表觀遺傳修飾腫瘤細(xì)胞疫苗皮下注射對(duì)倉(cāng)鼠胰腺癌的抗腫瘤效應(yīng)

1、山東醫(yī)藥2015年第55卷第43期表觀遺傳修飾腫瘤細(xì)胞疫苗皮下注射對(duì)倉(cāng)鼠胰腺癌的抗腫瘤效應(yīng)張海峰1,2,曹維2,周?chē)?guó)雄2,陳海琴2,陳衛(wèi)昌1(1蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院,江蘇蘇州215006;2南通大學(xué)附屬醫(yī)院)摘要:目的觀察表觀遺傳修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗皮下注射后對(duì)倉(cāng)鼠胰腺癌皮下移植瘤的抗腫瘤效應(yīng)。方法通過(guò)皮下注射N(xiāo)-亞硝基雙-2-氧丙基建立倉(cāng)鼠胰腺癌模型,將倉(cāng)鼠胰腺腫瘤取出、切碎,取0.5cm×0.5cm×0.5cm的腫瘤組織移植在健康倉(cāng)鼠的腹股溝皮下,建立倉(cāng)鼠皮下移植瘤模型。采用組蛋白去乙?；敢种苿┖图谆D(zhuǎn)移酶抑制劑表觀遺傳修飾胰腺癌PANC-1細(xì)胞,構(gòu)建腫瘤細(xì)胞疫苗,同

2、時(shí)構(gòu)建對(duì)照細(xì)胞疫苗。將12只荷移植瘤倉(cāng)鼠隨機(jī)分為疫苗注射組和對(duì)照組(各6只),疫苗注射組皮下注射腫瘤細(xì)胞疫苗,對(duì)照組皮下注射對(duì)照細(xì)胞疫苗。荷移植瘤倉(cāng)鼠于第4周統(tǒng)一處死,觀察兩組腫瘤生長(zhǎng)情況及瘤組織中環(huán)氧合酶2(COX-2)、5脂氧合酶(5-LOX)、半乳凝素1(GAL-1)、半乳凝素3(GAL-3)、主要組織相容性復(fù)合體(MHC)、MHC的表達(dá)變化。結(jié)果疫苗注射組移植瘤大小隨時(shí)間延長(zhǎng)呈遞減趨勢(shì),對(duì)照組移植瘤大小隨時(shí)間延長(zhǎng)呈遞增趨勢(shì);疫苗治療組腫瘤大小平均為0.39cm、對(duì)照組為0.82cm,兩組相比,P<0.05;疫苗注射組移植瘤組織中COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3的表達(dá)

3、較對(duì)照組降低,而MHC、MHC表達(dá)較對(duì)照組升高,兩組相比,P均<0.01。結(jié)論表觀遺傳修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗皮下注射能有效延緩倉(cāng)鼠胰腺癌移植瘤的生長(zhǎng),降低移植瘤組織中COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3的表達(dá),上調(diào)MHC、MHC的表達(dá)。關(guān)鍵詞:胰腺腫瘤;胰腺癌;胰腺癌PANC-1細(xì)胞株;腫瘤細(xì)胞疫苗;表觀遺傳修飾;免疫逃逸;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.007中圖分類(lèi)號(hào):R576文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1002-266X(2015)43-0020-04Anti-tumoreffectsoftumorcellvaccinebyepi

4、geneticmodificationonpancreaticcancerofhamsterZHANGHai-feng1,CAOWei,ZHOUGuo-xiong,CHENHai-qin,CHENWei-chang(1TheFirstAffiliatedHospitalofSoochowUniversity,Soochow215006,China)Abstract:ObjectiveToobservetheanti-tumoreffectsoftumorcellvaccinebyepigeneticmodificationonpancreaticcancerofhamsterthroughsu

5、bcutaneousinjection.MethodsThehamsterpancreaticcancermodelsweresetupbysubcu-taneousinjectionofN-nitrosobis-2-oxopropylamin.Weremovedthepancreatictumor,chopped,andtook0.5cm×0.5cmtumormodelsweresetup.Inaddition,PANC-1cellsweretreatedbyhistonedeacetylaseinhibitorsandmethyltransferaseinhibitorepige

6、neticmodificationtomakethetumorcellvaccine.Meanwhile,thecontrolcellvaccinewassetup.Twelvehamsterpancreaticcancerxenograftsweredividedintotwogroups,6ineachgroup:thevaccinatedgroupandthecontrolgroupwhichwererespectivelytreatedwithtumorcellvaccineandcontrolcellvaccinebysubcutaneousinjection.Thetumorgro

7、upswereobserved.Results×0.5cmtumortissuetotransplantintogroinskinofhealthyhamsters,andthenthehamstersubcutaneoustransplantedgrowthandtheexpressionofcyclooxygenase-2(COX-2),5-LOX,GAL-1,GAL-3,MHCandMHCofthetwoprolongedtime,butinthecontrolgroup,thetumorsize(meansize0.82cm)wasincreasedwiththeprolon

8、gedtime.Inthevaccinatedgroup,thetumorsize(meansize0.39cm)wasdecreasedwiththeTumorsizewasstatisticaldifferentbetweenthetwogroups(P<0.05).TheexpressionofCOX-2,5-LOX,GAL-1andGAL-3waslowerinthevaccinatedgroupascomparedwiththatofthecontrolgroup,andMHC,MHCexpressionwashigherthanthatofthecontrolgroup,th

9、edifferencewasstatisticallysignificant(allP<0.01).ConclusionTheepige-LOX,GAL-1andGAL-3,andup-regulatetheexpressionofMHCandMHC.neticmodificationtumorvaccinecaneffectivelydelaythegrowthoftransplantedtumor,reducetheexpressionofCOX-2,5-基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81072028);江蘇省創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)醫(yī)學(xué)領(lǐng)軍人才項(xiàng)目(LJ201135)。第一作者簡(jiǎn)介:張海峰(

10、1974-),男,博士在讀,副主任醫(yī)師,主要研究方向?yàn)橐认偌膊?。E-mail:zhanghaifeng740702通信作者簡(jiǎn)介:陳衛(wèi)昌(1962-),男,博士,教授,主任醫(yī)師,主要研究方向?yàn)橐认偌膊?。E-mail:weichangchen20山東醫(yī)藥2015年第55卷第43期Keywords:pancreaticneoplasms;pancreaticcarcinoma;pancreaticcarcinomacelllinePANC-1;tumorvaccine;epigeneticmodification;immuneescape;animalexperiment胰腺癌對(duì)放療、化療均不敏感。

11、以腫瘤疫苗為基礎(chǔ)的主動(dòng)免疫治療,由于其高效和安全的特點(diǎn)而成為近來(lái)研究的熱點(diǎn)1,2。腫瘤疫苗利用腫瘤細(xì)胞機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)能力,抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,以達(dá)到治療腫瘤的目的。對(duì)腫瘤患者免疫系統(tǒng)本身來(lái)講,即使腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)特異性抗原,仍不或腫瘤抗原物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體的特異性免疫反應(yīng),增強(qiáng)1.3表觀遺傳修飾腫瘤細(xì)胞疫苗及對(duì)照細(xì)胞疫苗接種于含10%FBS、100U/mL青霉素、100g/mL鏈霉素的DMEM完全培養(yǎng)基中,37、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中孵育。待細(xì)胞貼壁(約12h)后換液,加入10M的5-Aza,培養(yǎng)箱中孵育24h后重復(fù)給予10M的5-Aza,再孵育24h后換液,加入0.5的制備收集對(duì)數(shù)生

12、長(zhǎng)期的胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1,能針對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有效的攻擊,即存在免疫逃逸現(xiàn)象。有研究3,4發(fā)現(xiàn),胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1低表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體(MHC)類(lèi)分子以及共刺激分子是其免疫逃逸的重要機(jī)制之一株類(lèi)反式激活因子PANC-1不能表達(dá)(CIITA)MHC表達(dá)陰性是胰腺癌細(xì)胞,而MHC類(lèi)分子的關(guān)鍵原因。采用組蛋白去乙?；敢种苿┖图谆D(zhuǎn)移酶抑制劑進(jìn)行表觀遺傳處理能使PANC-1細(xì)胞的CIITA蛋白重新表達(dá),同時(shí)上調(diào)MHC類(lèi)及MHC類(lèi)分子的表達(dá),使其恢復(fù)免疫原性。2011年3月1日4月28日,我們觀察了表觀遺傳修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗注射后對(duì)倉(cāng)鼠胰腺癌皮下移植瘤的抗腫瘤效應(yīng)。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

13、11.鼠1材料與方法,68實(shí)驗(yàn)動(dòng)物周齡,雌性、細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)材料,體質(zhì)量80g左右,由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)敘利亞黃金倉(cāng)動(dòng)物中心提供。人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1,購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院(5-Aza)上購(gòu)自美國(guó)購(gòu)自美國(guó)海生命科Sigma-Aldrich學(xué)研究院。公司5-氮,雜羥溩酸-2-脫(SAHA)氧核苷N-PeproTech公司Cayman,MitomycinChenmicalC購(gòu)自瑞士公司,IFN-Roche購(gòu)自美國(guó)公司,technology,亞硝基雙1.所有抗體購(gòu)自美國(guó)-2-氧丙基(BOP)購(gòu)自美國(guó)santacruzSanta公司。CruzBio-構(gòu)建2倉(cāng)鼠胰腺癌模型及倉(cāng)鼠胰腺癌移植瘤模型的取實(shí)驗(yàn)用黃金倉(cāng)鼠

14、,BOP10mg/kg皮下注射,每周1次,連續(xù)注射8周,常規(guī)飼養(yǎng),約36周建成倉(cāng)鼠胰腺癌模型。將建模成功的倉(cāng)鼠胰腺癌模型的胰腺腫瘤取出,無(wú)菌情況下仔細(xì)清除結(jié)締組織,將腫瘤組織切碎,置生理鹽水中備用。再取實(shí)驗(yàn)用健康倉(cāng)鼠,于倉(cāng)鼠腹股溝處皮膚做一長(zhǎng)約0.5cm的切口cm,游離皮下組織,縫合切口×0.5cm,日光燈照射×0.5取上述切碎的胰腺腫瘤組織cm,10移植至腹股溝游離區(qū)皮下0.5min。于普通環(huán)境中飼養(yǎng),倉(cāng)鼠,皮下移植瘤長(zhǎng)徑>0.5cm后即為倉(cāng)鼠胰腺癌移植瘤模型構(gòu)建成功。M10.000的USAHA/mL的0.IFN-,5M,培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)箱中孵育2448h后加入PB

15、S25%加入重懸細(xì)胞胰酶消化,計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度為,800r/min離心5min,去除h后予以1×EDTA。CO125g/mL的絲裂霉素c(MMC),37107/、5%mL。2培養(yǎng)箱中孵育2h,期間每20min輕輕震搖1次。800r/min離心5min,去除上清,PBS重懸。重復(fù)上一步驟2次,去除MMC。計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度為2×107其裝入EP/mL,管中此為表觀遺傳修飾腫瘤細(xì)胞疫苗,4保存?zhèn)溆谩?將收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1,接種于含10%FBS、100U/mL青霉素、100g/mL鏈霉素的DMEM完全培養(yǎng)基中,37、5%CO度培養(yǎng)箱中孵育后予0.25%胰酶

16、消化,8002、飽和濕r/min離心5min,去除EDTA。PBS重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度為1×107MMC,37/mL,加入125gmin清,PBS輕輕震搖、5%重懸。1重復(fù)上一步驟次CO/mL的。2800培養(yǎng)箱中孵育r/min2h,期間每202離心次,去除5min,MMC。去除上計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度為2×107苗,將其裝入EP管中,4保存?zhèn)溆?mL,此為對(duì)照細(xì)胞疫1.。察4將荷胰腺癌移植瘤倉(cāng)鼠荷移植瘤倉(cāng)鼠的疫苗注射及移植瘤的生長(zhǎng)觀12只隨機(jī)分為疫苗治療組和對(duì)照組,各6只。疫苗治療組:將表觀遺傳修飾腫瘤細(xì)胞疫苗注射在距離移植瘤1cm處的皮下,每周1次。對(duì)照組:將對(duì)照細(xì)胞

17、疫苗注射在距離移植瘤1cm處皮下,每周1次。每7d測(cè)1次腫瘤長(zhǎng)徑a及橫徑b(移植瘤為類(lèi)球形,取其中心作長(zhǎng)軸及縱軸b),率,/2測(cè)量其長(zhǎng)度,分別代表a、b),腫瘤大小用(a+抑瘤率表示。=繪制皮下移植瘤生長(zhǎng)曲線(1-疫苗治療組腫瘤大小。/計(jì)算抑瘤對(duì)照組腫瘤大小)×100%。4周后統(tǒng)一處死兩組倉(cāng)鼠,將移植瘤取出,檢測(cè)瘤組織中的環(huán)氧合酶2(COX-2)、53(GAL-3)、MHC脂氧合酶(5-LOX)、MHC半乳凝素。1(GAL-1)、半乳凝素21山東醫(yī)藥2015年第55卷第43期1.5移植瘤組織中COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3、5-LOX、GAL-1、GAL-3、MHC、

18、MHCmRNA檢測(cè)DRA)以及-action全長(zhǎng)cDNA序列,經(jīng)Primer5.0MHC、MHCmRNA及蛋白的檢測(cè)COX-2、采用Real-timePCR。根據(jù)GeneBank提供的COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3、MHC、MHC(HLA-軟件設(shè)計(jì)引物,再過(guò)Blast進(jìn)行同源性檢索后,由上5-CTGTATCCCGCCCTGCTGGTG-3、下游引物為5-CACTTGCGTTGATGGTGGCTGTCTT-3,5-LOX上圖1倉(cāng)鼠移植瘤生長(zhǎng)曲線海invitrogen公司合成引物:COX-2上游引物為游引物為5-TGGCATCTAGGTGCAGTGTG-3、下游引物為5-CCTCC

19、AGGTTCTTGCGGAAT-3,GAL-1上游引物為5-AATCATGGCCTGTGGTCTGG-3、下游引物為5-GAAGCGGGGGTTGAAGTGTA-3,GAL-3上游引物為5-TATCCTGCTACTGGCCCCTT-3、下游引物為5-AAGTGGAAGGCGATGTCGTT-3,MHC上游引物為5-GGAGGATTTACTGGGCGCTT-3、下游引3、上物下游引物為游為引5-AAGTGGAAGGCGATGTCGTT-3,物為5-CTGTCAGGAGCAGCGCTAAG-3,5-TATGTGCCCACACAAAGGAGG-MHCGACGATATGG-3、-actin上游引物為G

20、CATACAGGGACAAC-3。下游引5-TTGTCACCAACTGG-預(yù)變性3min、95變性40PCR物為s、54反應(yīng)條件為5-CGACCAGAG-復(fù)性40s、7295延伸40s,擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)。進(jìn)行Meltingcurve分析,所得Ct值按照Ct值法進(jìn)行表達(dá)量分析,以目的基因mRNA和-actinmRNA含量的比值表示目的基因的相對(duì)表達(dá)量蛋白檢測(cè)采用免疫印跡法COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3、MHC、MHC。將新鮮胰腺癌組織制備勻漿,蛋白定量,取50g蛋白常規(guī)行蛋白質(zhì)印跡,以-actin作內(nèi)參。最后ECL發(fā)光,X線片曝光、顯影。采用QuantityOne4.0圖像分析軟件

21、進(jìn)行掃描分析,以目的條帶與內(nèi)參條帶的灰度值比表示目的1.蛋白的相對(duì)表達(dá)量。資料多組間比較用單因素方差分析6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件,兩組比較用。計(jì)量t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。22.遺傳修飾腫瘤細(xì)胞疫苗注射后移植瘤逐漸縮小1結(jié)果兩組移植瘤大小比較疫苗治療組給予表觀,移植瘤體積在各時(shí)間點(diǎn)均小于對(duì)照組,兩組倉(cāng)鼠移植0.瘤生長(zhǎng)曲線見(jiàn)圖39cm、對(duì)照組為1。0.疫苗治療組腫瘤大小平均為<20.205;疫苗治療組抑瘤率為82cm(第52.443%周),。兩組相比,P2.MHC2兩組移植瘤組織移植瘤組織中、MHCmRNACOX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3、

22、MHC及蛋白的表達(dá)比較COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3、疫苗治療組MHCmRNA、0.±445、7.0.176、16.868±980相對(duì)表達(dá)量分別為0.229,±0.對(duì)照組分別為135、43.85011.±0300.29.566、84.±0.801、4.080±1.730403244、±16.與對(duì)照組相比±0.740179、4.±0.145、34.500±,0.720疫苗治療組倉(cāng)鼠移植瘤中266,±兩組各指標(biāo)相比1.242、76.530±,0.P562、43.均

23、<COX-2、0.88001。5-LOX、GAL-1、GAL-30.量分別上升了38、0.26、0.49、0.1.9357和倍mRNA1.,MHC相對(duì)表達(dá)量分別下降了75倍。、MHCmRNA相對(duì)表達(dá)GAL-3、MHC疫苗治療組移植瘤組織、MHC蛋白COX-2、5-LOX、GAL-1、分別為1.179±0.015、0.248(見(jiàn)圖±0.2)007、相對(duì)表達(dá)量0.0.764±0.006、0.814±0.009、1.689±0.010、0.389±0.001,0.014、1.對(duì)照220組±分0.別005、為2.1.00871

24、8±±0.0.011、004、0.1.682133±0.007、0.COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-301。與對(duì)照組相267±0.001,比,疫兩苗組治各療指組標(biāo)倉(cāng)相比,P均±<下降了0.59、0.36、0.63、0.47蛋白相對(duì)表達(dá)量分別鼠移植瘤中倍,MHC、MHC蛋白相對(duì)表達(dá)量分別上升了1.49、1.45倍。圖2兩組倉(cāng)鼠移植瘤組織中COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3、MHC、MHC蛋白表達(dá)山東醫(yī)藥2015年第55卷第43期3討論移,達(dá)到治療腫瘤的目的。表觀遺傳修飾腫瘤細(xì)胞疫苗通過(guò)抑制COX-2、5-LOX的表達(dá)

25、,抑制花生四烯酸的兩條代謝途徑,從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移;通過(guò)抑制GAL-1、GAL-3的表達(dá),能抑制腫瘤血管的生成及侵襲轉(zhuǎn)移。有關(guān)表觀遺傳修飾腫瘤細(xì)胞疫苗的具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn):1SpinelliGP,ZulloA,RomitiA,etal.Long-termsurvivalinmeta-J.JOP,2006,7(5):486-491.staticpancreaticcancer:acasereportandreviewoftheliterature腫瘤抗原特異性T細(xì)胞是抗腫瘤免疫的主要力量,其激活依賴于雙信號(hào)5。腫瘤抗原通過(guò)MHC提呈在細(xì)胞表面,被T細(xì)胞表面抗原受體(TCR

26、)識(shí)別,傳遞T細(xì)胞活化的第1信號(hào)。第1信號(hào)由腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞表面的共刺激分子相互識(shí)別而介導(dǎo)。接受了雙信號(hào)的T細(xì)胞才能增殖并向效應(yīng)T細(xì)胞分化,如果沒(méi)有足夠的第1信號(hào),或只有第1信號(hào)而沒(méi)有第2信號(hào),將導(dǎo)致T細(xì)胞無(wú)能6,7。MHC類(lèi)分子提呈抗原激活CD8+殺傷T細(xì)胞(CTL),是抗腫瘤免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞,但CTL徹底激活還需要輔助性CDMHC輔助CTL類(lèi)分子提呈的腫瘤抗原4+T細(xì)胞的參與,CD4+T細(xì)胞激活,也是抗腫瘤抗體產(chǎn)生的必要條件。CDTCRT細(xì)胞不僅識(shí)別的是4+。有研究810顯示,腫瘤細(xì)胞低表達(dá)MHC類(lèi)分子以及共刺激分子是免疫逃避的重要機(jī)制。換言之,即使腫瘤細(xì)胞能表達(dá)tsa特異性抗原,但若不

27、能有效通過(guò)MHC提呈(第1信號(hào)不足),就不能激活抗原特異性T細(xì)胞,腫瘤細(xì)胞得以逃避免疫系統(tǒng)的攻擊MHC。有研究1113發(fā)現(xiàn),胰腺癌細(xì)胞PANC-1低表達(dá)要機(jī)制之一類(lèi)分子以及共刺激分子是其免疫逃逸的重,而CIITA蛋白表達(dá)陰性是胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1不能表達(dá)MHC類(lèi)分子基因的關(guān)鍵原因。表觀遺傳學(xué)主要研究在基因堿基序列不變的情況下,染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與基因表達(dá)的關(guān)系,組蛋白乙?；虳NA上CpG位點(diǎn)的甲基化是表觀遺傳調(diào)控的兩種主要方式,采用組蛋白去乙酰化酶抑制劑和甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑表觀遺傳處理后CIITA基因型啟動(dòng)子區(qū)CpG位點(diǎn)甲基化程度降低,CIITA蛋白重新表達(dá),上調(diào)了MHC類(lèi)、MHC類(lèi)分子和免疫共

28、刺激因子CD40、CD80的表達(dá)1416源性PANC-1。,免疫排斥小細(xì)胞來(lái)源于人。我們通過(guò)將,與倉(cāng)鼠具有很近的同PANC-1去甲基化和乙?；碛^遺傳修飾后,再用IFN-刺激,即成功構(gòu)建表觀遺傳修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗。通過(guò)將倉(cāng)鼠胰腺癌組織切碎后種植在新倉(cāng)鼠腹股溝皮下,成功構(gòu)建了倉(cāng)鼠胰腺癌移植瘤模型。將疫苗注射在倉(cāng)鼠移植瘤模型的附近,發(fā)現(xiàn)其能有效延緩倉(cāng)鼠移植瘤的生長(zhǎng),移植瘤組織中COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3的表達(dá)較對(duì)照組明顯降低,而MHC、MHC的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高15胞疫苗能有效激活倉(cāng)鼠的抗腫瘤免疫效應(yīng)。說(shuō)明表觀遺傳修飾腫瘤細(xì),通過(guò)恢復(fù)MHC、MHC類(lèi)分子的表達(dá)來(lái),恢復(fù)腫瘤細(xì)胞

29、或腫瘤抗原物質(zhì)誘導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng),激活免疫系統(tǒng)增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)能力,抑制腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)2StielerRecentJ.ResultsImmunotherapeuticapproachesCancerRes,2008,177(8):165-177.inpancreaticcancerJ.3EmensJ.CancerLA,JaffeeBiolTher,EM.Cancer2003,2(4vaccines:Supplan1):161-168.oldideacomesofage4MaekawalaboratoryM,findingsWatanabeJ.Y.CurrEpigenetics:MedChe

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