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞Ca2+升高，且在細(xì)胞外液無鈣下此現(xiàn)象仍維持，表明Ca2+升高是細(xì)胞內(nèi)鈣貯庫(kù)的鈣釋放引起的。SGD升高Ca2+，從而抑制C6細(xì)胞。   2.2  影響NFB途徑  核轉(zhuǎn)錄因子B(nuclear factorkappa B，NFB)通過調(diào)控多種基因的表達(dá)，參與機(jī)體防御反應(yīng)、組織損傷和應(yīng)激、細(xì)胞分化和凋亡以及腫瘤生長(zhǎng)抑制過程的信息傳遞。NFB的異?；罨湍[瘤有密切的關(guān)系，持續(xù)活化可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增生，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)血管新生，提高腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。楊正欽實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，姜黃素（Curcumin）能夠抑制C6細(xì)胞增殖，使細(xì)胞阻滯在 G1S

8、期，并誘導(dǎo)C6細(xì)胞凋亡；其作用機(jī)制可能與其上調(diào) PTEN基因、增加 iROS的產(chǎn)生，進(jìn)一步影響核轉(zhuǎn)錄因子 NFB和AP1的活性，從而調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。   2.3  影響蛋白激酶途徑   蛋白激酶C(PKC)系統(tǒng)是神經(jīng)膠質(zhì)瘤信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一，惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤對(duì)PKC調(diào)節(jié)十分敏感。PKC活性與這些腫瘤細(xì)胞的增殖有密切關(guān)系。PKC活性的提高是膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性程度的標(biāo)志。Baltuch等研究發(fā)現(xiàn)貫葉連翹提取物金絲桃素可能是PKC的抑制劑，它可對(duì)多種腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。   2.4  影響MAPK通路 

9、 MAPK信號(hào)通路在膠質(zhì)瘤的發(fā)生中起著重要作用，與細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。其中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)通路可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，對(duì)抗細(xì)胞死亡信號(hào)。Akt作為細(xì)胞生存通路磷脂酰肌醇3激酶Akt(PI3KAkt)的關(guān)鍵分子，在介導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖 、運(yùn)動(dòng)和侵襲方面有著重要作用。Akt的活化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在多種惡性腫瘤中都有 Akt的過度表達(dá)。姚軼群10等通過Western印跡法檢測(cè)從中藥莪術(shù)中提取的非細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物欖香烯(elemene)處理后的鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞中ERK和Akt蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)欖香烯可以下調(diào)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞中磷酸化ERK的蛋白表達(dá)，對(duì)磷酸化Akt的蛋白表達(dá)沒有明顯影響

10、，欖香烯對(duì)磷酸化ERK的下調(diào)作用同樣呈劑量、時(shí)間依賴性。由此，推斷欖香烯下調(diào)磷酸化ERK的蛋白表達(dá)與其抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖相關(guān)。   3  影響C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期   腫瘤治療的中心環(huán)節(jié)是干擾腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期，從而使腫瘤細(xì)胞增殖速率減慢或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。某些中藥用藥后腫瘤細(xì)胞都會(huì)發(fā)生增殖抑制(包括G1期停滯、S期蓄積和G2M期阻滯)。王殿洪11等實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，黃芩苷能阻滯 G1期C6細(xì)胞向S期移行，從而使進(jìn)入S期的細(xì)胞數(shù)量減少。S期是細(xì)胞DNA合成期。黃芩苷使腫瘤細(xì)胞DNA合成障礙，從而抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)代謝增殖等過程，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

11、。李殿友12等證實(shí)，人參皂苷Rh2使C6細(xì)胞在S期發(fā)生阻滯，在S期啟動(dòng)并誘導(dǎo)C6細(xì)胞凋亡，從而抑制C6細(xì)胞增殖。李振飛13等使用中藥平瘤康方劑（由蛇六谷、夏枯草、昆布、冰球子、莪術(shù)、白芷和全蝎等藥物組成）含藥血清能使DNA合成期(S期)細(xì)胞減少，合成前期(G1期)細(xì)胞增加，阻滯C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞G1期向S期的進(jìn)程，干擾DNA的合成和分裂。            肖玉強(qiáng)14等研究發(fā)現(xiàn)，C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡隨三氧化二砷作用的時(shí)間和劑量的增加而增加，但三氧化二砷對(duì)正常神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用較弱，提示三氧化二

12、砷抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的作用具有一定的選擇性。王殿洪15等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，脫脂水提醇沉法提取的白花蛇舌草提取液對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的有效作用時(shí)間為12小時(shí)。在光動(dòng)力學(xué)療法與不同濃度白花蛇草提取液聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，抑制率均較單獨(dú)應(yīng)用光動(dòng)力學(xué)療法或白花蛇舌草時(shí)提高，表明二者在抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖時(shí)有協(xié)同作用，這種作用在白花蛇舌草濃度為5.0gml作用12小時(shí)時(shí)最明顯。   4  展  望    綜上所述，中藥主要通過誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡、影響C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、影響C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期等途徑作用于C6細(xì)胞，使C6細(xì)胞凋亡或是細(xì)胞分裂停滯，從而達(dá)到

13、抗腫瘤的效果。目前，雖然對(duì)中藥抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡機(jī)制的研究有一定的進(jìn)展，但確切的機(jī)制尚未闡明。而且部分中藥僅說明體外有效，體內(nèi)的作用機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】  1 周立祥，羅毅男，付雙林，等.槲皮素對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖調(diào)控的作用吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2006，32（2）：2512532 徐英輝，董 斌，羅其中，等.欖香烯對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞Bcl2家族基因及蛋白表達(dá)的影響中華醫(yī)學(xué)雜志，2005,85(24):170017033 宋 萍，王學(xué)美，謝 爽，等.鮮壁虎凍干粉誘導(dǎo) C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的血清藥理學(xué)研究.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004，24（

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