色譜柱的制備

1、實(shí)驗(yàn)一 色譜柱的制備一、目的要求1. 掌握固定液的配制及涂漬技術(shù)2. 掌握柱的填裝及老化技術(shù)。二、方法概述一根好的色譜柱不僅與選擇合適的固定液和載體有重要關(guān)系，而且與固定液能否在載體表面上分布成一層均勻液膜以及與固定液填充情況有緊密關(guān)系。固定液涂漬一般系用靜態(tài)法。涂漬完畢后進(jìn)行柱的裝填。裝填要求均勻緊密，不得敲打過(guò)猛，以免載體粉碎，使柱效變壞。剛填裝的柱子不能馬上使用，需要老化處理，其目的是徹底除去殘余和揮發(fā)性雜質(zhì)，促使固定液均勻、牢固地分布在載體表面上。三、儀器與試劑儀器：1. 臺(tái)天平；2. 真空泵；3. 分析天平；4. 不銹鋼色譜柱；5.玻璃棉。試劑：1. 6201載體（6080目）；2.

2、 鄰苯二甲酸二壬酯（色譜專用）；3. 乙醚A.R。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 色譜柱的清洗清洗的方法是：用510的熱堿（NaOH或KOH）溶液抽洗45次，以除去內(nèi)壁油膩或污物，用水沖洗干凈后，再用蒸餾水沖洗數(shù)次，烘干備用。2. 固定液的涂漬固定液的配比：鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）：6201載體3100將市售的一定粒度范圍的6201載體，預(yù)先過(guò)篩（6080目），然后根據(jù)色譜柱體積，量取已過(guò)篩的載體（比色譜柱體積放寬23ml），記下體積，稱重。再根據(jù)載體的重量以及配比關(guān)系，計(jì)算出固定液DNP的含量。在分析天平上稱取DNP。用量筒量取略小于載體體積的無(wú)水乙醚，將此乙醚分35次把DNP全部轉(zhuǎn)移至250ml燒杯中

3、，溶解完全后，把載體倒入，并迅速搖勻，使乙醚溶液正好淹沒(méi)載體，于室溫下，置于通風(fēng)櫥內(nèi)，并拍打燒杯，幫助載體翻轉(zhuǎn)，使乙醚均勻揮發(fā)，直至無(wú)乙醚氣味為止，然后裝柱。3. 柱的裝填將色譜柱一端塞入少許清潔的玻璃棉，用四層紗布包住，與真空泵相連，另一端接漏斗，啟動(dòng)真空泵，邊抽邊從漏斗上加入已涂好固定液的載體，并不斷輕輕敲打，以保證填充緊密直至載體不再下沉為止。在裝填完畢后，另一端也塞上少許玻璃棉。4. 老化將裝填好的柱子安裝在氣相色譜儀上，柱尾不接檢測(cè)器（接真空泵一端的柱子作為柱尾），通入載氣，調(diào)節(jié)柱溫在95，老化四小時(shí)，老化完畢后，將柱尾接檢測(cè)器，檢漏。檢漏的方法是：將柱后堵死，通入2kg/cm2壓力的載氣。若不漏氣，轉(zhuǎn)子流量計(jì)浮子應(yīng)下降至零。流量計(jì)浮子若不能下降至零，用十二烷基苯磺酸鈉溶液檢查各連接處有否漏氣。檢漏畢，繼續(xù)通入載氣，調(diào)節(jié)柱溫至95，打開(kāi)記錄儀，直至記錄儀基線平直為止。此時(shí)，色譜柱即可供分析使用。五、注意事項(xiàng)a) 涂漬時(shí)切忌圖快而在高溫下烘烤。為了加快溶劑蒸發(fā)速度，可用紅外燈烘烤固定相；b) 填充時(shí)敲打不得過(guò)猛，以免載體粉碎。c) 安裝色