原藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

1、藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法建立1儀器與材料UV 1601紫外可見分光光度計(jì) (日本島津AB204-N 電子天平 (萬(wàn)分之一天平，METTLER TOLEDO BP211D 電子天平 （十萬(wàn)分之一天平，Sarlorius ） 葡萄糖 (分析純，天津市化學(xué)試劑一廠 苯酚 (分析純，天津市化學(xué)試劑一廠 蒽酮 分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司） 硫酸 (分析純，天津市凱信化學(xué)試劑有限公司當(dāng)歸藥材購(gòu)于甘肅岷縣，經(jīng)天津藥物研究院中藥現(xiàn)代研究部張鐵軍研究員鑒定為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(OlivDiels的干燥根，經(jīng)檢測(cè)符合中華人民共和國(guó)藥典（2010版）一部的有關(guān)規(guī)定。黃芪藥材購(gòu)于甘肅岷縣，

2、經(jīng)天津藥物研究院中藥現(xiàn)代研究部張鐵軍研究員鑒定為蒙古黃芪Astragalus membranaceus(FischBgeVar mongholicus (Bge.Hsiao的干燥根，經(jīng)檢測(cè)符合中華人民共和國(guó)藥典（2010版）一部的有關(guān)規(guī)定。2方法與結(jié)果2.1藥材中多糖含量測(cè)定方法本試驗(yàn)采用比色法對(duì)藥材中的多糖含量進(jìn)行測(cè)定，并建立了含量測(cè)定方法。精密稱取105干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品30.43mg ，置100ml 量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml 中含無(wú)水葡萄糖0.3043mg ）。分別取60干燥至恒重的當(dāng)歸及黃芪藥材細(xì)粉5份，每份約0.50g ，精密稱定，置索氏提取器

3、中，用80%乙醇回流提取2小時(shí)，殘?jiān)鼡]干溶劑后，再繼續(xù)以水分別回流提取1.0h 、2.0h 、3.0h 、4.0h 、5.0h ，反復(fù)洗至250ml 量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1ml ，置10ml 具塞干燥試管中，采用改良后的苯酚-硫酸法測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，結(jié)果見表1-1。表1-1 水提不同提取時(shí)間對(duì)當(dāng)歸含量測(cè)定的影響結(jié)果樣品 提取時(shí)間（h ）當(dāng)歸多糖含量（%）黃芪多糖含量（%）1 1.0 7.568 5.501 2 2.0 8.599 6.511 3 3.0 8.583 6.600 4 4.0 8.594 6.589 55.08.5806.590分別取60干燥至恒重的當(dāng)歸及黃芪藥材

4、細(xì)粉約0.5g ，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇回流提取1小時(shí)，殘?jiān)鼡]干溶劑后，再繼續(xù)以水回流提取2小時(shí)，反復(fù)洗滌殘?jiān)盁恐?50ml 量瓶中，定容至刻度，搖勻，備用。光譜掃描，最大吸收波長(zhǎng)為490nm ，確定選擇490nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。精密量取對(duì)照品溶液1.0ml ，2.0ml ，3.0ml ，4.0ml ，5.0ml ，6.0ml ，分別置50ml 量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液1ml ，置具塞試管中，分別加5苯酚溶液0.6ml ，混勻，迅速加入硫酸3.0ml ，搖勻，于90水浴中15分鐘，取出，置冰水浴中15分鐘，取出，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外可見分光光度法（附

5、錄VA ），在490nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，結(jié)果見表1-2。以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得回歸方程：y=0.0045x-0.0011，r=0.9995(n=6。葡萄糖在24.24145.44 g范圍內(nèi)，與吸光度呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見圖1-1。表1-2 葡萄糖線性范圍考察取樣量(g 吸光度 24.24 0.115 48.48 0.209 72.72 0.330 96.96 0.433 121.20 0.554 145.440.655 圖1-1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 Fig 1-1 Standard Curve of glucose精密量取同一供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方

6、法操作測(cè)吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，求得吸光度值的RSD 值為0.33%。結(jié)果見表1-3，說明儀器的精密度符合要求。表1-3 精密度試驗(yàn)結(jié)果測(cè)定次數(shù)吸光度A 1 0.387 2 0.386 3 0.389 4 0.388 5 0.386 6 0.386 RSD （%）0.33表1-4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果測(cè)定時(shí)間(min多糖含量（）0 8.491 10 8.380 20 8.602 30 8.447 40 8.647 50 8.624 60 8.536 90 8.491 120 8.513 RSD （%）1.02表1-5 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果樣品 多糖含量（%）1 8.710 2 8.895 3 8.505 4

7、 8.602 5 8.609 6 8.519 平均含量 8.640 RSD （%）1.68表1-6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果樣品取樣量（g ）樣品含量（mg ）對(duì)照品加入量（mg ）實(shí)測(cè)量（mg ）回收率（）平均回收率（）RSD （%）1 0.1242 10.70 10.56 20.97 97.25 2 0.1256 10.82 10.56 21.61 102.18 3 0.1257 10.83 10.56 21.33 99.43 99.12 1.96 4 0.1254 10.80 10.56 21.22 98.67 5 0.1255 10.81 10.56 21.39 100.19 60.1250

8、10.7710.5621.0196.97表1-7 當(dāng)歸藥材中多糖含量測(cè)定結(jié)果樣品 取樣量（g ） 多糖含量（）平均多糖含量（）1 0.2501 8.44 2 0.2498 8.54 8.58 30.25008.762.2 黃芪藥材中多糖含量測(cè)定方法表1-8 不同溶劑用量對(duì)含量測(cè)定的影響結(jié)果樣品 加水量（ml ）多糖含量（%）1 50 4.812 2 100 7.874 3 150 7.702 42007.774 圖1-2不同溶劑用量對(duì)含量測(cè)定的影響結(jié)果從表1-8和圖1-2可知，加水量為100ml 時(shí)，藥材含量達(dá)到最大值且保持恒定，故選擇加水量為100ml 。表1-9 不同提取時(shí)間對(duì)含量測(cè)定的影

9、響結(jié)果樣品 提取時(shí)間（h ）多糖含量（%）1 0.5 7.598 2 1.0 8.125 3 1.5 8.594 4 2.0 8.597 52.58.585 圖1-3 不同提取時(shí)間對(duì)含量測(cè)定的影響結(jié)果從表1-9和圖1-3可知，提取時(shí)間為1.5h 時(shí)，藥材含量達(dá)到最大值且保持恒定，延長(zhǎng)提取時(shí)間藥材含量變化不大，故選擇提取時(shí)間為1.5h 。表1-10 不同提取次數(shù)對(duì)含量測(cè)定的影響結(jié)果樣品 提取次數(shù)（次）多糖含量（%）1 1 7.869 2 2 8.750 3 3 10.130 4 4 9.973 559.702 圖1-4 不同提取次數(shù)對(duì)含量測(cè)定的影響結(jié)果從表1-10和圖1-4可知，次數(shù)對(duì)多糖提取有影響，隨著次數(shù)增加多糖含量上升，提取次數(shù)為三次時(shí)，藥材含量達(dá)到最大值且保持恒定，增加提取次數(shù)藥材含量變化不大，故選擇提取次數(shù)為三次。表1-11 葡萄糖線性范圍考察取樣量(g 吸光度A 32.60 0.158 65.20 0.312 97.80 0.426 130.40 0.573 1