口腔鱗狀細(xì)胞癌組織p73與p53基因表達(dá)及意義

1、口腔鱗狀細(xì)胞癌組織p73與p53基因表達(dá)及意義    作者：管宏偉,尚偉,楊學(xué)財(cái),岳金,賈暮云作者單位：青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科，山東 青島 266003                                 

2、60;                   【摘要】目的探討P73、P53蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)通用型兩步法檢測(cè)50例口腔鱗狀細(xì)胞癌病人的癌組織和癌旁正常組織中P73、P53蛋白表達(dá)。利用計(jì)算機(jī)圖像分析得出平均吸光度（AOD）并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 口腔鱗狀細(xì)胞癌組織P73、P53蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁組織（u=2.798、2.913，P<0.01）。P73

3、蛋白的表達(dá)與腫瘤T分期、腫瘤侵襲方式及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（r=0.288、0.327、0.374，P<0.05）；P53蛋白的表達(dá)與腫瘤病理分級(jí)、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（r=0.283、0.294，P<0.05）；口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中P73與P53蛋白的表達(dá)無明顯相關(guān)性（r=0.172，P>0.05）。結(jié)論 P73、P53可作為評(píng)估口腔鱗狀細(xì)胞癌生物學(xué)行為和預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】  癌,鱗狀細(xì)胞；口腔；基因,p73；基因,p53 THE EXPRESSIONS AND SIGNIFICANCE OF p73 AND p53 IN ORAL SQUAMOUS CEL

4、L CARCINOMAGUAN HONG-WEI, SHANG WEI, YANG XUE-CAI, et alDepartment of Oral and Maxillofacial Surgery, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China ABSTRACTObjective To study the relations between P73 and P53 expression and invasion as well as metastasis in ora

5、l squamous cell carcinoma （OSCC）. Methods The P73 and P53 were detected in carcinoma and non-carcinoma tissue that adjacent to carcinoma in 50 OSCC patients by immunohistochemistry method. The results were evaluated by computer-aided image and average optical density （AOD） analyzed statistically. Re

6、sults The expressions of P73 and P53 in OSCC were significantly higher than that in the adjacent tissue （u=2.798,2.913;P<0.01）. The expression of P73 was positively related with T satging, invasive pattern and regional lymph node metastasis （r=0.288,0.327,0.374;P<0.05）.The expression of P53 wa

7、s related with pathologic grading and regional lymph node metastasis （r=0.283,0.294;P<0.05）. The expression of P73 had no obvious correlation with P53 （r=0.172,P>0.05）.Conclusion The expression of P73 and P53 can be used as an independent parameter  in predicting the biological behavior a

8、nd prognosis of OSCC. KEY WORDS Carcinoma, squamous cell; Mouth; Gene, p53; Gene p73     p73基因作為p53基因家族的第一個(gè)成員，于1997年首先由KAGHAD等1發(fā)現(xiàn)。p73基因編碼的P73蛋白，在結(jié)構(gòu)和功能上均與P53蛋白具有很高的同源性1,2，且與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。因此，p73作為候選的抑癌基因，受到廣泛關(guān)注。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁組織中P53和P73蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，探討其在口腔鱗狀細(xì)胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移過程中的意義。 1  材料和方

9、法 1.1  病例選擇     選擇2005年1月2007年12月在我院口腔頜面外科手術(shù)治療的原發(fā)口腔鱗狀細(xì)胞癌病人50例，男34例，女16例；年齡2980歲，中位年齡62.5歲。其中舌癌24例，頰癌、牙齦癌、口底癌、腭癌、唇癌共26例。所有病例均行原發(fā)灶擴(kuò)大切除及頸淋巴清掃術(shù)，手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)石蠟固定、蘇木精-伊紅染色，常規(guī)病理檢查。按照UICC 2002年標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期3，T1 期17例，T2期 20例，T3 期9例，T4 期4例；病理分級(jí)：高分化28例，中、低分化22例。有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例，無轉(zhuǎn)移者30例。取其癌組織、癌旁正常組織（指腫瘤邊緣外

10、2.0 cm以上的黏膜組織）及頸清切除的頸淋巴結(jié)的石蠟標(biāo)本進(jìn)行研究。全部病例術(shù)前均未接受放療或化療。 1.2 主要試劑和儀器     鼠抗人P73和P53單克隆抗體（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；PV 6000二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒（Zymed公司，美國）；粘片劑APES（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；PBS磷酸緩沖液（濃度0.01 mmol/L，pH 7.27.4）；OLYMPUS顯微鏡（BH-2，日本）；Sample PCI圖像分析軟件（美國）。 1.3 免疫組織化學(xué)染色     存檔的蠟塊均經(jīng)病理檢查證實(shí)，用LEICA石蠟

11、切片機(jī)做4 m厚連續(xù)切片3張，1張作空白對(duì)照，2張行免疫組化染色。采用免疫組化通用型兩步法染色，參照試劑盒說明書進(jìn)行。用已知陽性切片做陽性對(duì)照，用緩沖液代替一抗做陰性對(duì)照。 1.4 結(jié)果判斷及圖像分析     以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒作為P73、P53陽性細(xì)胞。對(duì)切片進(jìn)行圖像分析。將病理切片放在100倍的顯微鏡下，觀察組織中各抗原的表達(dá)情況，然后在400倍的顯微鏡下隨機(jī)選取3個(gè)視野。將每個(gè)視野圖像攝入計(jì)算機(jī)，對(duì)圖像進(jìn)行裁剪，選定要測(cè)量的區(qū)域。將圖像分割，利用顏色的差異把“熱點(diǎn)”圖像與周圍的背景分開。對(duì)分割后的圖像進(jìn)行過濾和提取，然后由計(jì)算機(jī)對(duì)圖像進(jìn)行分析，得出結(jié)果。

12、用平均吸光度（AOD）值表示抗原的表達(dá)水平，切片陽性表達(dá)的強(qiáng)弱與AOD值呈正相關(guān)。 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理     結(jié)果應(yīng)用SPSS 13.0 For Windows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析?？谇话┡越M織與癌組織比較（方差不齊）采用Wilcoxon方法進(jìn)行檢驗(yàn)；口腔癌旁組織、高分化鱗狀細(xì)胞癌、中低分化鱗狀細(xì)胞癌（方差不齊）組織比較采用Mann-Whitney U方法進(jìn)行檢驗(yàn)；兩檢測(cè)指標(biāo)與臨床病理因素的關(guān)系及兩檢測(cè)指標(biāo)之間的關(guān)系采用Spearman相關(guān)分析。 2 結(jié)果 2.1  口腔鱗狀細(xì)胞癌組織與癌旁正常組織中P73、P53蛋白的分布   &#

13、160; 在癌旁正常黏膜中P73蛋白均陰性，P53蛋白大部分為陰性，僅少數(shù)病例基底層細(xì)胞核有弱陽性表達(dá)?？谇击[狀細(xì)胞癌P73與P53蛋白均定位于細(xì)胞核，少數(shù)可見胞漿弱陽性。染色分布形式不一，可出現(xiàn)在整個(gè)腫瘤區(qū)或腫瘤部分區(qū)域，胞核著色強(qiáng)度在不同病例之間或同一瘤體之內(nèi)均有差異。分化好的癌巢中，蛋白積聚常位于癌巢邊緣部分，中央部分的癌細(xì)胞染色陰性；分化較差的癌組織中，陽性細(xì)胞密集或彌散分布，陽性細(xì)胞數(shù)量較多。 2.2 癌旁正常組織、高分化鱗狀細(xì)胞癌、中低分化鱗狀細(xì)胞癌組織P73、P53的表達(dá)     口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中P73、P53的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，差異有極

14、顯著意義 （u=2.798、2.913，P0.01）。高分化鱗狀細(xì)胞癌組織P73的表達(dá)與中低分化鱗狀細(xì)胞癌比較，差異無顯著意義 （u=1.132，P0.05），但高分化鱗狀細(xì)胞癌或中低分化鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)卻明顯高于癌旁正常組織（u=2.716、3.070，P0.01）。P53的表達(dá)三者之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即中低分化鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯高于高分化鱗狀細(xì)胞癌（u=2.11，P0.05），高分化鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織（u=2.764，P0.01）。見表1。表1  口腔鱗狀細(xì)胞癌與癌旁正常組織P53、P73的表達(dá)（略） 2.3 口腔鱗狀細(xì)胞癌組織P73、P53的表

15、達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系     P73的表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌病人的性別、年齡、腫瘤生長部位、病理分級(jí)無明顯的相關(guān)性；與T分期、生長方式、淋巴結(jié)狀況呈明顯正相關(guān)。P53的表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌病人的性別、年齡、T分期、生長方式、生長部位無明顯的相關(guān)性；與病理學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)狀況呈正相關(guān)，見表2。表2  口腔鱗狀細(xì)胞癌組織P53、P73的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系（略）注：*P0.05，*P0.01 2.4 口腔鱗狀細(xì)胞癌P53、P73表達(dá)的相關(guān)性分析     口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中P73與P53的表達(dá)無明顯相關(guān)性（r=0.172，P&

16、gt;0.05）。 3 討 論      p53抑癌基因是細(xì)胞抑癌基因中研究最廣泛和深入的基因之一。p53基因位于人17號(hào)染色體短臂，分為野生型和突變型。野生型p53基因是一種腫瘤抑制基因，參與細(xì)胞的分化調(diào)控，并以基因調(diào)控方式阻抑癌基因的活動(dòng)，阻止異常染色體的形成。突變型p53基因表達(dá)則喪失抑癌功能，反而具有促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化的活性4，與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)5,6。p73基因的表達(dá)產(chǎn)物P73蛋白與P53蛋白功能相似，在序列上具有同源性，被認(rèn)為是候選的抑癌基因。P73蛋白對(duì)細(xì)胞生長和凋亡有雙重調(diào)節(jié)作用，與多種腫瘤有關(guān)。在多種人類腫瘤組織

17、中P73蛋白過表達(dá)，在正常組織中不表達(dá)7。     口腔鱗狀細(xì)胞癌具有較高的侵襲性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力，早期的診斷和治療具有重要的意義。有研究顯示，p73、p53基因在口腔某些腫瘤組織中具有較高水平的表達(dá)，p73還可能參與了癌細(xì)胞的生長與增殖8。本文結(jié)果顯示，P73在癌旁正常組織中表達(dá)的量很低，癌組織中的表達(dá)量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其表達(dá)在高分化鱗狀細(xì)胞癌與中低分化鱗狀細(xì)胞癌之間卻無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。P73表達(dá)同時(shí)還與腫瘤T分期及局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。 P73表達(dá)隨著腫瘤的增大、浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而不斷增高，說明了P73與口腔鱗狀細(xì)胞癌的體積大小及腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)

18、，很可能參與了癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移，對(duì)預(yù)測(cè)口腔腫瘤的生長發(fā)展及淋巴轉(zhuǎn)移具有一定的價(jià)值。這一結(jié)論與TANNAPFEL等9對(duì)肝細(xì)胞性肝癌的研究相一致。毛馳等10研究顯示，P53陽性表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌病人性別、年齡、腫瘤大小、發(fā)生部位、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均無直接關(guān)系，同時(shí)亦未得出其表達(dá)和預(yù)后之間的關(guān)系。而國外亦有報(bào)道認(rèn)為P53表達(dá)和臨床病理指標(biāo)之間無相關(guān)性，但是對(duì)于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人P53陽性表達(dá)提示預(yù)后差11。GEISLER等也得出P53是頭頸部腫瘤病人預(yù)后的因素之一的結(jié)論。本研究顯示，P53的表達(dá)與病人性別、年齡、腫瘤部位、T分期、生長方式均無關(guān)，與腫瘤病理分級(jí)、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正

19、相關(guān)性。說明P53蛋白與口腔鱗狀細(xì)胞癌的惡性程度及腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。     口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因相互作用的復(fù)雜過程，但癌基因、抑癌基因也有可能各自獨(dú)立發(fā)揮一定作用。本研究結(jié)果顯示，P73、P53蛋白陽性表達(dá)并無相關(guān)性。有人對(duì)頭頸鱗狀細(xì)胞癌組織中p53、p63、p73基因進(jìn)行直接DNA序列檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)p53基因頻發(fā)突變，而p63和 p73罕見突變。認(rèn)為當(dāng)p53基因發(fā)生突變時(shí)，p73、p63基因并不能取代p53基因的作用。因此，我們認(rèn)為p73、p53基因可作為評(píng)估口腔鱗狀細(xì)胞癌癌生物學(xué)行為和預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。 【參考文獻(xiàn)】   &#

20、160; 1KAGHAD M, BONNET H, YANG A, et al. Monoallelically expressed gene related to p53 at 1p36, a region frequently deleted in neuroblastoma and other human cancersJ. Cell, 1997,90（4）:809-819. 2SCHMALE H, BAMBERGER C. A novel protein with strong homology to the tumor suppressor p53J. Oncogene, 1997,

21、15（11）:1363-1367. 3SOBIN L H. TNM Classification of malignant tumors/UICCM. 6th ed.New York:Wily-Liss, 2002:185-188. 4MARX J. New tumor suppressor may rival p53J. Science, 1994,264（5157）:344-345. 5張順,相亭海,李玉軍. P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義J. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2006,42（2）:135-139. 6王雪鶴,樊希芬,王璇. P53蛋白在卵巢上皮腫瘤組織中的表達(dá)及意義J. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2006,42（3）：255-256 7高云,唐旭東,周克元. Np73的研究進(jìn)展J. 國外醫(yī)學(xué):臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè), 2005,28（8）:548-550. 8CRUZ I B, MEIJER C J, SNIJDERS P J, et al. p53 immunoexpression in non-malignant oral mucosa adjacent to oral squamous cell carcino