椒目油對(duì)哮喘豚鼠白細(xì)胞介素4,5及氣道反應(yīng)性的影響(一)

1、椒目油對(duì)哮喘豚鼠白細(xì)胞介素4,5及氣道反應(yīng)性的影響(一)    作者： 趙睿，戚好文，謝柏梅，李志超 【關(guān)鍵詞】 椒目油；哮喘；白細(xì)胞介素±±±±±±±±±±±±0.154) g/L both decreased significantly (P0.01), but they didnt have any statistical significance from that of normal control group (P>0

2、.05). The airway responsiveness of Jiaomu Oil group didnt have any statistical significance from that of dexamethasone group (P>0.05). CONCLUSION: Jiaomu Oil could efficiently decrease the AHR of asthmatic guinea pig. The mechanism may be that Jiaomu Oil could prevent the production of IL4,5 in a

3、sthmatic guinea pig.【Keywords】 Jiaomu Oil; asthma; interleukin4; interleukin5; airway hyperreactivity±±±±±±±±±±±±0.154) g/L與哮喘模型組比較均顯著降低(P0.01)，與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；椒目油組氣道反應(yīng)性與地塞米松組相比無顯著性差異(P>0.05). 結(jié)論： 椒目油能有效降低哮喘豚鼠AHR，其機(jī)制可能是抑制哮喘豚鼠體內(nèi)

4、IL4,5的生成. 【關(guān)鍵詞】 椒目油；哮喘；白細(xì)胞介素4；白細(xì)胞介素5；氣道高反應(yīng)性支氣管哮喘是一種變態(tài)反應(yīng)性疾病，IL4,5在其發(fā)病機(jī)制中占重要地位1. 目前臨床上治療哮喘多以對(duì)癥為主. 中藥椒目治療哮喘歷史悠久，療效顯著，但對(duì)其止哮平喘的作用機(jī)制還不清楚. 我們旨在通過探究椒目油對(duì)哮喘豚鼠血清IL4,5含量及氣道高反應(yīng)性(Hyperresponsiveness, AHR)的影響，揭示椒目治療哮喘的作用機(jī)制，為椒目油運(yùn)用于臨床提供理論依據(jù).1材料和方法1.1材料健康雄性豚鼠40只，體質(zhì)量(250±50) g（第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）；椒目油(第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科，批號(hào)：

5、20050221)；卵白蛋白(OVA, Sigma公司)；磷酸組胺(上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司)；戊巴比妥鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)： F20041117)；豚鼠IL4,5 ELISA試劑盒美國(guó)Repidbio(RB)公司；401AI超聲霧化器(上海魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司)；動(dòng)物呼吸機(jī)DH140B(浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠)；PTM9醫(yī)用微機(jī)實(shí)控儀(二道生理儀)，RM6280多道智能生理信號(hào)記錄系統(tǒng)(第四軍醫(yī)大學(xué)病理生理學(xué)教研室).1.2.1豚鼠支氣管哮喘模型的建立參照文獻(xiàn)1. 每日激發(fā)豚鼠1次，共7 d. 每次激發(fā)直到豚鼠出現(xiàn)咳嗽、呼吸急促、腹肌緊張等哮喘癥狀時(shí)為止.1.2.2實(shí)驗(yàn)

6、分組及處理用隨機(jī)數(shù)字表法將豚鼠分為4組： 正常對(duì)照組、哮喘模型組、地塞米松治療組和椒目油治療組，每組各10只. 正常對(duì)照組用等量生理鹽水致敏和霧化激發(fā). 哮喘模型組用OVA致敏激發(fā). 地塞米松治療組致敏激發(fā)方法同哮喘模型組，但激發(fā)后立即給予5 g/L地塞米松溶液霧化吸入5 min. 椒目油組致敏方法同哮喘模型組，激發(fā)后立即給予椒目油和熟精油的混合物(按11混合)，以3 mL/kg灌胃.1.2.3氣道反應(yīng)性的測(cè)定參照文獻(xiàn)2，以氣道內(nèi)壓力(IP)上升至基線值的20%時(shí)所對(duì)應(yīng)的磷酸組胺濃度(PC20)做為體現(xiàn)氣道反應(yīng)性高低的指標(biāo).1.2.4測(cè)定IL4,5含量氣道反應(yīng)性測(cè)定完畢后，從豚鼠心臟直接抽血5

7、 mL，靜置30 min后以2000 r/min離心. 收集上層血清，運(yùn)用ELISA法測(cè)定血清IL4,5的含量，具體步驟參照試劑盒說明書.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 所有數(shù)據(jù)均以x±s表示. 將原始數(shù)據(jù)輸入SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包，氣道反應(yīng)性的組間比較運(yùn)用KruskalWallis H法和Nemenyi法檢驗(yàn)；IL4,5含量的組間比較運(yùn)用SNKq（StudentNewmanKeulsq）法檢驗(yàn). 顯著性水平均為0.05.2結(jié)果2.1模型動(dòng)物大體表現(xiàn)哮喘組豚鼠在誘喘過程中出現(xiàn)哮喘發(fā)作癥狀，不同程度地表現(xiàn)為咳嗽、呼吸急促、腹肌緊張、四肢癱軟、行動(dòng)遲緩或俯臥不動(dòng). 椒目油組和地塞米松組豚鼠激發(fā)后癥狀

8、的表現(xiàn)程度較同期哮喘組明顯減弱.2.2病理學(xué)表現(xiàn)與正常對(duì)照組相比，哮喘模型組豚鼠肺外觀體積增大，表面略腫脹，有不規(guī)則暗紅色充血區(qū)及多處小米粒大小的紅色出血點(diǎn)，支氣管和肺泡腔內(nèi)黏液分泌明顯增多. 哮喘組肺組織切片(圖1B)與正常對(duì)照組(圖1A)對(duì)比顯示：支氣管壁及支氣管周圍組織有多處紅細(xì)胞聚集區(qū)，且有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，包括淋巴細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞(EOS)、單核細(xì)胞等；氣道黏膜上皮增厚，氣道變窄，嚴(yán)重者可見脫落. 上述病理表現(xiàn)證明哮喘模型建立成功. 椒目油組豚鼠肺大體表現(xiàn)：體積無明顯變化，表面充血區(qū)及出血點(diǎn)有明顯吸收的痕跡，面積明顯小于哮喘組，出血點(diǎn)數(shù)量也明顯減少；切片表現(xiàn)為小氣道及肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，支

9、氣管和肺泡腔內(nèi)分泌物顯著減少，肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，無氣道狹窄及氣道上皮細(xì)胞脫落等現(xiàn)象(圖1C). 地塞米松組病理表現(xiàn)(圖1D)與椒目油組相似，但炎性細(xì)胞的減少較椒目油組弱.2.3各組間豚鼠血清IL4,5含量及AHR水平的比較哮喘組豚鼠IL4,5含量與正常對(duì)照組相比均顯著升高(P0.01，表1)；椒目油和地塞米松組IL4含量較哮喘組均顯著降低(P0.01)，但與正常對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩治療組IL5含量較哮喘組均顯著降低(P0.01)，椒目油組降低更為明顯，已接近正常對(duì)照組，然而地塞米松組的IL5下降幅度較小，其水平雖低于哮喘組，但仍高于正常對(duì)照組(P0.01)

10、；椒目油與地塞米松兩組之間IL4含量比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但兩組IL5含量比表1各組豚鼠IL4,5及AHR水平3討論AHR是哮喘的重要特征，也是臨床診斷哮喘的主要依據(jù). 氣道炎癥、氣道平滑肌細(xì)胞反應(yīng)性及氣道重建是哮喘發(fā)病機(jī)制的三個(gè)主要因素，其中氣道炎癥為首發(fā)因素. 與哮喘關(guān)系密切的IL4,5是多種炎癥細(xì)胞所釋放的細(xì)胞因子，在AHR的發(fā)生和發(fā)展中占有重要地位. 豚鼠肺組織病理切片的結(jié)果表明椒目油能夠減輕哮喘發(fā)展過程中引起的組織充血水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)甚至出血壞死等病理改變. 椒目油的上述作用可能與其減少IL4,5合成及釋放有關(guān).IL4是一種多功能細(xì)胞因子，主要由活化T細(xì)胞和單核細(xì)

11、胞分泌，是Th2細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子. 它可通過對(duì)B細(xì)胞受體的去抑制作用而活化B細(xì)胞，從而介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答反應(yīng)3. IgE是介導(dǎo)I型超敏反應(yīng)的重要介質(zhì)，IL4對(duì)IgG向IgE轉(zhuǎn)型有促進(jìn)作用4；IL4與受體結(jié)合可引發(fā)受體異源二聚化并激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6(STAT6)，誘導(dǎo)MHC類抗原及免疫球蛋白受體基因等表達(dá)5，從而產(chǎn)生更多的IgE. IL4還促進(jìn)EOS浸潤(rùn)和血管細(xì)胞黏附分子1(VCAM1)、 P選擇素等多種黏附分子的表達(dá)6. 因此IL4在哮喘的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用. IL5是一種作用于EOS的血源性生長(zhǎng)因子，主要由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，哮喘時(shí)IL5mRNA可增加300倍. IL5可活化

12、EOS，同時(shí)也是EOS的趨化劑，上調(diào)其黏附分子(如CD11b)的表達(dá)，促進(jìn)EOS同內(nèi)皮細(xì)胞黏附，此作用可能與慢性變態(tài)反應(yīng)性疾病中組織損傷有關(guān)7.我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：椒目油能顯著降低哮喘豚鼠血清中IL4,5的含量，其降低IL4含量的效果與地塞米松相仿，但降低IL5含量的效果強(qiáng)于地塞米松；同時(shí)椒目油能夠顯著降低哮喘豚鼠AHR，其藥效與地塞米松降低豚鼠AHR的效果相仿. 而在我們另外的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)椒目油還有抑制單核細(xì)胞及EOS的作用(資料本文未顯示)，說明椒目油具有抑制炎癥細(xì)胞和前炎性細(xì)胞因子釋放的抗炎作用，進(jìn)而降低AHR，達(dá)到治療哮喘的目的.中國(guó)特有的中西醫(yī)結(jié)合療法針對(duì)哮喘“急則治標(biāo)(西醫(yī)解痙，中醫(yī)降氣)，緩則治本(補(bǔ)腎固本)”的方法，使哮喘患者獲得較長(zhǎng)時(shí)間的緩解期8. 中藥椒目為蕓香科植物花椒干燥成熟的種子，該藥味苦、辛、性寒，具有行水消腫之功效. 有許多關(guān)于椒目治療哮喘的報(bào)道9-10，但大多數(shù)是從臨床效果來說明，而缺乏藥理學(xué)基礎(chǔ). 我們從抑制炎性因子和降低AHR出發(fā)研究椒目油治療哮喘的機(jī)制，從而為椒目治療哮喘提供藥理學(xué)基礎(chǔ). 另外椒