高效液相色譜測定肉制食品中五種鄰苯二甲酸酯

1、高效液相色譜測定肉制食品中五種鄰苯二甲酸酯資料來源：中國增塑劑網(wǎng)王美麗，陳海婷，張會娜，郭智勇，魏丹毅(寧波市新型功能材料及制備科學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，寧波大學(xué)材料科學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，寧波315211)摘要:建立了肉制食品中5種鄰苯二甲酸酯類增塑劑(PAEs)含量的檢測方法。樣品用正己烷提取，C18柱分離，柱溫35.0，乙腈-水為流動相梯度洗脫，流速1.0mL/min，紫外檢測波長226nm。5種PAEs分離特異性好，在0.0210g/mL之間均具有較好的線性關(guān)系，檢出限在4.413.8ng/mL之間，高、中、低3水平的回收率均在79.5%102.0%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均在1.1%14%之

2、間。方法適用于肉制食品中鄰苯二甲酸酯類的檢測。關(guān)鍵詞：鄰苯二甲酸酯；高效液相色譜；肉制食品食品容器和包裝材料增塑劑包括鄰苯二甲酸酯類(PAEs)、己二酸酯類(AEs)等。增塑劑與塑料間并沒有嚴(yán)密的化學(xué)結(jié)合鍵，故很容易進(jìn)入環(huán)境。近年的研究表明：PAEs和AEs在體內(nèi)長期累積，可致畸、致癌和致突變1,2。因此，增塑劑的分析檢測受到重視，尤以PAEs為研究對象居多。目前，PAEs的檢測技術(shù)主要采用薄層色譜法3、氣相色譜法46、液相色譜法714、氣-質(zhì)聯(lián)用法15,16,樣品處理技術(shù)主要有液-液萃取3,8,14,15、固相萃取4,5,9,11,16以及固相微萃取6,7,12,15等,涉及的基體主要為PV

3、C塑料3,4,6,15、環(huán)境樣品(如水、泥土)5,8,13,16、組織和血漿7,8,10,15、食品12,14等。食品因直接被攝入而危害更大，報道過的研究對象主要包括：水產(chǎn)品、牛奶、食用油等。肉制食品的脂肪含量高，PAEs在其中的溶出程度尤為嚴(yán)重，但至今未見相關(guān)檢測方法報道。 本文以鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸正二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸正二辛酯(DOP)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)等5種PAEs為研究對象,建立了高效液相色譜法測定肉制食品中PAEs的方法。方法重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，可用于肉制食品中此類物質(zhì)的測定，也可用于生產(chǎn)企業(yè)的質(zhì)量控

4、制。1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 儀器與試劑 戴安P680C高效液相色譜儀，包括：P680型四元梯度泵，TCC-100型柱溫箱，ASI-100型自動進(jìn)樣器，UVD170U型紫外檢測器，Chromeleon色譜工作站；AB104-N型電子天平；XHF-D型高速分散器；SK-1型渦旋混勻器；DS180A型超聲波清洗機(jī)；Heraeus Primo R高速冷凍離心機(jī)；D10-12型氮?dú)獯祾邇x；Heal Force PW超純水系統(tǒng)。DEP、DBP、DEHP、DOP標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma-Aldrich)，BBP標(biāo)準(zhǔn)品(TCI)，乙腈(HPLC級)、正己烷(Fisher)，水為超純水。1.2 色譜條件 色譜柱：Phen

5、omenex Luna C18柱(250 mm×4.6mmi.d.，5m)；預(yù)柱：Phenomenex C18柱(4mm×3mm，5m)；紫外檢測波長；226nm；柱溫:35.0；進(jìn)樣體積20L；流動相：乙腈-水；流速：1.0mL/min；梯度洗脫，步驟如下表1所示。1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制分別稱取DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP標(biāo)準(zhǔn)品各0·0500g，分別用乙腈定容于50mL容量瓶中，配成1mg/mL的5種PAEs的儲備液。準(zhǔn)確移取5種PAEs的儲備液各100.0L，置于同一10mL容量瓶中，用V(乙腈)V(水)=7525的混合溶液定容,配成10.0g/mL

6、的混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液。再用水逐級稀釋，配成2.0、1.0、0.20、0.10、0.020、0.010g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液。1.4 樣品處理 準(zhǔn)確稱取已切碎的火腿腸0.5g于試管中，加入正己烷2mL，勻漿，渦旋振搖3min，超聲提取15min，在-10下10000r/min離心10min，取清液；同法再萃取1次，合并2次清液，45下氮?dú)饬鞔蹈桑靡译?.5mL溶解殘渣，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾后，進(jìn)樣。以生產(chǎn)日期不超過15天，距離表面1cm以上的內(nèi)層肉制品作為空白。2 結(jié)果與討論2.1 色譜條件的選擇 PAEs在205、226和272nm處有3個特征吸收峰，吸收強(qiáng)度依次增大，但272nm處雜

7、峰干擾較多，綜合考慮吸收強(qiáng)度及干擾因素，選擇226nm作為檢測波長。 以純乙腈作為流動相時，BBP和DBP、DEHP和DOP兩兩未能達(dá)到完全分離，增加流動相中水的含量，5種PAEs能完全分離，但DEHP和DOP 的出峰時間增長，當(dāng)以V(乙腈)V(水)=7525的流動相等度洗脫時，DOP的出峰時間超過了50min，故考慮采用梯度洗脫。在如表1所示條件下5種PAEs完全分離，出峰時間控制在22min之內(nèi)。2.2 樣品處理?xiàng)l件的選擇 肉制食品所含成分復(fù)雜，目前主要采用有機(jī)溶劑液相萃取。嘗試采用乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正己烷等溶劑，正己烷效果最好。因肉制食品含有大量油脂，在萃取PAEs過程中油

8、脂易被正己烷同時提取，對樣品測試產(chǎn)生干擾。考慮DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP的凝固點(diǎn)分別為： -40、-35、-35、-55、-25，而大部分油 脂尤其是肉制食品中的主要油脂動物脂肪，在-8以上即發(fā)生凝固，故在-10下高速冷凍離心，可除去大部分油脂，減少干擾14。2.3 特異性 圖1給出了一系列具有代表性的色譜圖。圖1(a)是空白肉制食品的色譜圖，可見盡管有生物雜質(zhì)的特征峰，但均不在5種PAEs出峰時間段，,對分析物不產(chǎn)生干擾；圖1(b)為5種PAEs的標(biāo)準(zhǔn)譜圖，濃度均為10.0g/mL。DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP的保留時間分別是4.605±0.00

9、5、7.968±0.005、8.730±0.007、20.166±0.012和21.078±0.007min；圖1(c)為加標(biāo)模擬樣的色譜圖，在圖中5種PAEs的特征峰能夠輕易準(zhǔn)確地識別；圖1(d)為一個出廠3個月的實(shí)際肉制食品的 色譜圖，其中檢出有DOP，含量為23.2ng/g。2.4 回歸方程及檢出限 取1.4所述的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，在選定的色譜條件下，依次進(jìn)樣，記錄色譜圖，每個濃度重復(fù)進(jìn)樣3次。分別以每種物質(zhì)的平均峰面積(y，mAU·min)對質(zhì)量濃度(，g/mL)作圖，得回歸方程及檢測限如表2所示。線性相關(guān)系數(shù)在0.99991.0

10、000之間，表明5種PAEs在0.0110g/mL范圍內(nèi)線性良好。在該條件下，基線噪聲為0·01mAU，以3倍信噪比(S/N)計算檢出限，結(jié)果如表2。2.5 回收率與精密度 取0·5g火腿腸3份，各加入10、1、0.1g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mL，即得添加量分別為1、0.1、0.01g的加標(biāo)模擬樣，按照1.5進(jìn)行樣品處理，每個加標(biāo)模擬樣重復(fù)測定5次，計算回收率和精密度，結(jié)果如表3所示，5種PAEs的高、中、低3水平的回收率均在79.5%102.0%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均在1.1%14%之間，表明該方法具有較好的回收率與精密度。其中DOP的回收率稍微偏低，原因可能是其凝固點(diǎn)相對較高，在冷凍離心過程中損失相對較大。2.6 樣品分析 選取同一廠家、同一批次的肉制食品火腿腸，采用本方法分析，測定5