原花青素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性血栓形成的影響

1、原花青素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性血栓形成的影響         08-03-04 10:40:00     編輯：studa20               作者：蔣辛, 趙良中, 張海龍, 張軍, 王化洲【摘要】  本研究旨在探討原花青素（PC）抗血栓形成的作用及其機(jī)制。麻醉動(dòng)物，然后給頸動(dòng)脈局部施以20%三氯化鐵溶液 20分鐘，以造成大

2、鼠頸動(dòng)脈血栓模型。實(shí)驗(yàn)分6組：假血栓（對(duì)照）組、血栓模型組、阿斯匹林10 mg/（kg·d）組、PC 100 mg/（kg·d）組、PC 200 mg/（kg·d）組及PC 400 mg/（kg·d）組。假血栓（對(duì)照）組和血栓模型組用生理鹽水灌胃，其它各組分別用阿司匹林和PC低、中、高3個(gè)不同劑量懸液灌胃，每日2次，連續(xù)4周。觀察各組藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)性血栓形成的大鼠血漿中的血栓烷（TXB2）和6酮前列腺素F1（6KetoPGF1）及血小板P選擇蛋白（GMP140）含量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 與假血栓對(duì)照組比較，血栓模型組血漿TXB2和血小板P選擇蛋白（GMP140

3、）含量明顯升高，血漿6KetoPGF1含量明顯降低，差異非常顯著（P0.01）；與血栓模型組比較， 3個(gè)PC組和阿司匹林組大鼠血漿TXB2和血小板P選擇蛋白（GMP140）含量明顯降低，差異非常顯著（P0.01），血漿6KetoPGF1含量明顯升高（P0.01）；與阿司匹林組比較，3個(gè)PC組血漿TXB2和血小板P選擇蛋白（GMP140）含量均不同程度降低，而血漿6KetoPGF1含量升高，其中尤以PC 400 mg/（kg·d）組最為顯著（P0.01）。結(jié)論： PC具有明顯的抗血栓形成作用，其抗血栓形成的機(jī)制與抑制血小板活化、聚集及保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞密切相關(guān)。PC抗血栓形成作用有明顯的

4、劑量依賴性。PC 400 mg/（kg·d）組的抗血栓作用優(yōu)于阿司匹林10 mg/（kg·d）組。 【關(guān)鍵詞】  原花青素血栓形成血小板活化血栓烷6酮前列腺素F1血小板P選擇蛋白 Effects of Procyanidin Oligomers on Experimental Thrombosis in Rats        Abstract    The study was aimed to investigate the potential effect of

5、 procyanidins (PC) as antithrombotic agent  and   its mechanism. 48 male SD rats  were randomized into 6 groups, which include 8 rats each. Group A was normal control, group  B was model control  (no treatment),   group C was group treated with  aspirin&#

6、160; 10mg/（kg·d） ,  groups D, E and F were treated with low, medial and high dose 100, 200 and 400 mg/（kg·d） of PC  respectively.  In accordance with Kurzs protocols,  rats model of thrombosis of common carotid artery was contructed with FeCl3, but for goup A  

7、;  0.9% of normal saline was used  for 20 minutes.  The thromboxane B2 (TXB2), 6KetoPGF1 and GMP140 contents in plasma were measured. The results showed that  compared with the normal control group,  the contents of TXB2 and GMP140 in plasma markedly increased in  all o

8、f PC groups and aspirin group,   and the contents of 6KetoPGF1 in plasma decreased. Compared with the model group, the contents of TXB2 and GMP140 in plasma markedly decreased in all of PC groups and aspirin group, and  the contents of 6KetoPGF1 in plasma increased. Compared with the

9、aspirin group, the contents of TXB2 and GMP140 in plasma reduced in all of PC groups  and  the contents of 6KetoPGF1 in plasma increased which was obvious in PC 400 mg/（kg·d） group. It is  concluded that PC shows obvious antithrombosis effect, its mechanism closely correlates wit

10、h inhibition of  platelet activation and aggregation as well as protecting vasoendothelial cells. Antithrombosis of PC shows significant dosedependence.   The effect of the PC 400 mg/（kg·d）  surpass the aspirin, but  there is no significant difference between the PC 200

11、 mg/（kg·d）  and  aspirin. This study   provides experimental basis for clinical  prevention and treatment of thrombosis.    Key words    procyanidins；thrombosis； platelet activation； TXB2；6ketoPGF1 ； GMP140    原花青素（procyanidi

12、ns，PC）是植物界中廣泛存在的一大類多酚化合物的總稱，起初統(tǒng)歸于縮合鞣質(zhì)或黃烷醇類，隨著分離鑒定技術(shù)的提高和研究的深入，現(xiàn)已成為一大類物質(zhì)1-4，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下3：法國(guó)教授Jacques Masquelier 于1951年首次發(fā)現(xiàn)了PC的抗氧化性能。自上世紀(jì)60年代開始，歐洲的醫(yī)生就知道用葡萄籽的提取物治療枯草熱和過(guò)敏癥，并獲得滿意的效果；上世紀(jì)80年代初，法國(guó)醫(yī)生用它治療毛細(xì)血管脆化，慢性外周性靜脈機(jī)能不全和視網(wǎng)膜微血管病等微循環(huán)疾病。PC作為一種天然強(qiáng)力抗氧化劑，安全無(wú)毒副作用。近年來(lái)，對(duì)原花青素的研究熱點(diǎn)主要集中在抗氧化、抗心肌缺血再灌注損傷、抗高血壓及調(diào)節(jié)血脂等方面5-9，而PC抑

13、制血栓形成的研究比較少見10,11，其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步闡明和驗(yàn)證。    中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志  J Exp Hematol 2007; 15(3)原花青素對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性血栓形成的影響  材料和方法    材料    原花青素粉劑（批號(hào)20040719）天津尖峰集團(tuán)提供。阿司匹林粉劑（批號(hào)20040225）山東新華制藥股份有限公司提供。血漿血栓烷（TXB2）放射免疫分析藥盒（批號(hào)20050101）和血漿6酮前列腺素（6KetoPG）放射免疫分析藥盒（批號(hào)20050101）均購(gòu)置于北京市福

14、瑞生物工程公司。人血漿血小板P選擇蛋白（GMP140）酶標(biāo)試劑盒（批號(hào)20041210）購(gòu)置于蘇州大學(xué)血液研究所。這3種試劑盒均為人鼠通用。    實(shí)驗(yàn)分組和給藥    48只健康SpragueDawley（SD）大鼠，雌雄各半，體重240-300 g，由錦州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。SD大鼠隨機(jī)分為6組，假血栓（對(duì)照）組、血栓模型組、阿司匹林組、原花青素100  mg/（kg·d） 組、原花青素200 mg/（kg·d） 組和原花青素400 mg/（kg·d） 組，每組8只。原花青素和阿司匹林粉

15、末準(zhǔn)確稱量后用蒸餾水新鮮配制為懸濁液，按照表1分組與給藥。    大鼠急性頸總動(dòng)脈血栓模型的制備    依照Kurz13提供的方法誘導(dǎo)產(chǎn)生急性頸總動(dòng)脈血栓模型。大鼠按照動(dòng)物體重，以10%烏拉坦（1 /）腹腔注射進(jìn)行全身麻醉。將麻醉后的動(dòng)物仰位固定，切開頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，暴露一側(cè)頸總動(dòng)脈。將吸有20%三氯化鐵溶液10 l的1 cm×1 cm的濾紙小片包裹在此段頸總動(dòng)脈上，計(jì)時(shí)20分鐘取下。假血栓組(正常對(duì)照）除不滴加三氯化鐵溶液，而應(yīng)用生理鹽水代替外，其余手術(shù)步驟同模型組。    大鼠血

16、漿指標(biāo)檢測(cè)    末次給藥后半小時(shí)，在麻醉下，暴露另一側(cè)頸總動(dòng)脈，用注射器抽取大鼠血液約6 ml，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作并檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，包括： TXB2、 6KetoPGF1、血小板P選擇蛋白（GMP140）。    統(tǒng)計(jì)學(xué)分析    在Windows XP操作環(huán)境下，用SPSS  11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析與檢驗(yàn)。各組實(shí)驗(yàn)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，數(shù)據(jù)應(yīng)用t檢驗(yàn)。其他組間比較采用單因素方差分析（F檢驗(yàn)）及LSDt檢驗(yàn)。P0.05被認(rèn)為有顯著性差異，P0.01被認(rèn)為有非

17、常顯著性差異。    結(jié)    果    大鼠血漿血栓烷B2（TXB2）和血漿6KetoPGF1含量的測(cè)定    血漿血栓烷和血漿6KetoPGF1含量測(cè)定結(jié)果見表2和圖1。 由表2和圖1可以看出，與假血栓（正常對(duì)照）組相比較，血栓模型組血漿中TXB2含量明顯升高，有非常顯著差異 （P0.01）；與模型組比較，PC 200 mg/（kg·d）、PC 400 mg/（kg·d）組及阿司匹林組10 mg/（kg·d）血漿中TXB2含量明顯降低，有非常

18、顯著差異（P0.01）；與阿司匹林組10 mg/（kg·d）比較，PC 400組血漿中TXB2含量未見顯著差異（P0.05）。正常大鼠頸總動(dòng)脈血漿6KetoPGF1含量保持較低水平。與假血栓組比較，血栓模型組血漿6KetoPGF1含量明顯下降，具有非常顯著差異（P0.01）；與血栓模型組相比，PC 200 mg/（kg·d）組和PC 400 mg/（kg·d）組血漿6KetoPGF1含量明顯升高，差異具有顯著性（P0.01）。與阿司匹林組10 mg/（kg·d）相比，PC 200 mg/（kg·d）組和PC  400 mg/（kg·d）組血漿6KetoPGF1含量明顯升高，差異具有顯著性（P0.01），并呈劑量依賴性。    大鼠頸總動(dòng)脈血漿