冷浸法提取丹參脂溶性部位工藝研究

1、冷浸法提取丹參脂溶性部位工藝研究    【關(guān)鍵詞】   丹參/生產(chǎn)與制備;丹參/化學(xué);丹參酮A/分析;色譜法，高壓液相;正交試驗丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的功效1。 現(xiàn)代 醫(yī)學(xué) 認(rèn)為，丹參具有擴(kuò)張冠狀動脈，增加冠狀動脈血流量，防止心肌缺血和心肌梗死，加快微循環(huán)血流，促進(jìn)毛細(xì)血管網(wǎng)開放，抑制心肌收縮，減少能量消耗，擴(kuò)張血管，降低膽固醇、血脂，抑制凝血，激活纖溶，穩(wěn)定紅細(xì)胞膜，提高缺氧耐受力，增加肝臟血流量，保護(hù)肝損傷細(xì)胞，抗肝纖維化，抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及消炎

2、抗菌等作用2。其脂溶性成分具有抗菌、抗炎、抗氧化等藥理作用3。目前提取丹參脂溶性成分的方法主要有乙醇回流法和超臨界CO2萃取法4。丹參酮A是丹參脂溶性主要成分之一，丹參酮A對熱敏感，在提取制備過程中容易被破壞5，超臨界CO2萃取法成本較高。冷浸提取法工藝簡單，可室溫下操作且成本低。本文對冷浸法提取丹參中的脂溶性部位工藝進(jìn)行系統(tǒng)研究，旨在優(yōu)選最佳提取工藝條件，現(xiàn)報道如下。 1儀器和試藥 LC10AT高效液相色譜儀(日本島津);SPD10A紫外檢測器(日本島津);N2000 工作 站;丹參酮A對照品購自 中國 藥品生物制品檢定所(批號：0766200011);丹參購自山東藥材市場，鑒定人為廣州中醫(yī)

3、藥大學(xué)中藥學(xué)院關(guān)世俠副教授;甲醇為色譜純，購自SIGMA公司;純水以雙蒸法自制。 2方法與結(jié)果 21對照品溶液的制備取丹參酮A對照品約10 mg，精密稱定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;精密量取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。22色譜條件色譜柱：Kromasil C18柱(250 mm×46 mm);流動相：甲醇水(體積比為7525);流速：1 mL/mim;檢測波長：270 nm。在此條件下測定丹參酮A對照品及丹參提取物。23標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取對照溶液25、50、75、100、150、200 L，注入液相色譜儀。以丹參酮A進(jìn)樣量(X)對峰面積(Y

4、)進(jìn)行線性擬合，丹參酮A回歸方程為Y=4×106X，r=0999 4。結(jié)果表明：丹參酮A在0039 20313 6 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。24溶劑乙醇濃度選擇取8份丹參粉末(過3號篩)，每份約03 g，精密稱定后將每2份分成1組，分別精密加入10 mL體積分?jǐn)?shù)為65%、75%、85%、95%的乙醇，冷浸5 h，濾過，收集續(xù)濾液，精密量取1 mL置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取5 L注入液相色譜儀進(jìn)行測定。 計算 藥材提取物中丹參酮A含量：p丹參酮A=m丹參酮A(g)/m藥材(g)×100%。表1結(jié)果顯示，體積分?jǐn)?shù)85%乙醇提取丹參酮A含量比體積分?jǐn)?shù)9

5、5%乙醇提取丹參酮A含量低125%,故本實驗選擇體積分?jǐn)?shù)95%乙醇作為提取溶劑。25粉碎提取試驗取同一批丹參藥材，一份粉碎(過3號篩)，一份切碎，再分別稱取3份，每份50 g，加8倍量體積分?jǐn)?shù)95%乙醇冷浸過夜，濾過，精密吸取1 mL置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取5 L注入液相色譜儀測定。結(jié)果見表2。兩組間比較無顯著性差異(P>005)。所以從節(jié)省能源上考慮，丹參藥材不必粉碎成粉末，只需切碎后進(jìn)行投料。26正交試驗選用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇作溶劑，取丹參50 g，共9份，按正交條件進(jìn)行試驗，結(jié)果見表3、表4表1溶劑乙醇濃度選擇試驗結(jié)果表2粉碎提取試驗結(jié)果表3因素水平

6、表27方差分析將正交試驗結(jié)果進(jìn)行方差分析。表5結(jié)果顯示，A(乙醇用量)、B(冷浸次數(shù))、C(冷浸時間)影響冷浸提取效果的因素順序為：B>C>A，B因素對提取有顯著性影響，A因素和C因素對提取無顯著性影響，考慮到節(jié)省能源和時間以有利于 工業(yè) 生產(chǎn)，因此確定提取工藝為A2B2C2，即用8倍量體積分?jǐn)?shù)95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h。28工藝驗證試驗為考察上述優(yōu)選提取工藝的穩(wěn)定性，取丹參3份，每份50 g，按該工藝條件即藥材用8倍量體積分?jǐn)?shù)95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h，分別測定丹參酮A提取量。結(jié)果見表6。按正交實驗優(yōu)先的最佳工藝進(jìn)行驗證試驗，3次結(jié)果都處于較高水平，這說明該提取工藝是穩(wěn)定可行的。表4正交水平表表5正交方差分析表6工藝驗證試驗結(jié)果3程文君,張艷萍.丹參脂溶性成分抗菌消炎作用及其 臨床 應(yīng)用J. 中國 現(xiàn)代實用 醫(yī)學(xué) 雜志,2007,3(6):61.4趙小亮,雷浩東,張繼.丹參有效成分提取的研究概述J.安徽 農(nóng)業(yè) 科學(xué) ,2007,35(6):1795.5蘇子仁,劉中秋.丹參醇提液在濃縮、干燥工藝過程中的化學(xué)成分變化研究(I)丹參酮A濕熱降解機(jī)理探討J.中成藥,1997,19(1):5.6周昊,彭國平.丹參的傳統(tǒng)提取工藝與超臨界CO2萃取大孔樹脂聯(lián)用工藝的比較研究J.中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2007,25(4):