鹽酸普魯卡因注射液中特殊雜質(zhì)的檢查

1、鹽酸普魯卡因注射液中特殊雜質(zhì)的檢查一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求1. 了解鹽酸普魯卡因的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)；2. 了解鹽酸普魯卡因注射液中的特殊雜質(zhì)的檢查方法；3. 掌握TLC法測定有關(guān)物質(zhì)的原理與測定方法；4. 熟悉并掌握薄層板的制備與活化。二、實(shí)驗(yàn)原理1. 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)C13H20N2O2.HCl 272.15鹽酸普魯卡因化學(xué)名為4-氨基苯甲酸-2-(二乙氨基)乙酯鹽酸鹽，白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭，味微苦，隨后有麻痹感；在水中易溶，在乙醇中略溶，在氯仿中微溶，在乙醚中幾乎不溶；用于局麻。2. 鹽酸普魯卡因中特殊雜質(zhì)“對氨基苯甲酸”的來源及檢查的必要性 鹽酸普魯卡因分子中含酯鍵，因此鹽酸普魯卡因注射液在貯藏期間

2、，普魯卡因可發(fā)生水解反應(yīng)生成對氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇：鹽酸普魯卡因注射液在貯存過程中的穩(wěn)定性與溶液的pH、貯存溫度、容器玻璃質(zhì)量、空氣中氧以及光線照射等有密切關(guān)系。如pH為6的溶液，于37 放置40天后，分解率約為4.3 4.6%；pH在4.05.0之間的溶液，久貯后仍較穩(wěn)定。但保存不當(dāng)，受空氣及光線影響，對氨基苯甲酸可脫羧生成苯胺，而苯胺又會被氧化成有色物質(zhì)使注射液變黃，降低療效，增加毒性。所以，中國藥典2010年版（是ChP2010嗎？）中規(guī)定鹽酸普魯卡因及其注射液均需要檢查對氨基苯甲酸的含量，并且鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸的限量不得超過標(biāo)示量的1.2%。3. 鹽酸普魯卡因注射液中

3、特殊雜質(zhì)“對氨基苯甲酸”的檢查原理和方法檢查對氨基苯甲酸的方法曾采用溶劑抽提后比色法，該法操作麻煩、費(fèi)時(shí)。中國藥典1985年版至2005年版則采用薄層色譜法檢查之。利用薄層色譜法的高分離效能，將對氨基苯甲酸與鹽酸普魯卡因等物質(zhì)分離后，噴以對二甲氨基苯甲醛溶液，在冰醋酸存在下與對氨基苯甲酸縮合形成Schiff堿呈有色斑點(diǎn)，并同時(shí)與對照品溶液的主斑點(diǎn)進(jìn)行比較。選用實(shí)際存在的待檢雜質(zhì)作為對照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥物中特殊雜質(zhì)檢查的方法較為理想，因?yàn)閷φ掌放c雜質(zhì)系同一種物質(zhì)，其色譜行為相同。ChP2010采用高效液相色譜的方法進(jìn)行檢查，高效液相色譜具有靈敏度高、高專屬性等優(yōu)點(diǎn)，但是其使用成本較高，設(shè)備價(jià)格昂貴。本

4、實(shí)驗(yàn)中采用薄層色譜法進(jìn)行檢查。三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器原料名稱規(guī) 格用 量鹽酸普魯卡因注射液普通市售12支乙 醇AR適 量對氨基苯甲酸AR0.3 mg對二甲氨基苯甲醛溶液2%對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100 mL，加入冰醋酸5 mL制成適 量展開劑苯-冰醋酸-丙酮-甲醇(14:1:1:4)適量容量瓶10 mL、100 mL各一個(gè)，薄層層析硅膠板，層析缸，點(diǎn)樣管。四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟1. 供試品溶液的制備精密量取本品，加乙醇稀釋使成每l mL中含鹽酸普魯卡因2.5 mg的溶液，作為供試品溶液。2. 對照品溶液的制備精密稱取對氨基苯甲酸3 mg，置100 mL的容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，既得。3.

5、 鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸的檢查（ChP2015采用HPLC法）：吸取上述兩種溶液各10 L，分別點(diǎn)于含有羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠薄層板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇(14:1:1:4)為展開劑。展開后，取出晾干，用對二甲氨基苯甲醛溶液噴霧顯色。供試溶液若顯色，則與對照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)比較，其顏色與對照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。注意事項(xiàng)：1. 薄層色譜分析中為使斑點(diǎn)集中，點(diǎn)樣應(yīng)分次點(diǎn)加，每次點(diǎn)加后候，其自然干燥、低溫烘干或經(jīng)溫?zé)釟饬鞣透伞?2. 薄層板放入層析缸時(shí)，薄板底邊應(yīng)水平浸入展開劑中，待展開至溶劑前沿距玻板頂端1 cm時(shí)，取出薄層板。3. 展開缸必須密封，為使缸內(nèi)展開劑飽和，薄層板放入展缸前可在層析缸內(nèi)壁貼濾紙條讓濾紙條一端浸入展開劑中，密封層析缸，