微生物實驗室培養(yǎng)基的管理

1、主要內容n培養(yǎng)基的訂購和接收培養(yǎng)基的訂購和接收n培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備n培養(yǎng)基的測試培養(yǎng)基的測試n培養(yǎng)基的儲存培養(yǎng)基的儲存訂購訂購n根據(jù)實驗室培養(yǎng)基清單所列存貨量、根據(jù)實驗室培養(yǎng)基清單所列存貨量、實驗室日常用量、供應商提供的到實驗室日常用量、供應商提供的到貨期來確定定貨日及定貨量貨期來確定定貨日及定貨量n只能使用實驗程序所列的培養(yǎng)基只能使用實驗程序所列的培養(yǎng)基;若若實驗程序未列出，培養(yǎng)基則用知名實驗程序未列出，培養(yǎng)基則用知名公司的產(chǎn)品公司的產(chǎn)品接收接收n在培養(yǎng)基容器上標記：在培養(yǎng)基容器上標記：接收日期、到期日、接收日期、到期日、培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基名稱 n儲藏儲藏 大部分培養(yǎng)基、大部分培養(yǎng)基、藥

2、品及試劑應保存在藥品及試劑應保存在干燥、陰暗處，溫度干燥、陰暗處，溫度在在15-25之間，有之間，有些需要儲藏在些需要儲藏在2-8的冰箱內，具體操作的冰箱內，具體操作要按照培養(yǎng)基說明要按照培養(yǎng)基說明n每種培養(yǎng)基儲藏柜建立說明并記錄以下信息：每種培養(yǎng)基儲藏柜建立說明并記錄以下信息：培養(yǎng)基名稱，批號，規(guī)格數(shù)量，有效期，到貨培養(yǎng)基名稱，批號，規(guī)格數(shù)量，有效期，到貨日期，驗收日期，存放地點，儲存條件日期，驗收日期，存放地點，儲存條件n根據(jù)根據(jù)“先入先出先入先出”原則，按到期日早晚排列，原則，按到期日早晚排列，保證保證培養(yǎng)基保持新鮮及更新培養(yǎng)基保持新鮮及更新n開封超過一年的培養(yǎng)基視為過期培養(yǎng)基要處理開封

3、超過一年的培養(yǎng)基視為過期培養(yǎng)基要處理掉掉培養(yǎng)基入庫登記表培養(yǎng)基入庫登記表2.培養(yǎng)基的制備n培養(yǎng)基的準備和滅菌及分裝應分別在單獨的區(qū)培養(yǎng)基的準備和滅菌及分裝應分別在單獨的區(qū)域進行，按實驗規(guī)程和說明進行并根據(jù)日常用域進行，按實驗規(guī)程和說明進行并根據(jù)日常用量及保存期確定制備量。量及保存期確定制備量。n每次準備和滅菌都要在每次準備和滅菌都要在配置記錄表配置記錄表上記錄以下上記錄以下信息：配置日期，名稱，廠家，批號，使用量，信息：配置日期，名稱，廠家，批號，使用量，配置量，配置量，配置前后配置前后pH,滅菌鍋編號，滅菌要求，滅菌鍋編號，滅菌要求，操作人，備注操作人，備注 培養(yǎng)基配置記錄培養(yǎng)基配置記錄制備

4、前的準備工作 n仔細閱讀使用方法，包括是否需要燒開、仔細閱讀使用方法，包括是否需要燒開、滅菌、及添加劑，根據(jù)單位用量計算出滅菌、及添加劑，根據(jù)單位用量計算出需稱重量需稱重量n水水 要使用純化水，如經(jīng)蒸餾、去離子或要使用純化水，如經(jīng)蒸餾、去離子或反滲透得到的水，應符合環(huán)境保護局反滲透得到的水，應符合環(huán)境保護局（EPA）中關于飲用水的標準，每周對）中關于飲用水的標準，每周對其定期進行微生物和化學評估其定期進行微生物和化學評估n用帶磁力攪拌的加熱板、用帶磁力攪拌的加熱板、沸水浴或流動蒸汽來加沸水浴或流動蒸汽來加熱以防燒焦或沸出，加熱以防燒焦或沸出，加熱時要保證磁力棒在攪熱時要保證磁力棒在攪動動n器皿

5、和容器器皿和容器 使用硅酸硼使用硅酸硼玻璃、不銹鋼、鋁或別玻璃、不銹鋼、鋁或別的耐腐蝕材料，其容積的耐腐蝕材料，其容積至少要比所準備的培養(yǎng)至少要比所準備的培養(yǎng)基的體積大基的體積大10%n配制時先用半量的水將之充分振蕩混勻配制時先用半量的水將之充分振蕩混勻,再加入再加入剩余的水并洗掉粘在壁上的殘余剩余的水并洗掉粘在壁上的殘余n所有培養(yǎng)基都是熱敏感的所有培養(yǎng)基都是熱敏感的,不要加熱超時不要加熱超時n培養(yǎng)基不含明膠或瓊脂的應用冷水或僅需微熱培養(yǎng)基不含明膠或瓊脂的應用冷水或僅需微熱來溶解來溶解 n培養(yǎng)基含明膠或瓊脂的必須加熱至完全溶解培養(yǎng)基含明膠或瓊脂的必須加熱至完全溶解,用用沸水浴或流動蒸汽來加熱沸

6、水浴或流動蒸汽來加熱 n滅菌之前要檢查是否滅菌之前要檢查是否完全溶解完全溶解,是否有瓊脂顆粒是否有瓊脂顆粒粘壁粘壁 滅菌滅菌n滅菌前貼上滅菌條，標滅菌前貼上滅菌條，標上批號，填寫滅菌記錄上批號，填寫滅菌記錄表表n擰松蓋或塞以防溢出擰松蓋或塞以防溢出n高壓蒸汽滅菌通常溫度高壓蒸汽滅菌通常溫度為為121，時間一般為，時間一般為（按裝培養(yǎng)基的容器容（按裝培養(yǎng)基的容器容積）：積）：1-100ml 15分分鐘鐘;100ml-1l 25分鐘分鐘;1l 30分鐘分鐘;管狀設備及過濾管狀設備及過濾漏斗漏斗 30分鐘分鐘;干物干物 60分分鐘鐘 具體時間及溫度應該具體時間及溫度應該查看使用說明及時間查看使用說明

7、及時間/體體積表積表n一個滅菌周期完成后，小心打開滅菌鍋門使培一個滅菌周期完成后，小心打開滅菌鍋門使培養(yǎng)基冷卻養(yǎng)基冷卻5-105-10分鐘再拿出分鐘再拿出n已滅菌培養(yǎng)基在蓋子擰緊后放入恒溫水浴鍋中已滅菌培養(yǎng)基在蓋子擰緊后放入恒溫水浴鍋中（一般為（一般為5055）n滅菌后培養(yǎng)基滅菌后培養(yǎng)基pH的調整：使培養(yǎng)基冷卻至的調整：使培養(yǎng)基冷卻至25，取單位體積的培養(yǎng)基，用取單位體積的培養(yǎng)基，用pH計測試并用計測試并用1mol/l的的HCl或或1mol/l的的NaOH調至培養(yǎng)基要求的調至培養(yǎng)基要求的pH范范圍，再根據(jù)添加的酸或堿的量來計算校正全部圍，再根據(jù)添加的酸或堿的量來計算校正全部同種培養(yǎng)基的同種培養(yǎng)

8、基的pHn培養(yǎng)基培養(yǎng)基不能重復滅菌不能重復滅菌滅菌記錄滅菌記錄培養(yǎng)基使用登記表培養(yǎng)基使用登記表倒平板和分裝n應在無菌工作臺中進行應在無菌工作臺中進行n倒平板時的溫度倒平板時的溫度 45-5545-55之間之間, ,以防在蓋以防在蓋上形成蒸汽上形成蒸汽 ；瓊脂溫度；瓊脂溫度不對可導致培養(yǎng)基水過不對可導致培養(yǎng)基水過度蒸發(fā)而導致培養(yǎng)基收度蒸發(fā)而導致培養(yǎng)基收縮和凝結縮和凝結n分裝用的瓶子或試管的體積應該是所分裝培養(yǎng)基的分裝用的瓶子或試管的體積應該是所分裝培養(yǎng)基的1.51.5倍以上倍以上 n含熱敏感成分添加劑的培養(yǎng)基，其熱敏感成分用含熱敏感成分添加劑的培養(yǎng)基，其熱敏感成分用0.450.45的濾膜來過濾除

9、菌，并在培養(yǎng)基冷卻到的濾膜來過濾除菌，并在培養(yǎng)基冷卻到5050后才能加后才能加入入 n已凝的瓊脂培養(yǎng)基不能放在加熱板上直接加熱，微波已凝的瓊脂培養(yǎng)基不能放在加熱板上直接加熱，微波爐或水浴可用來再熔化已凝的瓊脂培養(yǎng)基，注意加熱爐或水浴可用來再熔化已凝的瓊脂培養(yǎng)基，注意加熱前要擰松蓋子前要擰松蓋子 n培養(yǎng)基培養(yǎng)基不能重復熔化不能重復熔化，這會破壞其成分并增加污染機，這會破壞其成分并增加污染機會會 n已滅菌的、熔化的培養(yǎng)基要放在已滅菌的、熔化的培養(yǎng)基要放在50恒溫水浴中冷卻恒溫水浴中冷卻并在并在6 6小時內分裝小時內分裝 n平板凝固后倒置平板進行培養(yǎng)和貯存，平板凝固后倒置平板進行培養(yǎng)和貯存，TBGT

10、BG等分裝后要等分裝后要放冰箱放冰箱 n象象BSBS等有沉淀的培養(yǎng)基倒平板時注意振蕩使之濁度均等有沉淀的培養(yǎng)基倒平板時注意振蕩使之濁度均一一 n平板上的氣泡可用本生燈焰輕輕加熱除去平板上的氣泡可用本生燈焰輕輕加熱除去 n平板上的水可造成微生物蔓延和菌落液化平板上的水可造成微生物蔓延和菌落液化, ,可在可在30-30-4040恒溫箱中除去恒溫箱中除去 npH6.0以下的酸性培養(yǎng)基配制時要在溫和條件下，因為以下的酸性培養(yǎng)基配制時要在溫和條件下，因為加熱可造成瓊脂和明膠分解加熱可造成瓊脂和明膠分解;若已造成分解可按若已造成分解可按5.0克克/升瓊脂來補充升瓊脂來補充 n平板架每次使用后用純水沖洗，平

11、板架每次使用后用純水沖洗，紫外燈紫外燈照射殺菌照射殺菌無菌實驗 無菌實驗是為了說明培養(yǎng)基被正無菌實驗是為了說明培養(yǎng)基被正確地滅菌，保證在實驗中出現(xiàn)的確地滅菌，保證在實驗中出現(xiàn)的污染不是由不正確的滅菌而來污染不是由不正確的滅菌而來n肉湯要肉湯要37培養(yǎng)培養(yǎng)24小時觀察無菌后才能使用小時觀察無菌后才能使用 n倒平板后要培養(yǎng)倒平板后要培養(yǎng)24小時觀察無菌后才能使用：小時觀察無菌后才能使用：細菌板放細菌板放37培養(yǎng)箱，真菌板放培養(yǎng)箱，真菌板放2828培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱 n裝在試管中的培養(yǎng)基培養(yǎng)裝在試管中的培養(yǎng)基培養(yǎng)2424小時后若發(fā)現(xiàn)有小時后若發(fā)現(xiàn)有長菌，則該批培養(yǎng)基要長菌，則該批培養(yǎng)基要滅菌后滅菌后扔掉扔

12、掉n在倒平板的同時倒一在倒平板的同時倒一定數(shù)目的平板作為空定數(shù)目的平板作為空白對照，并在該批平白對照，并在該批平板將被使用的溫度和板將被使用的溫度和時間下培養(yǎng)，直到該時間下培養(yǎng)，直到該批平板用完，記錄其批平板用完，記錄其陽性率陽性率n若使用培養(yǎng)基來做傾若使用培養(yǎng)基來做傾注平板實驗，要同時注平板實驗，要同時用所有培養(yǎng)基倒一個用所有培養(yǎng)基倒一個空白板空白板作培養(yǎng)作培養(yǎng) 陰陽性對照 取樣量應為總平板、試管或瓶子取樣量應為總平板、試管或瓶子數(shù)的數(shù)的1-2%，用，用ATCC菌種接種菌種接種并應產(chǎn)生預期效果并應產(chǎn)生預期效果生長能力測試 n每種培養(yǎng)基都要測試其支持、鑒每種培養(yǎng)基都要測試其支持、鑒別或抑制適當

13、菌的能力別或抑制適當菌的能力n對完全培養(yǎng)基可根據(jù)實驗室情況對完全培養(yǎng)基可根據(jù)實驗室情況選用不同類型的代表種選用不同類型的代表種; ;對選擇、對選擇、鑒別培養(yǎng)基應選擇最能顯示其特鑒別培養(yǎng)基應選擇最能顯示其特征的微生物征的微生物 生長能力測試測試方法測試方法 n接種能產(chǎn)生接種能產(chǎn)生10-10010-100個菌落的已知微個菌落的已知微生物的生物的2424小時培養(yǎng)物小時培養(yǎng)物 n接種接種1010-3-3稀釋度的已知微生物的稀釋度的已知微生物的2424小時培養(yǎng)物小時培養(yǎng)物n具體的選擇應根據(jù)具體實驗室條件具體的選擇應根據(jù)具體實驗室條件來定來定, ,微生物應用微生物應用ATCCATCC菌種菌種 只有培養(yǎng)基其

14、只有培養(yǎng)基其pH在正確的范圍內在正確的范圍內,通過了無菌實驗及生長測試通過了無菌實驗及生長測試,各各種對照合格種對照合格,才能使用才能使用;若其中若其中任任意一項意一項不成立不成立,就沒有達到實驗就沒有達到實驗室能使用的標準而不能使用室能使用的標準而不能使用n若實驗室的實驗與測試培養(yǎng)基的實若實驗室的實驗與測試培養(yǎng)基的實驗同時進行驗同時進行, ,而培養(yǎng)基未達標而培養(yǎng)基未達標, ,那么那么所有的微生物實驗將用合格的培養(yǎng)所有的微生物實驗將用合格的培養(yǎng)基重新進行基重新進行 n若培養(yǎng)基實驗失敗，要檢查滅菌記若培養(yǎng)基實驗失敗，要檢查滅菌記錄和無菌操作記錄，找出失敗原因錄和無菌操作記錄，找出失敗原因儲藏前要

15、做好標記：準備日期或接收日儲藏前要做好標記：準備日期或接收日期、名稱、貨架期期、名稱、貨架期 成品培養(yǎng)基 n具體保藏方法按制造商說明，具體保藏方法按制造商說明，若無特別說明，一般保藏在陰若無特別說明，一般保藏在陰涼、干燥、蔽光處涼、干燥、蔽光處 脫水培養(yǎng)基 大部分培養(yǎng)基應保存在干燥、陰大部分培養(yǎng)基應保存在干燥、陰暗處，溫度在暗處，溫度在15-25之間，有之間，有些需要儲藏在些需要儲藏在2-8的冰箱內，的冰箱內，具體操作要按照制造商的建議具體操作要按照制造商的建議 實驗室制備的培養(yǎng)基 n培養(yǎng)基只有在貨架期內才能較好地支持培養(yǎng)基只有在貨架期內才能較好地支持微生物的生長，不能使用超過貨架期的微生物的

16、生長，不能使用超過貨架期的培養(yǎng)基培養(yǎng)基n貨架期可通過以下實驗來定貨架期可通過以下實驗來定: :在一定時間在一定時間和儲存條件下和儲存條件下, ,接種一定濃度的標準菌于接種一定濃度的標準菌于供試培養(yǎng)基上供試培養(yǎng)基上, ,計算其恢復率計算其恢復率( (在其上生在其上生長菌落數(shù)與新鮮的剛制備好的培養(yǎng)基上長菌落數(shù)與新鮮的剛制備好的培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)的比值生長的菌落數(shù)的比值),),制備日至恢復率制備日至恢復率70%70%的日期就是其貨架期的日期就是其貨架期實驗室制備的培養(yǎng)基及試劑（續(xù)）n以上是指非選擇性培養(yǎng)基，在選擇性培養(yǎng)以上是指非選擇性培養(yǎng)基，在選擇性培養(yǎng)基上即使是目標微生物其恢復率也是很低基上即使是目標微生物其恢復率也是很低的的n影響貨架期的因素主要有影響貨架期的因素主要有:配方和包裝方式、配方和包裝方式、儲藏溫度、光線、脫水和污染儲藏溫度、光線、脫水和污染 n瓶裝培養(yǎng)基和肉湯大多數(shù)情況下（除非另瓶裝培養(yǎng)基和肉湯大多數(shù)情況下（除非另外說明）儲存在外說明）儲存在2-8，在松蓋的情況下保，在松蓋的情況下保質期為一個月，擰緊蓋子則可以保存三個質期為一個月，擰緊蓋子則可以保存三個月；室溫下即使擰緊蓋子也只能保存月；室溫下即使擰緊蓋子也只能保存1-21-2