乙肝病毒DNA的實驗室檢測

1、LOREM IPSUM DOLOR1、熒光定量PCR技術(shù)2、乙肝病毒的感染3、HBV-DNA與臨床熒光定量PCR技術(shù)熒光定量熒光定量PCR技術(shù)技術(shù)Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶鏈式反應(yīng)，是一種DNA的快速擴增技術(shù)。PCR技術(shù)通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱酶（TaqDNA聚合酶）的作用，經(jīng)過三個步驟在3個小時內(nèi)反復(fù)循環(huán)25-30次，把特定的DNA片段擴增1000萬倍。 每個PCR體系含4種主要成分： 實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在反應(yīng)體系中加入熒光標記，利用熒光信號積累實時檢測整個PCR過程，通過標準曲線對PCR終產(chǎn)物的分析，最終實現(xiàn)對未知的起

2、始模版進行定量分析的一種技術(shù)，是迄今對已知基因序列的核酸測定中最靈敏的方法。熒光定量熒光定量PCR技術(shù)技術(shù)PCR 反應(yīng)過程5533d.NTPsTaq 酶Primers5353535353535353反應(yīng)組分反應(yīng)組分變變 性性535353535353延延 伸伸53535353353TaqTaq55重重 復(fù)復(fù)退退 火火5353535355335353循環(huán)循環(huán)24個拷貝個拷貝循環(huán)循環(huán)38個拷貝個拷貝53535353535353535353533553535353熒光定量PCR原理插入染料法插入染料法 SYBR Green I雜交探針法雜交探針法(最常用最常用) TaqManTaqMan探針5533d

3、.NTPsTaq酶Primers5353535353535353反應(yīng)體系變 性535353535353Taql53RQProbe53RQ535353RQ退 火531. 鏈取代Taq3QR5533QTaqR52. 水 解3. 聚 合53QTaqR354. 檢測熒光533QTaqR5l乙肝病毒的感染乙肝病毒的感染 HBsAg：是HBV感染的主要標志HBsAb：保護性抗體HBcAb: 非保護性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg：HBV復(fù)制及強感染性的指標HBeAb：有一定的保護作用，預(yù)后良好乙肝病毒的感染1. “兩對半” ：機體的免疫反應(yīng)狀態(tài)；2. “攜帶者”、“大三陽”、“小

4、三陽”等免疫學(xué)指標。HBsAg()HBV-DNA() HBeAg ()HBV-DNA()3. 乙肝病毒的感染5.HBeAg陽性標本HBV DNA檢出率90左右 4. 也可能出現(xiàn)HBsAg()，HBV-DNA()。乙肝病毒的感染乙肝病毒的感染慢性慢性HBV感染分期及相關(guān)實驗室檢測指標感染分期及相關(guān)實驗室檢測指標 魯鳳民，莊輝，乙型肝炎實驗室診斷研究進展 2009 HBV DNA檢測的臨床意義HBV DNAHBV DNA是是HBVHBV存在最直接的依據(jù)存在最直接的依據(jù)HBV DNAHBV DNA是是HBVHBV復(fù)制的標志復(fù)制的標志HBV DNAHBV DNA是患者具有傳染性的標志是患者具有傳染性的

5、標志HBV DNAHBV DNA對乙肝兩對半起補充作用對乙肝兩對半起補充作用HBV DNAHBV DNA是目前判斷乙肝抗病毒藥物療效最敏感的指標是目前判斷乙肝抗病毒藥物療效最敏感的指標HBV DNAHBV DNA可檢測出隱匿性慢性乙型肝炎可檢測出隱匿性慢性乙型肝炎有利于獻血員窗口期病毒核酸的篩查和早期診斷有利于獻血員窗口期病毒核酸的篩查和早期診斷提供直接證據(jù)縮短提供直接證據(jù)縮短“窗口期窗口期”HBV DNA檢測的臨床意義 調(diào)查表明并不是所有“大三陽”的病人都處于HBV復(fù)制期，具有傳染性；也不是所有“小三陽”的病人HBV都無復(fù)制。因此，要準確知道HBV是否處于復(fù)制狀態(tài)，最準確的方法還是通過檢測HBV DNA來決定。HBV DNA檢測的臨床意義HBV DNA檢測的臨床意義干擾素或拉米夫定等治療后病毒復(fù)制受抑制。PCR所用引物相應(yīng)的DNA序列發(fā)生突變，此引物與突變DNA不能配對結(jié)合。病毒DNA整合于宿主肝細胞染色體而血中游離HBV DNA很少或缺乏。 目前尚無一種能迅速、直接殺死清除乙肝病毒的藥物，最好的抗病毒藥物療效也僅能達到50左右