藥物半數(shù)致死量有效量測(cè)定

1、Determination of 50% lethal (effective) dose of sodium pentobarbitaln應(yīng)用隨機(jī)、重復(fù)、對(duì)照的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則，進(jìn)行設(shè)計(jì)及測(cè)定藥物的質(zhì)反應(yīng)的量效關(guān)系。n掌握測(cè)定藥物半數(shù)有效量（50）和/或半數(shù)致死量（50）的方法、原理、實(shí)驗(yàn)步驟、計(jì)算過程及意義 。n測(cè)出藥物的50或50及相關(guān)參數(shù)，認(rèn)識(shí)生物個(gè)體差異及評(píng)價(jià)急性毒性大小的方法。1、掌握小白鼠半數(shù)致死量或半數(shù)有效量測(cè)定的基本方法。2、熟悉動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用的隨機(jī)分組和實(shí)驗(yàn)方法。3、掌握Bliss 法等半數(shù)致死量或半數(shù)有效量的計(jì)算方法。半數(shù)致死量（50Lethal dose，簡(jiǎn)寫為50）是指能夠?qū)?/p>

2、致50%實(shí)驗(yàn)對(duì)象死亡的藥物劑量。戊巴比妥鈉為鎮(zhèn)靜催眠藥，隨著劑量加大，相繼出現(xiàn)鎮(zhèn)靜、催眠催眠、抗驚厥、麻醉、死亡死亡。無效量無效量最最小小有有效效量量 常常 用用 量量最最小小中中毒毒量量中中毒毒量量致致死死量量死亡死亡致致死死量量劑劑量量效效應(yīng)應(yīng)無效量無效量無效無效最最小小有有效效量量治療作用治療作用常用量常用量安全范圍安全范圍極極量量毒毒性性作作用用最最小小中中毒毒量量中中毒毒量量質(zhì)反應(yīng)的量效曲線睡眠死亡反應(yīng)百分率020408060100劑量LD50ED50思考：何意？何用？思考：何意？何用？1 . LD50 /ED50的本質(zhì)的本質(zhì)2 . 治療指數(shù)（治療指數(shù)（TI）=LD50 /ED50F

3、ig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.n曲線中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)有50出現(xiàn)陽性結(jié)果（反應(yīng)）所需的劑量，如以死亡為指標(biāo)稱為半數(shù)致死量，如以某種效應(yīng)的有或無則為半數(shù)有效量（50Effective dose，50）表示。n50 /50為半數(shù)致死量與半數(shù)有效量的比值（倍數(shù)）稱為治療指數(shù)（therapeutic index，TI）。n一般而言，治療指數(shù)(TI)是表示藥物安全性的指標(biāo)。該數(shù)值越大，表明有效劑量與致死劑量 (或中毒劑量)間距離愈

4、大，愈安全，但只適用于治療效應(yīng)和致死效應(yīng)的量效曲線相互平行的藥物，對(duì)于兩種量效曲線不平行(斜率不同)的藥物，還應(yīng)參考安全范圍（margin of safety，MS），即ED95與LD5之間的距離或安全指數(shù)SI(SI= LD5ED95)來評(píng)價(jià)藥物的安全性。質(zhì)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，以對(duì)數(shù)劑量為橫坐標(biāo)、反應(yīng)百分率為縱坐標(biāo)繪圖，形成一條對(duì)稱的“S”形曲線。 半數(shù)有效量（ED50）：50的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有效時(shí)對(duì)應(yīng)的劑量。 半數(shù)致死量（LD50）：50的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡時(shí)對(duì)應(yīng)的劑量。藥物安全性的評(píng)價(jià) 治療指數(shù)（TI）= LD50/ED50 安全系數(shù)（SF） LD5/ED95 可靠安全系數(shù)（CSF） LD1/ED99 三者數(shù)

5、值大，說明藥物安全性好。n50：規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)記錄動(dòng)物的死亡數(shù)為指標(biāo)，記錄并統(tǒng)計(jì)動(dòng)物的死亡率。n50：以翻正反射消失作為判斷動(dòng)物睡眠的指標(biāo)。把受試小白鼠輕輕地置于仰臥位，如果在半分鐘內(nèi)不能翻正，即認(rèn)為小白鼠處于睡眠狀態(tài)。記錄并統(tǒng)計(jì)動(dòng)物睡眠發(fā)生率。n小鼠罩n重量稱n注射器（）及針頭n戊巴比妥鈉n苦味酸（標(biāo)記動(dòng)物號(hào)用） n預(yù)試：目的是找到0（min）和100（max）死亡的大致劑量范圍。給藥量：體重給藥量：體重。n正式實(shí)驗(yàn)：在此劑量范圍內(nèi)安排個(gè)對(duì)數(shù)劑量實(shí)驗(yàn)組，便于用對(duì)數(shù)劑量對(duì)死亡數(shù)百分率作圖和計(jì)算數(shù)據(jù)。本實(shí)驗(yàn)備有：50, 40 ,32, 五個(gè)劑量組(組間公比)；昆明小鼠120只雌雄各半雌雄各半。

6、每個(gè)同學(xué)做45個(gè)連續(xù)的濃度，每濃度一只小鼠。實(shí)施：n取小鼠50只（ 1822克 ）， 雌雄各半，不同性別動(dòng)物按體重隨機(jī)分成五組。每組各動(dòng)物稱重，標(biāo)記后分別按設(shè)計(jì)的容積和濃度腹腔注射給藥。50（或50 ）測(cè)定時(shí)是否要設(shè)對(duì)照組，應(yīng)視藥物性質(zhì)等情況而定。n必須注意：正式實(shí)驗(yàn)正式實(shí)驗(yàn)如單人操作時(shí)單人操作時(shí)宜從濃度偏高的劑量組開始給藥！起效快和對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)有重要提示作用。思考！思考！n記錄觀察時(shí)間內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的癥狀、死亡（或有效）時(shí)間。n整個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)記錄的事項(xiàng)： 日期、藥物名稱、批號(hào)及制藥單位、配藥的溶劑、藥液濃度、給藥途徑、給藥容積及給藥劑量、動(dòng)物名稱、性別及體重、實(shí)驗(yàn)時(shí)室溫、給藥時(shí)間、中毒癥狀及出現(xiàn)的時(shí)間

7、、死亡表現(xiàn)及時(shí)間、各組死亡率、計(jì)算所得的50 （或50 ）。n40mg/kg 組：(0.2 ml/10g )腹腔注射給藥515分鐘內(nèi)，出現(xiàn)翻正反射消失(睡眠)； 劑量 實(shí)驗(yàn)鼠數(shù) 睡眠鼠數(shù) 反應(yīng)百分率 ED50（mg/kg） （） （mg/kg） 50 10 40 10 32 10 25.6 10 21.8 10 不同劑量戊巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠的影響如增加記錄起效和維持時(shí)間，翻正反射消失的深度可獲得對(duì)量效關(guān)系和個(gè)體差異的更深刻認(rèn)識(shí)。 1. 本實(shí)驗(yàn)為定量藥物效價(jià)測(cè)定，要求較高的精確性，在實(shí)驗(yàn)過程中要求實(shí)驗(yàn)者做到盡可能的精確程度。2. 為了減少誤差，需嚴(yán)格控制除藥物劑量外的所有非處理因素，如最好由一人

8、給藥。3. 動(dòng)物種類、體重范圍、給藥途徑、實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間等因素對(duì)50及50的測(cè)定結(jié)果都有影響，在報(bào)告結(jié)果時(shí)都應(yīng)加以注明。 國際對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的3Rs原則： 即取代(Replacement)、精致(Refinement)和簡(jiǎn)約(Reduction)，要求生命科學(xué)研究應(yīng)采取其他手段代替動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法、減少動(dòng)物數(shù)量和痛苦，以符合道德方面的考量。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)三大原則：隨機(jī)、重復(fù)、對(duì)照 均衡隨機(jī)法分組：先按易控制的因素（性別、年齡、體重等）均衡分檔。 然后在每一檔隨機(jī)取出等量的動(dòng)物分配到各組，使難控制的因素（活潑程度、饑飽、疲勞程度等）得到隨機(jī)安排。n實(shí)驗(yàn)測(cè)定的戊巴比妥鈉ED50以及上述例子LD50有關(guān)數(shù)據(jù)求出：n治療指數(shù) TI LD50/ED50 n安全指數(shù) SI LD5/ED95 n 1ED50或LD50測(cè)定的原理是什么？2測(cè)定ED50或LD50有何意義？3為什么以前測(cè)定ED50或LD50時(shí)各組劑量常按等比級(jí)數(shù)安排？4藥物的ED50或LD50測(cè)定，新藥審批規(guī)定采用什么計(jì)算方法？為什么？n Bliss法又稱正規(guī)機(jī)率單位法或50正規(guī)法。Bliss法通過將反應(yīng)率轉(zhuǎn)化為機(jī)率單位，并進(jìn)行作業(yè)校正、加權(quán)直線回歸、逐步逼近，是目前計(jì)算50 最精確的方法。n使用Bliss法有許多優(yōu)點(diǎn)，如劑量設(shè)計(jì)不必按幾何級(jí)數(shù)，各組動(dòng)物數(shù)不必相等，最大劑量組死