梗阻性腎間質纖維化大鼠血流變及微循環(huán)研究

1、梗阻性腎間質纖維化大鼠血流變及微循環(huán)研究 10-08-25 11:00:00 編輯：studa20 作者：呂小燕，孫學剛，劉強，呂志平【摘要】 目的觀察單側輸尿管梗阻(UUO)致大鼠腎間質纖維化的血液流變學及微循環(huán)的變化特點，從絡病角度探討腎間質纖維化的中醫(yī)病機。方法 建立單側輸尿管梗阻致大鼠腎間質纖維化模型，觀察腎間質纖維化大鼠全血粘度150/s切變率、30/s切變率、5/s切變率、1/s切變率、紅細胞壓積、舌下及耳廓的脈絡變化，同時檢測腎纖維化指標、血清肌酐及尿素氮。結果腎間質纖維化模型組的全血粘度150/s切變率、30/s切變率、5/s切變率、1/s切變率、紅細胞壓積、透明質酸酶(HA)

2、、層粘連蛋白(LN)、型前膠原(PC)、IV型膠原(C IV)、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)與假手術組相比顯著升高;且腎纖維化指標(HA、LN、 PC、C IV)與全血粘度的各個切變率及紅細胞壓積呈顯著正相關。結論腎間質纖維化大鼠血流變及微循環(huán)的變化特點一定程度上反應了腎間質纖維化“絡脈瘀組”的中醫(yī)病機，為抗腎間質纖維化“活血通絡”的治療提供初步依據(jù)。 【關鍵詞】 腎間質纖維化; 血液流變學; 全血粘度; 紅細胞壓積Abstract：ObjectiveTo observe the changes of blood rheology and microcirculation in ren

3、al interstitial fibrosis and unilateral ureteral obstruction (UUO) . MethodsRat fibrosis models was established by unilateral ureteral obstruction. Hematocrit and blood viscosity at shear rate in 150/s, 30/s, 5/s, 1/s, renal fibrosis serum markers, serum creatinine and blood urea nitrogen were detec

4、ted respectively in sham operation and model group; microcirculation microscope was used to observe the thread of hypoglottis and auricle in rats. ResultsThe indexes of hematocrit, blood viscosity at different shear rate, hyaluronic acid (HA), laminin (LN), procolagen type (PC), collagen type (C), s

5、erum creatinine (SCr) and blood urea nitrogen (BUN) were increased significantly after fibrosis appeared, and there had positive correlation between blood viscosity at different shear rate, hematocrit and serum concentration of the fibrosis markers(HA，LN， PC，C IV). ConclusionThe tendency of blood rh

6、eological and microcirculation changes hint the pathogenesis of renal interstitial fibrosis including “blood- stasis blocking collaterals”. This may be one of the causes about using “promoting blood circulation to remove meridian obstruction” method to treat renal interstitial fibrosis.Key words：Ren

7、al interstitial fibrosis; Hemorheology; Blood viscosity; Hematocrit腎間質纖維化(RIF)是各種慢性腎臟疾病進展到終末期腎功能衰竭共有的病理改變1，隸屬于絡病學說中“腎絡病”的范疇，其形成的病理過程與絡病學說中的“久病入絡”相一致2,3。近來有關學者認為，血流變及微循環(huán)的異常變化是反映絡脈病變的主要客觀指標4,5。本文通過觀察UUO大鼠腎間質纖維化血流變及微循環(huán)的變化特點，擬從絡病角度闡述腎間質纖維化的中醫(yī)病機。1 材料與儀器1.1 動物SPF級SD大鼠16只，雌雄各半，體質量180200g, 由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供(合

8、格證號：NO 0038558)。1.2 試劑及儀器透明質酸、層粘連蛋白、III型前膠原、IV型膠原放免測試盒，上海海研醫(yī)學生物技術有限公司，批號20081201。GTM-STEELLEX R-80A血液流變儀，北京中勤世帝科學儀器有限公司;意大利愛康ECHO LCD全自動生化儀，意大利樂高特公司;olympus szx16體視顯微鏡，上海嘉儀信息科技有限公司;SN-682型放射免疫計數(shù)器，上海核福光電儀器有限公司。2 方法2.1 造模腎纖維化模型組(以下簡稱：模型組)大鼠于9 Am以水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉，取左側腹腎區(qū)切口,用眼科鑷分離左側輸尿管,用5號手術線,在腎盞處和腎下極

9、處分別結扎輸尿管,但并不離斷輸尿管,并保護好腎包膜及周圍組織,術后把腎置于原位,逐層縫合腹膜、肌肉、皮膚;假手術組：除不結扎輸尿管外,其余步驟與模型組相同;術中嚴格遵守無菌操作。模型及假手術組大鼠均予普通飼料，自由飲水，共5周。2.2 動物分組SPF級SD大鼠16只隨機均分為兩組：假手術組和模型組。2.3 舌下、耳廓脈絡圖像采集造模期滿前1天20：00時，動物禁食，于次日8：00時用10%水合氯醛腹腔麻醉，取仰臥位,用鑷子輕輕夾住大鼠舌尖從左輕輕拉出,直至露出舌根部,使整個舌體與大鼠軀干成直線或有小于15的夾角，用80倍的體視顯微鏡觀察舌下脈絡;后取側臥位，將左側耳廓置于“耳托”上，呈平面展開

10、，再用80倍的體視顯微鏡觀察耳廓背側脈絡;所有采集圖像導入聯(lián)想電腦，采用ACDsee v3. 2和windows圖片和傳真查看器看圖軟件查看。2.4 指標檢測圖像采集完畢后，剖開腹腔，取左側腎組織用中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，HE染色，光鏡下觀察腎組織細胞的病理改變及腎間質纖維的增生程度，并參照文獻6制定膠原纖維增生程度半定量標準;腹主動脈采血，用真空負壓抗凝采血管收集：取0.8 ml的全血用GTM-STEELLEX R-80A血液流變儀測定不同切變率的全血粘度;取1 ml的全血用10 cm長的普通壓積管，離心15 min 3 000 r/min測定紅細胞壓積;剩余全血室溫靜置1.5 h，2

11、500 r/min，4C離心15 min，取上層血清，分裝于離心管中;用ECHO LCD全自動生化分析儀測定血清SCr、BUN;用SN-682型放射免疫r計數(shù)器測定血清HA、LN、PC、CIV(按試劑說明書進行)。2.5 統(tǒng)計方法上述各項指標以均數(shù)標準差表示，用統(tǒng)計軟件SPSS11.5進行獨立樣本t檢驗、雙變量相關分析、Kruskal-Wallis H及Mann-Whitney U非參數(shù)檢驗。3 結果3.1 動物生存狀態(tài)觀察模型組大鼠皮毛略枯槁、干澀，喜靜少動，動作遲緩;假手術組大鼠皮毛濃密、光潔，體態(tài)正常;體質量日漸增加。兩組大鼠存活良好。3.2 大鼠舌下、耳廓脈絡的變化見圖12。模型組大鼠舌質紫暗舌下脈絡紫黑增粗;耳廓潤澤、脈絡增粗，略曲張。假手術組大鼠舌質鮮紅潤澤舌下脈絡清晰可見;耳廓潤澤、脈絡清晰。3.3 腎功(SCr、BUN)的變化 見表1