人體表面的微生物

1、人體表面的微生物檢測實驗一、目的要求1證明體表存在微生物。2比較來自不同條件下細(xì)菌的數(shù)量和類型。3體會無菌操作的重要性。二、基本原理平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長所需要的營養(yǎng)成分，當(dāng)取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在37溫度下培養(yǎng)，12天內(nèi)每一菌體即能通過很多次細(xì)胞分裂而進行繁殖，形成一個可見的細(xì)胞群體的集落，稱為菌落。每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型。三、器材肉膏蛋白胨瓊脂平板，無菌水，滅菌棉簽（裝在試管內(nèi)），酒精燈，

2、記號筆，廢物缸。四、操作步驟1寫標(biāo)簽任何一個實驗，在動手操作前均需首先將器皿用記號筆做上記號，培養(yǎng)皿的記號一般寫在皿底上。如果寫在皿蓋上，同時觀察兩個以上培養(yǎng)皿的結(jié)果，打開皿蓋時，容易混淆。用記號筆寫上班級、姓名、日期，本次實驗還要寫上樣品來源（如實驗室空氣或無菌室空氣或頭發(fā)等），字盡量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當(dāng)中，以免影響觀察結(jié)果。例如：2培養(yǎng)皿的包扎和消毒（a）培養(yǎng)基的制備步驟略 （b）滅菌（i)干熱滅菌 將需要滅菌的物品放入干燥箱內(nèi)，不要接觸內(nèi)壁鐵板；通電，打開排氣孔至溫度升至100攝氏度關(guān)閉排氣孔；將溫度調(diào)至160-170攝氏度后維持兩小時；切斷電源，把恒溫箱調(diào)節(jié)旋鈕歸零。待溫度

3、降至50攝氏度時才能取出物品。（ii）濕法滅菌 加水至底部隔板一下1/3處；把滅菌的錐形瓶（內(nèi)有培養(yǎng)液）放入鍋內(nèi)，關(guān)閉鍋蓋（對角擰緊），打開排氣閥；打開電源；待鍋內(nèi)水沸騰后，蒸汽將鍋內(nèi)冷空氣驅(qū)靜，當(dāng)溫度指向100攝氏度時，證明鍋內(nèi)已經(jīng)充滿蒸汽，關(guān)排氣閥；升溫升壓，當(dāng)壓力達(dá)到1.05kg/cm2（溫度為121攝氏度）時，開始滅菌，維持15-到30分鐘。達(dá)到滅菌時間時，停止加熱。自然降溫，指針歸零，打開排氣閥，揭鍋蓋，取物品，排鍋內(nèi)剩水。 3人體細(xì)菌的檢查 （1）手指（洗手前與洗手后）（a）分別在兩個瓊脂平板上標(biāo)明洗手前與洗手后（當(dāng)然，班級、姓名、日期各項在每次寫標(biāo)簽時是必不可少的）。（b）移去皿

4、蓋，將未洗過的手指在瓊脂平板的表面，輕輕地來回劃線，蓋上皿蓋。（c）用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中沖洗干凈，干燥后，在另一瓊脂平板表面來回移動，蓋上皿蓋。（2）頭發(fā) 在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發(fā)用力搖動數(shù)次，使細(xì)菌降落到瓊脂平板表面，然后蓋上皿蓋。（3）咳嗽 將去蓋瓊脂平板放在離口約68cm處，對著瓊脂表面用力咳嗽，然后蓋上皿蓋。（4）鼻腔（a）取棉簽 左手拿含有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞，將其取出，將管口很快地通過酒精燈的火焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出。放回棉塞，并將空試管放在試管架上。弄濕棉簽 左手取滅菌水試管

5、，如上法拔出棉塞并燒灼管口，將棉簽插入水中，再提出水面，在管壁上擠壓一下以除去過多的水分，小心將棉簽取出，燒灼管口，放回棉塞，并將滅菌水試管放在試管架上。取出棉簽，并將其弄濕。（b）用濕棉簽在鼻腔內(nèi)滾動數(shù)次。（c）接種，在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫。再將棉簽伸入，在瓊脂表面頂端接種（滾動一下），立即閉合皿蓋。并將原放棉簽的空試管拔出棉塞，燒灼管口，插入用過的棉簽，將試管放回試管架。3將所有的瓊脂平板翻轉(zhuǎn)，使皿底在上，放37培養(yǎng)箱，培養(yǎng)12天。4結(jié)果記錄方法（1）菌落計數(shù)在劃線的平板上，如果菌落很多而重疊，則數(shù)平板最后1/4面積內(nèi)的菌落數(shù)。不是劃線的平板，也一分為四，數(shù)1/4面

6、積的菌落數(shù)。（2）根據(jù)菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀察不同的菌落類型。但要注意，如果細(xì)菌數(shù)量太多，會使很多菌落生長在一起，或者限制了菌落生長而變得很小，因而外觀不典型，故觀察菌落的特點時，要選擇分離得很開的單個菌落。菌落特征描寫方法如下：（a）大小 大、中、小、針尖狀?？上葘⒄麄€平板上的菌落粗略觀察一下，再決定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個大小范圍。（b）顏色 黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。（c）干濕情況 干燥、濕潤、粘稠。（d）形態(tài) 圓形、不規(guī)則等。（e）高度扁平、隆起、凹下。（f）透明程度 透明、半透明、不透明。（g）邊緣 整齊、不整齊。五、實驗報告1結(jié)果（1）將你自己的平板結(jié)果記錄于下表中。（2）與其他同學(xué)所做的結(jié)果進行比較。2思考題（1）比較各種來源的樣品，哪一種樣品的平板菌落數(shù)與菌落類型最多？（2）人多的實驗室與無菌室（或無人走動的實驗室）相比，平板上的菌落數(shù)與菌落類