黃精煎劑中5羥甲基糠醛的含量測定

1、黃精煎劑中5羥甲基糠醛的含量測定    【摘要】  【目的】通過對(duì)11批黃精煎劑中5羥甲基糠醛含量的考察,為黃精的物質(zhì)基礎(chǔ)與質(zhì)量控制研究奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā坎捎眉逯蠓ǐ@得供試品溶液,高效液相色譜(HPLC)法測定其含量。色譜條件：Hypersil ODS2色譜柱(250 mm×46 mm,5 m)，甲醇體積分?jǐn)?shù)005%磷酸溶液(體積比為1090)為流動(dòng)相，流速為10 mL/min，檢測波長為280 nm?！窘Y(jié)果】11批黃精煎劑中5羥甲基糠醛含量的差別達(dá)30倍,在0020 02000 0 g(r=0999 7)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收

2、率為1003%(sR=19%,N=6)?！窘Y(jié)論】該方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確,為黃精物質(zhì)基礎(chǔ)研究與質(zhì)量控制提供了一定參考。 【關(guān)鍵詞】  黃精/化學(xué);5羥甲基糠醛/分析;色譜法，高壓液相黃精(Polygonatum sibiricum Red.)或多花黃精(Polygonatum cyrtonema Hua)的干燥根莖具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎功能,用于治療脾胃虛弱,體倦乏力,口干食少,肺虛燥咳,精血不足,內(nèi)熱消渴等癥。黃精含有較多的糖類成分,在加工和貯存過程中會(huì)發(fā)生糖的熱降解反應(yīng),產(chǎn)生5羥甲基糠醛。傳統(tǒng)認(rèn)為5羥甲基糠醛對(duì)機(jī)體有毒害作用,是藥物的有毒成分,對(duì)眼、黏膜、皮膚有刺激性,過量食

3、用會(huì)引起中毒,造成人體橫紋肌麻痹和內(nèi)臟損害。但近年來對(duì)其生物活性提出新的看法,有研究表明5羥甲基糠醛具有明顯的抗氧化和改善心血管系統(tǒng)的作用,能增強(qiáng)大鼠紅細(xì)胞變形活性及改變血液流變學(xué) 4-5。此外,5羥甲基糠醛對(duì)CC14急性肝損傷組織有保護(hù)作用,它可能通過抗氧化機(jī)制,保護(hù)肝組織,通過保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞,改善血液微循環(huán)實(shí)現(xiàn)補(bǔ)肝益腎的作用6。本研究采用高效液相色譜法測定不同批次黃精煎劑中5羥甲基糠醛含量,現(xiàn)報(bào)道如下。1儀器與試藥11儀器LC20AT高效液相色譜儀(日本島津),DAD檢測器。12試藥5羥甲基糠醛對(duì)照品(批號(hào)：111626200402)購自中國藥品生物制品檢定所;11批黃精飲片分別購于廣州

4、多家藥材公司,經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院黃月純主任中藥師鑒定為百合科黃精(Polygonatum sibiricum Red.)的干燥根莖;甲醇為色譜純,其他試劑為分析純。2方法與結(jié)果21色譜條件色譜柱：大連依利特Hypersil ODS2 (250 mm ×46 mm,5 m);流動(dòng)相為甲醇體積分?jǐn)?shù)005%磷酸溶液(體積比為1090)，柱溫為30，檢測波長為280 nm，流速為10 mL/min，進(jìn)樣量為10 L。在此色譜條件下,5羥甲基糠醛與其他成分得到較好的分離。5羥甲基糠醛、黃精煎劑HPLC圖譜見圖1。22測定波長的選擇將5羥甲基糠醛對(duì)照品溶液在200400 nm波長范圍內(nèi)

5、進(jìn)行光譜掃描,結(jié)果在280 nm左右處有最大吸收,故選擇其為測定波長,5羥甲基糠醛紫外吸收(UV)光譜見圖2。23對(duì)照品溶液的制備精密稱取5羥甲基糠醛對(duì)照品適量,用體積分?jǐn)?shù)80%甲醇配制成02 mg/mL對(duì)照品溶液。24黃精煎劑的制備稱取黃精飲片300 g,加入7倍量水浸泡05 h,煮沸后,文火慢煎1 h,取出,4層紗布濾過;藥渣加入3倍量水,煮沸后,文火慢煎50 min,取出,合并2次濾液,減壓回收,取出,放冷,取上清液置于100 mL容量瓶中,加水定容至刻度,即得黃精煎劑。25供試品溶液的制備精密吸取黃精煎劑10 mL蒸干,殘?jiān)芋w積分?jǐn)?shù)80%甲醇超聲溶解,t/mint/min26線性關(guān)系

6、考察分別精密吸取上述對(duì)照品溶液005、01、05、10、30、50 mL至5 mL容量瓶中,加體積分?jǐn)?shù)80%甲醇稀釋至刻度,得系列濃度的對(duì)照品溶液。各濃度的對(duì)照品溶液分別精密進(jìn)樣10 L,按上述色譜條件測定峰面積,以進(jìn)樣量(g)為橫坐標(biāo),以峰面積(A)為縱坐標(biāo),求得5羥甲基糠醛的回歸方程為Y=9 000 000X-56 213,r=0999 7,線性范圍為0020 02000 0 g。27精密度試驗(yàn)取26項(xiàng)下同一對(duì)照品溶液(含5羥甲基糠醛002 mg/mL),重復(fù)進(jìn)樣分析5次,測定峰面積,結(jié)果5羥甲基糠醛峰面積的sR為004%,提示精密度良好。28穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液,在室溫下放置,分別

7、在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣,按上述色譜條件測定峰面積,結(jié)果5羥甲基糠醛峰面積的sR為14%,提示24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性較好。29重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品5份,分別按25項(xiàng)下方法制備,在上述色譜條件下進(jìn)樣分析,結(jié)果5羥甲基糠醛峰面積的sR為16%,提示重復(fù)性良好。210加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品6份,分別精密加入一定量的5羥甲基糠醛對(duì)照品,按供試品溶液的制備及含量測定方法同法操作,結(jié)果見表1。表1黃精煎劑加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(N=6)211樣品的測定取各批藥材,照23項(xiàng)下的方法操作,在上述色譜條件下進(jìn)樣,測定并計(jì)算樣品中5羥甲基糠醛的含量,結(jié)果見表2。3討論前期實(shí)驗(yàn)過程中曾比較水直

8、接煎煮和乙醇回流的提取效果,結(jié)果以顯示水作溶劑效果較好,且直接煎煮更符合病人臨床實(shí)際。黃精為補(bǔ)益藥,故本實(shí)驗(yàn)采用第1次煎煮1 h,第2次煎煮50 min。表2黃精煎劑中5羥甲基糠醛含量測定結(jié)果5羥甲基糠醛,蒸制30 h內(nèi)含量基本穩(wěn)定,但受熱30 h以后含量急劇上升,繼續(xù)加熱含量下降,其含量在0014 g/kg之間變化。孫秀梅等8對(duì)黃精和酒黃精分別作半仿生提取(SBE)液與水提(WE)液的指標(biāo)成分進(jìn)行了比較,但有關(guān)黃精飲片煎劑中5羥甲基糠醛的含量測定尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)所測11批黃精煎劑中5羥甲基糠醛含量在03079282 g/kg之間,差別達(dá)30倍,可能是由于其炮制時(shí)間長短不一致所引起。目前對(duì)于

9、5羥甲基糠醛的生物活性尚沒有定論,因此測定黃精飲片煎劑中的含量可較好地了解病人臨床服用量,同時(shí)可以為控制產(chǎn)品質(zhì)量,保證用藥安全有效提供依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  中華人民共和國藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(第1部)S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：215. 吳榕,孟瑾,韓奕奕.高效液相色譜法測定牛乳中的5羥甲基糠醛J.食品工業(yè),2006,27 (4) ：49. 朱丹妮,李志明,嚴(yán)永清,等.生脈散復(fù)方化學(xué)動(dòng)態(tài)變化與藥效關(guān)系的研究生脈散復(fù)方化學(xué)的研究() J.中國中藥雜志,1998,5：291. 耿放,王喜軍.5羥甲基2糠醛(5HMF)在中藥復(fù)方中的研究現(xiàn)狀及相關(guān)藥效探討J.世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2005,7(6)：52.5 Vinay K Sharma,Jinsuk Choi,Niti Sharma,et a1.In vitro antityrosinase activity of 5(hydroxymethy1)2fur