第七章 分子發(fā)光-熒光與磷光

1、精選ppt1第七章molecular luminescence analysis精選ppt2精選ppt3一、熒光與磷光的產(chǎn)生過(guò)程luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence 由分子結(jié)構(gòu)理論，主要討論熒光及磷光的產(chǎn)生機(jī)理。1. 分子能級(jí)與躍遷分子能級(jí)與躍遷 分子能級(jí)比原子能級(jí)復(fù)雜； 在每個(gè)電子能級(jí)上，都存在振動(dòng)、轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)； 基態(tài)(S0)激發(fā)態(tài)(S1、S2、激發(fā)態(tài)振動(dòng)能級(jí))：吸收特定頻率的輻射；量子化；躍遷一次到位； 激發(fā)態(tài)基態(tài)：多種途徑和方式(見(jiàn)能級(jí)圖)；速度最快、激發(fā)態(tài)壽命最短的途徑占優(yōu)勢(shì)； 第一、第二、電子激發(fā)單

2、重態(tài) S1 、S2 ； 第一、第二、電子激發(fā)三重態(tài) T1 、 T2 ；精選ppt42.電子激發(fā)態(tài)的多重度 電子激發(fā)態(tài)的多重度：M=2S+1 S為電子自旋量子數(shù)的代數(shù)和(0或1)； 平行自旋比成對(duì)自旋穩(wěn)定(洪特規(guī)則)，三重態(tài)能級(jí)比相應(yīng)單重態(tài)能級(jí)低； 大多數(shù)有機(jī)分子的基態(tài)處于單重態(tài)； S0T1 禁阻躍遷；通過(guò)其他途徑進(jìn)入(見(jiàn)能級(jí)圖)；進(jìn)入的幾率??； 精選ppt52.激發(fā)態(tài)基態(tài)的能量傳遞途徑(分子的去激過(guò)程) 電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時(shí)，通過(guò)輻射電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時(shí)，通過(guò)輻射躍遷躍遷( (發(fā)光發(fā)光) )和無(wú)輻射躍遷等方式失去能量；和無(wú)輻射躍遷等方式失去能量；傳遞途徑傳遞

3、途徑輻射躍遷熒光延遲熒光磷光內(nèi)轉(zhuǎn)移外轉(zhuǎn)移系間跨越振動(dòng)弛預(yù)無(wú)輻射躍遷 激發(fā)態(tài)停留時(shí)間短、返回速度快的途徑，發(fā)生的幾率大，發(fā)光強(qiáng)度相對(duì)大；熒光熒光：10-710 -9 s,第一激發(fā)單重態(tài)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)基態(tài)；磷光磷光：10-410s；第一激發(fā)三重態(tài)三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)基態(tài)；精選ppt6S2S1S0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光發(fā)發(fā)射射磷磷光光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫能量l l 2l l 1l l 3 外轉(zhuǎn)換l l 2T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫分子吸收和發(fā)射過(guò)程的Jablonski能級(jí)圖精選ppt7非輻射能量傳遞過(guò)程振動(dòng)弛豫振動(dòng)弛豫：在凝聚相體系中，被激發(fā)到激發(fā)態(tài)(如S1和S2)的分子能通過(guò)與溶劑分子的碰撞

4、迅速以熱的形式把多余的振動(dòng)能量傳遞給周?chē)姆肿?，而自身返回該電子能?jí)的最低振動(dòng)能級(jí)，這個(gè)過(guò)程稱為振動(dòng)弛豫。發(fā)生振動(dòng)弛豫的時(shí)間10 -12 s。內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換：當(dāng)S2的較低振動(dòng)能級(jí)與S1的較高振動(dòng)能級(jí)的能量相當(dāng)或重疊時(shí)，分子有可能從S2的振動(dòng)能級(jí)以無(wú)輻射方式過(guò)渡到S1的能量相等的振動(dòng)能級(jí)上。這個(gè)過(guò)程稱為內(nèi)轉(zhuǎn)換。內(nèi)轉(zhuǎn)換發(fā)生的時(shí)間約為10 -12 s。內(nèi)轉(zhuǎn)換過(guò)程同樣也發(fā)生在激發(fā)態(tài)三重態(tài)的電子能級(jí)間。 由于振動(dòng)弛豫和內(nèi)轉(zhuǎn)換過(guò)程極為迅速(10 -12 s)，因此，激發(fā)后的分子很快回到電子第一激發(fā)單重態(tài)S1的最低振動(dòng)能級(jí)。所以高于第一激發(fā)態(tài)的熒光發(fā)射十分少見(jiàn)。精選ppt8外轉(zhuǎn)換外轉(zhuǎn)換：激發(fā)分子與溶劑或其他分

5、子之間產(chǎn)生相互作用而轉(zhuǎn)移能量的非輻射躍遷；外轉(zhuǎn)換過(guò)程是熒光或磷光的競(jìng)爭(zhēng)過(guò)程，因此，該過(guò)程使熒光或磷光減弱或“猝滅”。系間跨越系間跨越：是不同多重態(tài)之間的一種無(wú)輻射躍遷。該過(guò)程是激發(fā)電子改變其自旋態(tài)，分子的多重性發(fā)生變化的結(jié)果。當(dāng)兩種能態(tài)的振動(dòng)能級(jí)重疊時(shí)，這種躍遷的概率增大。 如S1到T1躍遷就是系間躍遷的例子，即單重態(tài)到三重態(tài)的躍遷。即較低單重態(tài)振動(dòng)能級(jí)與較高的三重態(tài)振動(dòng)能級(jí)重疊。這種躍遷是“禁阻”的。 改變電子自旋，禁阻躍遷，通過(guò)自旋軌道耦合進(jìn)行。精選ppt9輻射能量傳遞過(guò)程 熒光發(fā)射：熒光發(fā)射：當(dāng)分子處于第一激發(fā)單重態(tài)當(dāng)分子處于第一激發(fā)單重態(tài)S1的最低能級(jí)時(shí)，分的最低能級(jí)時(shí)，分子返回基態(tài)的

6、過(guò)程比振動(dòng)弛豫和內(nèi)轉(zhuǎn)化過(guò)程慢得多。分子可子返回基態(tài)的過(guò)程比振動(dòng)弛豫和內(nèi)轉(zhuǎn)化過(guò)程慢得多。分子可能通過(guò)發(fā)射光子躍遷回到基態(tài)能通過(guò)發(fā)射光子躍遷回到基態(tài)S0的各振動(dòng)能級(jí)上，這個(gè)過(guò)程的各振動(dòng)能級(jí)上，這個(gè)過(guò)程稱為熒光發(fā)射。稱為熒光發(fā)射。電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)基態(tài)（ 多為 S1 S0躍遷），發(fā)射波長(zhǎng)為 l2的熒光； 10-710 -9 s 。 由圖可見(jiàn)，發(fā)射熒光的能量比分子吸收的能量小，波長(zhǎng)長(zhǎng)； l l2 l l 2 l l 1 ；精選ppt10磷光發(fā)射磷光發(fā)射：激發(fā)態(tài)分子經(jīng)過(guò)系間跨躍達(dá)到激發(fā)三重態(tài)后，并經(jīng)過(guò)迅速的振動(dòng)弛豫達(dá)到第一激發(fā)三重態(tài)(T1)的最低振動(dòng)能級(jí)上，從T1態(tài)分子經(jīng)發(fā)射光子返回基態(tài)

7、。此過(guò)程稱為磷光發(fā)射。磷光發(fā)射是不同多重態(tài)之間的躍遷(即T1 S0)，故屬于“禁阻”躍遷。因此磷光的壽命比熒光要長(zhǎng)很多，約為10-3到10s。所以，將激發(fā)光從磷光樣品移走后，還?？梢杂^察到發(fā)光現(xiàn)象，而熒光發(fā)射卻觀察不到該現(xiàn)象。精選ppt112. 分子的活化與去活化 精選ppt12分子的活化與去活化精選ppt13*MXMX n1iihv n1jjhvMXMX* 任何熒光分子都具有兩種特征的光譜，即激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。熒光(磷光)：光致發(fā)光，照射光波長(zhǎng)如何選擇？精選ppt14200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900040

8、08001200160020002400280032003600400044004800 IFl l 固定測(cè)量波長(zhǎng)(選最大發(fā)射波長(zhǎng)),化合物發(fā)射的熒光(磷光)強(qiáng)度與照射光波長(zhǎng)的關(guān)系曲線。精選ppt15 固定激發(fā)光波長(zhǎng)(選最大激發(fā)波長(zhǎng)), 化合物發(fā)射的熒光(或磷光強(qiáng)度)與發(fā)射光波長(zhǎng)關(guān)系曲線。200260320380440500560620熒光激發(fā)光譜熒光激發(fā)光譜熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜磷光光譜磷光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜精選ppt16200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 9000

9、4008001200160020002400280032003600400044004800 IFl l精選ppt17200250300350400450500熒光激發(fā)光譜熒光激發(fā)光譜熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜nm蒽的激發(fā)光譜和熒光光譜蒽的激發(fā)光譜和熒光光譜精選ppt18三、熒光光譜的特征激發(fā)光譜與發(fā)射光譜的關(guān)系1、Stokes位移 在溶液中，分子的熒光發(fā)射波長(zhǎng)總是比其相應(yīng)的吸收(或激發(fā))光譜的波長(zhǎng)長(zhǎng)，熒光發(fā)射這種波長(zhǎng)位移的現(xiàn)象稱為Stokes位移。 處于激發(fā)態(tài)的分子一方面由于振動(dòng)弛豫等損失了部分能量，另一方面溶劑分子的弛豫作用使其能量進(jìn)一步損失，因而產(chǎn)生了發(fā)射光譜波長(zhǎng)的位移，這種位移表明在熒光

10、激發(fā)和發(fā)射之間所產(chǎn)生的能量損失。精選ppt19200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 90004008001200160020002400280032003600400044004800 IFl l 通常熒光發(fā)射光譜與它的吸收光譜（與激發(fā)光譜形狀一樣）成鏡像對(duì)稱關(guān)系。 精選ppt20鏡像規(guī)則的解釋大多數(shù)吸收光譜的形狀表明了分子的第一激發(fā)態(tài)的振動(dòng)能級(jí)結(jié)構(gòu)，而熒光發(fā)射光譜則表明了分子基態(tài)的振動(dòng)能級(jí)結(jié)構(gòu)一般情況下，分子的基態(tài)和第一激發(fā)單重態(tài)的振動(dòng)能級(jí)結(jié)構(gòu)相似，因此吸收光譜的形狀與熒光發(fā)生光譜的形狀呈鏡像對(duì)稱關(guān)系。精選ppt213

11、、熒光發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無(wú)關(guān) 一般地，用不同波長(zhǎng)的激發(fā)光激發(fā)熒光分子，可以觀察到形狀相同的熒光發(fā)射光譜。熒光分子無(wú)論被激發(fā)到哪一個(gè)激發(fā)態(tài)，處于激發(fā)態(tài)的分子經(jīng)振動(dòng)弛豫及內(nèi)轉(zhuǎn)換等過(guò)程最終回到第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)。而分子的熒光發(fā)射總是從第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)躍遷到基態(tài)的各振動(dòng)能級(jí)上，所以熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無(wú)關(guān)。精選ppt22S2S1S0T1吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光發(fā)發(fā)射射磷磷光光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫能量l l 2l l 1l l 3 外轉(zhuǎn)換l l 2T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫分子吸收和發(fā)射過(guò)程的Jablonski能級(jí)圖精選ppt272002503003504004505005506006

12、50700750800850900080016002400320040004800 IFl lRLS精選ppt29bC303. 20teT,bCIIlgTlgA bC303.20te1T1II1 )e1(IIIbC303.20t0 )e1(I)II(IbC303.20t0F !nx!4x!3x!2x!1x1en432x 精選ppt30)!4)bC30. 2(!3)bC30. 2(!2)bC30. 2(bC30. 2(II4320F CbIk30. 2I0FF CbIk30. 2I0PP CKIF KCIP n1iikkF(P)F(P)1 精選ppt31激激發(fā)發(fā)分分子子總總數(shù)數(shù)發(fā)發(fā)射射熒熒光光的

13、的分分子子數(shù)數(shù) F n1iiFFFkkk 激激發(fā)發(fā)分分子子總總數(shù)數(shù)發(fā)發(fā)射射磷磷光光的的分分子子數(shù)數(shù) P n1iiPPstPkkk 精選ppt32 強(qiáng)熒光的有機(jī)化合物具備下特征強(qiáng)熒光的有機(jī)化合物具備下特征:具有大的共軛具有大的共軛鍵結(jié)構(gòu)；鍵結(jié)構(gòu)；具有剛性的平面結(jié)構(gòu)；具有剛性的平面結(jié)構(gòu)；具有最低的單重電子激發(fā)態(tài)為具有最低的單重電子激發(fā)態(tài)為S1為為 * 型；型；取代基團(tuán)為給電子取代基。取代基團(tuán)為給電子取代基。精選ppt33精選ppt34N NN NCCOO-O-OCOCOO-O-OCH2OHCH3H3C精選ppt35ONO2精選ppt36NCH3H3C-O3SNCH3H3CSO3-CCHHCCHHO

14、HO-OHO-精選ppt37精選ppt38三. 金屬螯合物的熒光NOHNOZnNNOOAlNNOHHO精選ppt39三、影響熒光強(qiáng)度的環(huán)境因素1.1.溶劑的影響溶劑的影響 除一般溶劑效應(yīng)外，溶劑的極性、氫鍵、配位鍵的形成都將使化合物的熒光發(fā)生變化；2.2.溫度的影響溫度的影響 熒光強(qiáng)度對(duì)溫度變化敏感，溫度增加，外轉(zhuǎn)換去活的幾率增加。3. 3. 溶液溶液pHpH 對(duì)酸堿化合物，溶液pH的影響較大，需要嚴(yán)格控制；精選ppt404.內(nèi)濾光作用和自吸現(xiàn)象自吸現(xiàn)象自吸現(xiàn)象：化合物的熒光發(fā)射光譜的短波長(zhǎng)端與其吸收光譜的長(zhǎng)波長(zhǎng)端重疊，產(chǎn)生自吸收；如蒽化合物。內(nèi)濾光作用內(nèi)濾光作用：溶液中含有能吸收激發(fā)光或熒光

15、物質(zhì)發(fā)射的熒光，如色胺酸中的重鉻酸鉀；精選ppt415.溶液熒光的猝滅精選ppt42Hhvhvk*,k*1QMQMMMMM2 *,*hvhvAADD )(A)D()A()(D)(A)D()A()(D1*0011*001SSSTSSSS* NCH3CH3NCH3CH3+_精選ppt4323*3231OMOM 1k*hvhvDDDD D)(DDD11* kT M2M)M(MM*3*3*3精選ppt44精選ppt45精選ppt46精選ppt47400 410 420 430 440 450 460 470 480 490 5000102030405060708090100 T T %l l精選ppt

16、48精選ppt49精選ppt50bCIIlgA0t CbIk30. 2I0FF A ,I ,kI0FF 精選ppt51精選ppt52精選ppt53精選ppt54精選ppt55紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)量池(吸收池)I0ItI0ItIF,p精選ppt567.5 7.5 化學(xué)發(fā)光分析化學(xué)發(fā)光分析精選ppt57一、一、基本原理基本原理1. 1. 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng) 在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中，某些化合物接受能量而被激發(fā)，從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，發(fā)射出一定波長(zhǎng)的光。 A +B = C + D* D* D + h （1）能夠發(fā)光的化合物大多為有機(jī)化合物，芳香族化合物；）能夠發(fā)光的化合物大多為有機(jī)化合物，芳香族化合物

17、；（2）化學(xué)發(fā)光反應(yīng)多為氧化還原反應(yīng)，激發(fā)能與反應(yīng)能相當(dāng)）化學(xué)發(fā)光反應(yīng)多為氧化還原反應(yīng)，激發(fā)能與反應(yīng)能相當(dāng) E=170300 kJ/mol；位于可見(jiàn)光區(qū)；位于可見(jiàn)光區(qū)；（3）發(fā)光持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，反應(yīng)持續(xù)進(jìn)行；發(fā)光持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，反應(yīng)持續(xù)進(jìn)行； 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)存在于生物體(螢火蟲(chóng)、海洋發(fā)光生物)中，稱生物發(fā)光(bioluminescence)。精選ppt582.2.化學(xué)發(fā)光效率化學(xué)發(fā)光效率化學(xué)效率：化學(xué)效率：clceem發(fā)射光子的分子數(shù)參加反應(yīng)的分子數(shù)ce激發(fā)態(tài)分子數(shù)參加反應(yīng)分子數(shù)發(fā)光效率：發(fā)光效率：em產(chǎn)生光子數(shù)激發(fā)態(tài)分子數(shù)時(shí)刻t 的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度(單位時(shí)間發(fā)射的光量子數(shù))： clclddcIttdc

18、/dt 分析物參加反應(yīng)的速率；精選ppt593.3.化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與化學(xué)發(fā)光分析的依據(jù)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與化學(xué)發(fā)光分析的依據(jù) 在化學(xué)發(fā)光分析中，被分析物相對(duì)于發(fā)光試劑小得多，對(duì)于一級(jí)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)： cttcttIAttcl0cl0cldddd dc/dt =Kc； K 為反應(yīng)速率常數(shù)。定性依據(jù)：定性依據(jù)：（1）在一定條件下，峰值光強(qiáng)度與被測(cè)物濃度成線性；（2）在一定條件下，曲線下面積為發(fā)光總強(qiáng)度(S)，其與被測(cè)物濃度成線性：精選ppt604.4.化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的類型化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的類型（1 1）氣相化學(xué)發(fā)光反應(yīng)）氣相化學(xué)發(fā)光反應(yīng)a. 一氧化氮與一氧化氮與O3的發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光反應(yīng) NO + O3 NO2* N

19、O2* NO2 + h 發(fā)射的光譜范圍：600875nm，靈敏度1ng/cm-3；b.氧原子與氧原子與SO2、NO、CO的發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光反應(yīng) O3 O2 + O （1000 C石英管中進(jìn)行） SO2 + O + O SO2* + O2 SO2 * SO2* + h 最大發(fā)射波長(zhǎng)：200nm；靈敏度1ng/cm-3； 精選ppt61 O3 O2 + O （1000 C石英管中進(jìn)行石英管中進(jìn)行） NO + O NO2* NO2 * NO2 + h 發(fā)射光譜范圍：發(fā)射光譜范圍：4001400nm；靈敏度；靈敏度1ng/cm-3；氧原子與氧原子與CO的發(fā)光反應(yīng)：的發(fā)光反應(yīng)： CO + O CO2* C

20、O2 * CO2 + h 發(fā)射光譜范圍：發(fā)射光譜范圍：300500nm；靈敏度；靈敏度1ng/cm-3； 氧原子與氧原子與NO的發(fā)光反應(yīng)：的發(fā)光反應(yīng)：精選ppt62c. 乙烯與乙烯與O3的發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光反應(yīng) 乙烯與乙烯與O3反應(yīng)，生成激發(fā)態(tài)乙醛：反應(yīng)，生成激發(fā)態(tài)乙醛： CH2O* CH2O + h 最大發(fā)射波長(zhǎng)：最大發(fā)射波長(zhǎng)：435nm；對(duì)；對(duì)O3的特效反應(yīng)；線性響應(yīng)的特效反應(yīng)；線性響應(yīng)范圍范圍1 ng/cm-3 1 g/cm-3；精選ppt63（2 2）火焰中的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)）火焰中的化學(xué)發(fā)光反應(yīng) 在富氫火焰中，也存在著很強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)；在富氫火焰中，也存在著很強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)；a. 一氧化

21、氮一氧化氮 NO + H HNO* HNO * HNO + h 發(fā)射光譜范圍：發(fā)射光譜范圍：660770nm； 最大發(fā)射波長(zhǎng)：最大發(fā)射波長(zhǎng)：690nm； 在在富氫火焰中：富氫火焰中： NO2 + 2H NO + H2O 該反應(yīng)十分迅速；該反應(yīng)十分迅速；精選ppt64b.硫化物硫化物 揮發(fā)性硫化物揮發(fā)性硫化物SO2 、H2S 、CH3SH、 CH3SCH3等在富等在富氫火焰中燃燒，產(chǎn)生很強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光（藍(lán)色）：氫火焰中燃燒，產(chǎn)生很強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光（藍(lán)色）： SO2 + 2H2 S + 2H2O S + S 2S2 * S2 * S2 + h 發(fā)射光譜范圍：發(fā)射光譜范圍：350460nm； 最大發(fā)射波長(zhǎng)

22、：最大發(fā)射波長(zhǎng)：394nm； 靈敏度：靈敏度： 0.2 ng/cm-3； 發(fā)射光強(qiáng)度與硫化物濃度的平方成正比。發(fā)射光強(qiáng)度與硫化物濃度的平方成正比。精選ppt65（3 3）液相中的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)）液相中的化學(xué)發(fā)光反應(yīng) 機(jī)理研究較多，在分析中應(yīng)用最多；可測(cè)痕量的H2O2 、Cu、Mn、Co、V、Fe、Cr、Ce、Hg、Th等。 應(yīng)用最多的發(fā)光試劑：魯米諾（3-氨基苯二甲酰肼）； 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)效率：0.150. 05； 魯米諾在堿性溶液中與雙氧水的反應(yīng)過(guò)程：反應(yīng)過(guò)程： 該發(fā)光反應(yīng)速度慢，某些金屬離子可催化反應(yīng)；利用這一現(xiàn)象可測(cè)定這些金屬離子。精選ppt665. 5. 化學(xué)與生物發(fā)光分析的應(yīng)用化學(xué)與生物

23、發(fā)光分析的應(yīng)用（1） 該發(fā)光反應(yīng)速度慢，某些金屬離子可催化反應(yīng)；利用該發(fā)光反應(yīng)速度慢，某些金屬離子可催化反應(yīng)；利用這一現(xiàn)象可間接測(cè)定這些金屬離子。可測(cè)痕量的這一現(xiàn)象可間接測(cè)定這些金屬離子?？蓽y(cè)痕量的Cu2+ 、Mn2+、Co2+、V4+、Fe2+、 Fe3+、 Ni2+、Ag+、Au3+、Hg2+等等（2） 可檢測(cè)低至可檢測(cè)低至 10-9 mol/L 的的H2O2；（3） 間接測(cè)定某些生物試樣間接測(cè)定某些生物試樣 氨基酸氨基酸 + O2 酮酸酮酸 +NH3 + H2O2 氨基酸氧化酶 葡萄糖葡萄糖 + O2 + H2O 葡萄糖酸葡萄糖酸 + H2O2 通過(guò)測(cè)定生成的通過(guò)測(cè)定生成的H2O2 ，確

24、定氨基酸、葡萄糖含量。，確定氨基酸、葡萄糖含量。葡萄糖氧化酶精選ppt67 草酸二酯(能量提供體)+高濃度雙氧水+稠環(huán)芳烴(能量接受體)+金屬離子+溶劑組成的反應(yīng)體系，可發(fā)出很強(qiáng)的可見(jiàn)光，發(fā)光效率高，使用不同的稠環(huán)芳烴，發(fā)射出不同顏色的光(冷光源)。精選ppt68生物發(fā)光分析應(yīng)用生物發(fā)光分析應(yīng)用 1 1 在pH 78；熒光素酶(E)和Mg2+的存在下，熒光素(LH2)與磷酸三腺甙(ATP)的反應(yīng)，生成磷酸腺甙(AMP)熒光素和熒光素酸的復(fù)合物和鎂的焦磷酸鹽(ppi)： ATP + LH2 + E + Mg2+ AMP LH2 E +Mg ppi + 2H+pH7 - 8復(fù)合物與氧反應(yīng)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光： AMP LH2 E + O2 氧化熒光素* + AMP+CO2 + H2O氧化熒光素* 氧化熒光素 + h最大發(fā)射波長(zhǎng)562nm；精選ppt69生物發(fā)光分析應(yīng)用生物發(fā)光分析應(yīng)用 2 2 煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)在細(xì)菌中的黃素酶作用下，在氧化型黃素單核苷酸(FMA)存在下，發(fā)生發(fā)光反應(yīng) ：NADH + FMA + H+ NAD+ + FMNH2NADH脫氫酶FMNH2 + RCHO + O2 FMN + RCOOH + H2O + h黃素酶最大發(fā)射波長(zhǎng)495 nm