實驗二十、植株生長量的測定

1、實驗二十、植株生長量的測定指示植物在藥劑處理過的土壤中或混藥的水溶液中培 養(yǎng)一定時間后，測定植株的生長量，如禾本科植物可測量 葉子長度，闊葉植物可測量葉面積；或?qū)⒌厣喜糠智邢路Q 其鮮重。抑制光合作用的除草劑常用這類方法。1、去胚乳小麥幼苗法去胚乳小麥幼苗法也是上海植物生理研究所1964年建立的生測方法。這是一個測定抑制光合作用除草劑的專一方法， 與測定這類除草劑的其它生測方法（如番茄法、燕麥法） 相比，它具有操作簡便、測定周期短等優(yōu)點。選擇飽滿度一致的小麥，浸種2h后，排列在鋪有濕濾紙或紗布的搪瓷盤內(nèi)，在 20 C左右進行發(fā)芽。培養(yǎng)3-4天后苗高2-3cm，精選高度一致的幼苗，輕輕取出以免損傷

2、 根部，然后摘除胚乳，在水中漂洗后作為指示生物。以直徑4.5cm ,高5.0cm的小玻璃杯作為測定容器，每 杯放入不同濃度的藥液3ml和稀釋10倍的培養(yǎng)液6ml，每杯插入上述去胚乳小麥幼苗10株。在溫度2126C左右，光照下培養(yǎng)67天，測定小麥苗的株高，以株高抑制率來表示除草劑活性。培養(yǎng)液配方如下：硫酸銨3.2g磷酸二氫銨 2.25g硫酸鈣0.8g氯化鉀1.2g硫酸鎂1.2g微量元素0.01g其中微量元素組成為：硫酸亞鐵10g、 硫酸銅3g、 硫酸錳9g、 硼酸7g 硫酸鋅3g將上述配方加入 1L水中，使用時再稀釋 10倍。2、番茄法取20X 120mm的試管，編號。將供試藥劑用培養(yǎng)液稀釋成

3、一系列梯度濃度溶液，每只試管加入10mm。嚴格挑選生長健壯，大小高度一致的具2片真葉的番茄幼苗，將主根及子葉剪掉，稱鮮重后插入試管，每管24株，在漫射光照射下，25C左右培養(yǎng)2周，然后再取出稱重。培養(yǎng)期間 應(yīng)每天補加蒸發(fā)的水分。以生長抑制率來評價活性，求出 EC50，比較活性。生 長 抑 制 率 （）對照每株凈增重量對照每株凈增重量-處理每株凈增重量100番茄法適合于脲類及均三氮苯類光合作用抑制劑的生物測 定，方法靈敏，但培養(yǎng)周期較長，其間要每天補足水分， 比較麻煩。3、燕麥法 將土樣烘干。過 lmm 篩后。加入除草劑，使土壤水分 達到最大田間持水量的 60。取 200g 土裝人底部帶孔的玻

4、璃皿中，播種已催芽露白的燕麥種子10 12 粒，出苗后，定 8 株苗，每天從底部灌水，保持原來的重量，于光照下 培育 14d 后，測定植株地上部鮮重與干重，或幼齡葉片數(shù) 及第 2、3 葉片的重量，計算 IC50。本法適于測定均三氮苯類除草劑如阿特拉津、西瑪津 以及取代脲類除草劑的活性，淋溶及持效期等。前者靈敏度 0.05-0.1ppm，后者為 0.1-0.3ppm。此外，也可測定幼苗的含水量、水提取物的導(dǎo)電性及 中性水溶性物質(zhì)重量及其占干重的百分數(shù)。由于抑制光合作用除草劑引起植物蒸騰作用下降（氣 孔關(guān)閉引起的） ，而根系吸水不受影響，因此，在鮮重與干 重明顯下降之前，植物體內(nèi)含水量反倒明顯增加

5、。因此， 可用幼苗含水量作為生測指標一此類除草劑也使植株體內(nèi)中性水溶性物質(zhì)（碳水化合 物）的含量在干鮮重下降前明顯下降，因而可以測定中性 水溶性物質(zhì)（糖）的含量為生測指標，比測定干鮮重更為 靈敏。4、葉鞘滴注法Tarlor 和 Loader（ 1 984）為了篩選有效的防治野燕麥的除草 劑混劑，設(shè)計了一種快速，簡便的除草劑生測方法葉 鞘滴注法。當(dāng)正常生長的燕麥長至 1 葉 1 心時，在第一葉張開的葉鞘 里滴加10ul供試的一定濃度的除草劑。24-48h后，切下2cm長的一段，插入清水洋菜培養(yǎng)基。再經(jīng)24h （此時對照葉 片伸長約1113 mm）取出測量每一劑量處理的葉片延伸長 度，并評判除草劑

6、活性。5、蘿卜子葉法將蘿卜籽插入整濾紙的培養(yǎng)血中，加適量水，加蓋后 在27C培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng) 30h，從幼苗上切下子葉備用。 在盛有用磷酸鹽緩沖液配制的不同濃度的除草劑（510ml）溶液中放入10片大小均勻的子葉，加蓋后在25 27C 溫室或生長箱中。光照強度為 2 000 3000LX 的光照下連 續(xù)培養(yǎng) 3d 后。稱鮮重并測定葉綠素含量，計算 IC50。 本法適于測定觸殺性及影響氮代謝的除草劑。6、再生苗側(cè)重法。將生長均勻一致的 10 株香附子塊莖移植到盆缽中。 二 周后生長正常時， 分別用不同濃度的草甘磷處理香附子葉， 一周后剪除香附子莖葉（距上表 1cm）,再過一個月左右測 定再生苗的

7、鮮重，這樣可反映傳導(dǎo)性除草劑對地下部分再 生能力的抑制程度。 也可用玉米做試材，將玉米將播種在統(tǒng)一型號盆缽中，當(dāng) 幼苗 3 葉期時噴施草甘磷， 24 小時后剪去葉片，一周后測 定再生苗的鮮重，比較不同處理間的再生力。7、莖葉浸漬法：該法適用于莖葉處理劑的篩選和測定。方法是取一個底部帶孔的啤酒杯， 裝滿潮濕細土 （肥沃土壤較好） 后壓 實，再用塑料薄膜包住整個杯上并用橡皮筋扎緊，以防止倒置浸藥時杯中 土壤散落。其后在薄膜上沿杯邊緣戳若干孔穴。每穴播入2-3 粒供試植物種子并用土覆蓋好，然后從底部滲入水保持土壤濕潤。供試植物長至2-3葉期時進行間苗，每穴保苗 1 株苗。待植物長至需要大小時，進行浸

8、藥處 理。浸藥時間各處理之間力求一致。藥劑處理數(shù)天后可揭去薄膜。實驗二十二 殺菌劑保護作用和治療作 用的測定 本試驗法是屬于第二大類的試驗方法，是用病菌寄主植物 的葉片或果實來測定，比孢子萌發(fā)試驗法、抑制菌圈法、 生長速率法等更接近田間實際情況。 保護作用的測定原理是先在供試葉片或果實上噴供試藥 液，自然干燥后，在葉片或果實上接供試菌保濕培養(yǎng)一定 時間檢查結(jié)果。 治療作用的測定原理是先在供試葉片或果實上接供試菌保 濕培養(yǎng) 24 小時讓病菌侵入進去但還沒有表現(xiàn)出癥狀。 然后 噴灑供試藥液，藥液干燥后保濕培養(yǎng)一定時間檢查結(jié)果。 供試菌種 ：香蕉炭疽病菌（純培養(yǎng) 7 天） 供試藥劑 ：75%百菌清

9、WP： 1 000； 1 00ppm50%多菌靈 WP：1000； 100ppm 實驗材料 ：束針鑷子三角板燒懷量筒移液管蠟筆棉花保濕箱吸耳球小玻管0 5mm供試作物:香蕉果實（成熟度適中）操作方法:1 、香蕉的準備：從田間采摘大小老嫩一致的香蕉果實， 用清水洗凈涼干備用，可以使用乙烯利催熟。2 、供試菌餅的制備：用 $ 5mm勺滅菌小玻管打菌餅, 菌餅要完整無缺且不拖尾巴。3 、藥液的配制：4 、保護作用的測定：每支香蕉刺分上中下3個點（深淺一致，等距離），用束針刺傷香蕉的表皮，然后用鑷子夾棉花球沾取不同濃度藥液均勻涂抹在香蕉上，對照涂清水，自然涼干后，在刺傷部位接菌餅，（菌絲一面朝下，棉花

10、保濕），每處理接種3條香蕉，處理好后的香蕉四周放濕棉花 條，再放入保濕箱中保濕培養(yǎng)3-7天檢查結(jié)果。5 、治療作用的測定：每支香蕉分上中下3個點（深淺一致，等距離），用束針刺傷香蕉的表皮，然后在刺傷部位 接供試菌餅（菌絲一面朝下），四周放濕棉花條并放入保濕 箱中保濕培養(yǎng)24小時后，取出涼干，用鑷子夾棉花球沾取 不同濃度藥液均勻地涂在香蕉上，對照涂清水，待藥液干 后，再放在保濕箱中保濕培養(yǎng)3-7天，待對照全部發(fā)病即可檢查結(jié)果。結(jié)果檢查:I 、視察各種點發(fā)病情況，求發(fā)病率或量病斑直徑大小（十字交叉量僅平均值）再按分級標準計算發(fā)病嚴重度，根據(jù)發(fā)病率或病情指數(shù)求防治效果。發(fā)病點數(shù)100發(fā)病率（% =接種點Z （病級斑點數(shù)沃該病級值）100病情指數(shù)=接種點數(shù) 最咼級值防 治 效 果（%）對照組病指（發(fā)病率）對照組病指（發(fā)病率）-處理病指（發(fā)病率）匯00病斑分級標準:0級匕病斑直徑為01級匕病斑直徑在5mm