第4章酶(新調(diào)整)

1、第四章第四章 酶酶第二節(jié)第二節(jié) 酶的分類和命名酶的分類和命名第四節(jié)第四節(jié) 酶的作用機理酶的作用機理第五節(jié)第五節(jié) 影響酶促反應速度的因素影響酶促反應速度的因素第一節(jié)第一節(jié) 酶的概念酶的概念第三節(jié)第三節(jié) 酶的組成與結構酶的組成與結構第六節(jié)第六節(jié) 變構酶、同工酶、誘導酶變構酶、同工酶、誘導酶 及抗體酶及抗體酶第七節(jié)第七節(jié) 酶的分離純化及酶工程酶的分離純化及酶工程第四章第四章 酶酶 第一節(jié)第一節(jié) 酶的概念酶的概念 一、酶是生物催化劑一、酶是生物催化劑 （一）酶的定義（一）酶的定義 酶（Enzyme）：是生物活細胞產(chǎn)生的，以蛋白質(zhì)為主要成分的生物催化劑。 1810年以后即開始有了研究，逐漸由酶反應現(xiàn)象深

2、入到機理。 1、酶是蛋白質(zhì) 1926年Sumner第一次從刀豆種子中提取了脲酶結晶，證明其具有蛋白質(zhì)性質(zhì) 30年代，Northrop又分離出結晶的胃蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶，證明酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì) （二）酶的化學本質(zhì) （2）酶可以被蛋白酶水解而喪失活性 (3）許多酶的氨基酸順序已被測定 （4）1969年人工合成了牛胰核糖核酸酶 （1）酶具有蛋白質(zhì)的特性，如：兩性解離、膠體性質(zhì)、加熱使酶變性、顏色反應等 在已鑒定過的數(shù)千種酶中，絕大多數(shù)酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)。但在1982年，美國科學家T.Cech發(fā)現(xiàn)原生動物四膜蟲的26SrRNA前體具有自我拼接的催化活性。 T.Cech將這種RNA命名為

3、“Ribozyme”。 核酶（ Ribozyme ）：指對RNA具有催化活性的RNA 。2、Ribozyme（核酶核酶）的化學本質(zhì)是RNA胞外酶與胞內(nèi)酶胞外酶與胞內(nèi)酶n酶雖是由細胞產(chǎn)生的酶雖是由細胞產(chǎn)生的,但并非必須在細胞但并非必須在細胞內(nèi)才能起作用內(nèi)才能起作用,有些酶被分泌到細胞外才有些酶被分泌到細胞外才發(fā)生作用。這類酶稱發(fā)生作用。這類酶稱“胞外酶胞外酶”。n胞外酶主要是水解酶類，入淀粉酶、脂胞外酶主要是水解酶類，入淀粉酶、脂肪酶；肪酶；n大部分酶在細胞內(nèi)起催化作用稱為大部分酶在細胞內(nèi)起催化作用稱為“胞胞內(nèi)酶內(nèi)酶”。酶促反應、底物和產(chǎn)物酶促反應、底物和產(chǎn)物n酶促反應酶促反應：酶催化的反應；：

4、酶催化的反應；n底物底物：酶催化下發(fā)生變化的物質(zhì)，相當：酶催化下發(fā)生變化的物質(zhì)，相當于反應物；于反應物；n產(chǎn)物產(chǎn)物：反應后生成的物質(zhì)。：反應后生成的物質(zhì)。（一）與無機催化劑相比，有如下共同點：（一）與無機催化劑相比，有如下共同點： 1、反應前后都不發(fā)生數(shù)量和質(zhì)量變化。 2、能加快反應速度,但不改變反應的平衡點。 3、從熱力學上看,只能催化熱力學上允許進行的反應。 4、都能降低反應所需的活化能 活化能：在一定溫度下，1mol底物全部進入活化狀態(tài)所需的自由能，單位J/mol。二、酶的作用特點二、酶的作用特點（二）酶的作用特點（二）酶的作用特點1、酶催化的高效性 NH2 C=O + H2O 脲酶 C

5、O2 + 2NH3 NH2 Fe 粉 脲酶的催化效率比Fe粉高1015倍。2、酶催化的專一性 一種酶只能作用于某一類或某種特定的物質(zhì)。 G + ATP 己糖激酶 G-6-P + ADP 當生物體內(nèi)G-6-P積累時，會抑制己糖激酶的活性，避免G和ATP的過分消耗。4、作用條件溫和：常溫、常壓、中性；5、酶易失活（易變性） 凡使Pr變性的因素均使酶破壞而失活.6、常需要輔助因子3、酶活性的可調(diào)控性 一、酶的組成一、酶的組成 （一）酶的組成成分分類（一）酶的組成成分分類 按化學成分酶分為：單體酶和結合酶 1、單體酶：只由蛋白質(zhì)組成，如脲酶、淀粉酶、蛋白酶。 2、結合酶：除蛋白質(zhì)外，還有對熱穩(wěn)定的非蛋

6、白小分子物質(zhì)，稱輔因子。 三、三、 酶的組成與結構酶的組成與結構 酶蛋白和輔助因子單獨存在時均無活性，二者只有結合成完整的分子時，才具有活性。酶蛋白及輔助因子結合起來成為全酶。 全酶全酶 酶蛋白酶蛋白 + + 輔因子輔因子 決定酶促反應的 作為電子、原 專一性和高效性 子或基團的載 體參與反應 并促進反應 輔酶輔酶：與酶蛋白結合疏松， 用透析法可以除去 輔基輔基：與酶蛋白結合緊密， 不能用透析法除去 小分子有機化合物 輔因子：輔酶、輔基、金屬離子金屬離子金屬離子：與酶蛋白結合，有的緊， 有的松 1 1、酶的結構與蛋白質(zhì)的結構相同，、酶的結構與蛋白質(zhì)的結構相同，都有一定的空間結構都有一定的空間結

7、構 2 2、根據(jù)酶蛋白的結構特點，酶可分、根據(jù)酶蛋白的結構特點，酶可分為：為：（二）依據(jù)蛋白質(zhì)結構特點分類（二）依據(jù)蛋白質(zhì)結構特點分類 （1）單體酶單體酶: : 只有一條多肽鏈,分子量在13,000-35,000之間，一般是水解E, 如蛋白E、羧肽E。 （3）多酶復合體：多酶復合體：由幾個酶有組織的聚集在一起,功能上相互配合，第一個E的產(chǎn)物是第二個E的底物，如丙酮酸脫氫E、脂肪酸合成酶。 （2）寡聚酶：寡聚酶：由兩個或兩個以上的亞基組成,亞基之間由非共價鍵相連，亞基可以是相同的,也可以是不同的，分子量在35,000-幾百萬，如丙酮酸激E、乳酸脫氫E。 酶的專一性：是指酶對底物及催化的反應的選擇

8、性。一種酶僅能作用于一種物質(zhì)或一類結構相似的物質(zhì)，促其發(fā)生一定的化學反應。 結構專一性 絕對專一性：一種底物 專 相對專一性 基團專一性一 鍵專一性性 立體異構專一性 旋光異構專一性 幾何異構專一性 四、酶四、酶 的專一性的專一性 O NH2CNH2 + H2O 脲酶 2NH3 + CO2 O NH2CNHCl + H2O 脲酶 1、絕對專一性：酶對底物的要求非常嚴格，只作用于一種底物。如：過氧化氫酶 底物：過氧化氫琥珀酸脫氫酶 底物：琥珀酸（1）基團專一性： 化學鍵 鍵一端的基團 a -葡萄糖苷酶 a-糖苷鍵 糖苷鍵的一端是葡萄糖 底物：麥芽糖、蔗糖 2、相對專一性：對底物要求程度較低，能作

9、用于結構相似的一類物質(zhì)。 O 酯酶 RCOR 酯鍵 O 二肽酶 H2NCHCNCHCOOH 肽鍵 R H R （2）鍵專一性：只要求作用于一定的化學鍵，而對鍵兩端的基團無嚴格的要求。 （1）旋光異構專一性：當?shù)孜锞哂行猱悩嬻w時一酶只能作用于其中的一種。 如：L-AA氧化酶只能催化L-AA氧化，而對D-AA無作用。 如：延胡索酸水化酶 反丁烯二酸 + H2O 延胡索酸水化酶 蘋果酸 順丁烯二酸 + H2O 延胡索酸水化酶 （2）順反異構專一性：對具有順式和反式異構的底物具嚴格的選擇性。3、立體異構專一性第二節(jié)第二節(jié) 酶的分類和命名酶的分類和命名一、酶的命名一、酶的命名n1、習慣命名法n 底物名

10、稱 脲酶、淀粉酶、蛋白酶n 反應性質(zhì) 脫氫酶、加氧酶、轉(zhuǎn)氨酶n 兩者結合 琥珀酸脫氫酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶n 酶的來源 胃蛋白酶、木瓜蛋白酶酶的命名酶的命名n2 2、國際系統(tǒng)命名法、國際系統(tǒng)命名法n 底物底物1 1：底物：底物2 2 反應類型反應類型n 如：琥珀酸：如：琥珀酸：FADFAD氧化還原酶氧化還原酶一、酶的分類一、酶的分類1、氧化還原E類: 催化氧化還原反應的E AH2 + B A + BH2 脫氫E AH2 + O2 A + H2O2 氧化E 如：琥珀酸脫氫E、多酚氧化E第二節(jié)第二節(jié) 酶的分類和命名酶的分類和命名 國際E學委員會制定的”國際系統(tǒng)分類法”將E促反應分為六大類: 2、轉(zhuǎn)移E類：

11、催化分子間基團轉(zhuǎn)移的E AR + B A + BR 如：轉(zhuǎn)氨E、己糖激E 3、水解E類：催化水解反應的E AB + H2O AOH + B H 如：蛋白E、淀粉E、脂肪E 4、 裂合酶類：催化從底物上移去某些基團而形成雙鍵的非水解性反應及其逆反應的E AB A + B 如：醛縮酶、脫氨E、脫羧酶 5、 異構酶類：催化同分異構體的相互轉(zhuǎn)變的E A B 如：G異構E、甘油 變位E 6、合成E類：催化一切必須與ATP分解相偶聯(lián)的合成反應的E A + B + ATP AB + ADP + Pi 如：Gln合成E, 丙酮酸羧化E 酶的編號 如：乳酸脫氫E 酶學委員會 類 亞類 亞亞類 順序號 EC 1

12、1 1 27 （一）含義（一）含義 酶的活性中心：指酶分子中直接和底物結合，并和酶催化作用直接有關的部位。 結合部位：與底物結合，決定 酶的專一性 活性中心 催化部位：底物的敏感鍵在此 處斷裂而形成新鍵， 決定酶的高效性 酶的活性中心（酶的活性中心（P90） 必需基團必需基團：E分子中有些基團若經(jīng)化學修飾則活性喪失，這些基團稱為必需基團，包括活性中心基團及維持活性中心的基團。 活性中心 結合部位酶分子必需基團 催化部位 維持活性中心的必需基團 其它部分（非必需基團） E蛋白多肽鏈經(jīng)過盤繞折疊形成特定的空間結構，使相關的AA形成微區(qū)。 （三）酶活性中心的結構特征（總結）（三）酶活性中心的結構特征

13、（總結） 1、活性中心是E分子表面的一個凹穴，有一定的大小和特殊的構象，在與底物接觸時表現(xiàn)一定的柔性。（二）酶活性中心的形成（二）酶活性中心的形成 2、構成活性中心的大多數(shù)AA殘基為疏水性的，使此小區(qū)形成一個非極性的微環(huán)境，有利于與底物作用。在活性中心內(nèi)僅有少數(shù)極性AA殘基以其功能基團直接與底物作用。 活性中心的AA在一級結構上相距很遠，甚至不在一條肽鏈上，但在三級結構上比較靠近。 3、在活性中心，底物以弱鍵與酶結合（有利于產(chǎn)物形成）。 1、酶原：某些酶在細胞內(nèi)合成或初分泌時沒有催化活性，這種無活性狀態(tài)的酶前身物稱為酶原。 2、酶原激活：酶原變成酶的過程（切去幾個AA的肽段）。 實質(zhì)：酶活性中

14、心的形成或暴露過程。（四）酶原激活（四）酶原激活一、酶催化作用的本質(zhì)一、酶催化作用的本質(zhì)（一）活化能（一）活化能 達到或超過能閾的分子活化分子 使常態(tài)分子變?yōu)榛罨肿拥耐緩剑?（1）加熱或光照射，直接增加活化分子數(shù)目； （2）降低活化能（能閾），間接增加活化分子數(shù)目。 酶催化作用的本質(zhì)：降低反應的活化能。第三節(jié)第三節(jié) 酶的作用機理酶的作用機理 酶在催化過程中,酶先與底物（S）形成中間產(chǎn)物ES（酶的活化中心與底物形成多個次級鍵），使反應活化能降低，然后中間產(chǎn)物再生成反應產(chǎn)物P。 （二）中間產(chǎn)物學說（二）中間產(chǎn)物學說 酶降低活化能的原因酶降低活化能的原因 非酶促反應 S PS P 酶促反應 E +

15、 S ESE + S ES* * EP E + P EP E + P 底物分子進行化學反應的部位與酶分子活性中心具有緊密互補的關系。 二、酶專一性的作用機理二、酶專一性的作用機理1、鎖鑰學說 1964年Koshland提出“誘導契合”假說:底物結合可誘導酶活性中心構象的變化,使酶的活性中心與底物楔合而形成中間絡合物。 2、誘導契合學說“誘導契合”假說 1. 1. 鄰近及定向效應鄰近及定向效應三、與酶的高效性有關的因素三、與酶的高效性有關的因素底物鄰近鄰近電引吸力、疏水作用定向定向鄰近底物與酶活性中心的鄰近底物分子之間的鄰近定向底物與酶活性部位基團的定向底物分子之間的定向大大提高酶活性中心的底物

16、濃度使分子間反應類似于分子內(nèi)反應活化能降低2、張力與變形、張力與變形n酶與底物誘導契合過程中，酶受底物誘酶與底物誘導契合過程中，酶受底物誘導而變形，同時酶使底物中的導而變形，同時酶使底物中的敏感鍵產(chǎn)敏感鍵產(chǎn)生生“張力張力”或變形或變形，使敏感鍵易于斷裂，使敏感鍵易于斷裂 酶活性中心的某些基團可以作為良好的質(zhì)子供體或受體進行酸堿催化。 廣義酸（質(zhì)子供體） 廣義堿（質(zhì)子受體） COOH COO N+H3 NH2 SH S3 3、 酸堿催化酸堿催化 （1） pK值約為6.7-7.1，在接近中性的條件下，一半以廣義酸的形式存在，另一半以廣義堿的形式存在，因而它既能作為質(zhì)子供體，又能作為質(zhì)子受體，有效地

17、進行酸堿催化。 （2）咪唑基供出和接受質(zhì)子的速度很快，其半衰期短，小于0.1毫微秒。 所以許多酶活性中心都有組氨酸殘基組氨酸的咪唑基：組氨酸的咪唑基： （5 5）青霉素：）青霉素：與糖肽轉(zhuǎn)肽酶活性部位與糖肽轉(zhuǎn)肽酶活性部位Ser-OHSer-OH共價結合共價結合 糖肽轉(zhuǎn)肽酶在細菌細胞壁合成中使肽糖肽轉(zhuǎn)肽酶在細菌細胞壁合成中使肽聚糖鏈交聯(lián)。酶失活，細菌細胞壁合成受聚糖鏈交聯(lián)。酶失活，細菌細胞壁合成受阻。阻。 2、專一性不可逆抑制作用：抑制劑專一性地作用于某一種酶活性部位的必需基團而導致的酶的失活 如：對甲苯磺酰-L-賴氨酰氯甲酮與胰蛋白酶的底物對甲苯磺酰-L-賴氨酸甲酯結構相似，它可以與胰蛋白酶活

18、性部位必需基團His57共價結合，引起不可逆地失活。 可逆性抑制作用可逆性抑制作用：抑制劑與酶：抑制劑與酶PrPr以以非非共價鍵共價鍵可逆結合，可用透析的方法除去?？赡娼Y合，可用透析的方法除去。 可逆性抑制作用可以分為三種類型： 競爭性抑制作用競爭性抑制作用 非競爭性抑制作用非競爭性抑制作用 反競爭性抑制作用反競爭性抑制作用 （二）可逆性抑制作用（二）可逆性抑制作用1 1、競爭性抑制作用、競爭性抑制作用 （1）抑制劑的化學結構與底物相似，與底物競爭酶活性中心，形成EI，減少了酶與底物的結合機會，降低酶活力。 （2）抑制作用的強弱取決于I / S。 （3）可采用提高S來消除這種抑制作用。 （4）

19、競爭性抑制作用的米氏方程： E + S ES P + E + I EI Ki=Ki2 / Ki1=EI / EIK1Ki1Ki2K3K2 VmaxS I Km(1+I/Ki)+S KiV =Km= Km1+Vmax 不變，不變，Km變大變大 例例1 1： CH2COOH + FAD 琥珀酸脫氫酶 CHCOOH + FADH2 CH2COOH HCCOOH 例例2 2： 對氨基苯甲酸二氫葉酸合成酶二氫葉酸 四氫葉酸 （細菌） 對氨基苯磺酰胺（黃胺藥） 丙二酸、戊二酸是琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制劑。2 2、非非競競爭爭性性抑抑制制作作用用 （1）非競爭性抑制劑與酶活性中心以外的部位結合，引起酶分子構

20、象變化，使酶活性中心催化作用降低。 （2）抑制作用的強弱取決于I。 （3）不能用增大S的方法來消除抑制作用。 （4）非競爭性抑制作用的米氏方程： VmaxS Vmax (Km + S)(1+I/Ki) (1+I/Ki)V =Vmax= E + S ES P + E + + I I EI +S ESI E=Et-Es-EI-ESIVmax 變小，變小，Km不變不變 如如：重金屬離子（Ag2+、Cu2+ 、Hg2+ 、Pb2+等）對巰基酶的抑制作用； ESH + Ag2+ E SAg + H+ 加過量的巰基化合物（Cys、巰基乙醇等）可除去重金屬而解除抑制。 3 3、反競爭性抑制作用：E先與底物結

21、合成ES，然后才與抑制劑結合形成ESI，形成的ESI不能轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物。E + S ES E + P + I ESI Vmax和和 Km均變小均變小 VmaxS Km+S (1+I/Ki)V =Km=KmIKi1+Vmax=VmaxIKi1+ 競爭性抑制作用與非競爭性抑制作用Michaelis-Menten圖：VVmaxVmaxSKm Km無I競I非競IMichaelis-Menten圖VmaxKm反競IVmax 競爭性抑制作用與非競爭性抑制作用動力學異同： 非競非競I競競I無無I1/S1/Vmax 1+I/Ki Vmax-1/Km -1Km(1+I/Ki)Line WeaverBurk 曲線曲線

22、 反競反競I-1+I/Ki） Km類型類型方程式方程式V Vmaxmax K Km m無抑制無抑制劑劑競爭性競爭性抑制抑制非競爭非競爭性抑制性抑制反競爭反競爭性抑制性抑制V=Vmax.SKm+SV VmaxmaxK Km mV=Vmax.SKm(1+I/K Ki i ) +SV=Vmax.S(Km +S)(1+I/K Ki i )V=Vmax.SKm +(1+I/K Ki i ) S不變不變變大變大減小減小不變不變減小減小減小減小例：假設一個酶促反應系統(tǒng)中加入修飾劑Q，得到如圖所示結果。Q起什么作用？Q是與E結合還是與ES結合，還是與E和ES都能結合？為什么？ 1/V1/S低（Q）高（Q）解：

23、Q增加反應速度，它可能是激活劑。 Km不變，它與E和ES都能結合。 一、變（別）構酶一、變（別）構酶 變構酶：既有活性中心又有調(diào)節(jié)部位的酶既有活性中心又有調(diào)節(jié)部位的酶變構效應變構效應: :調(diào)節(jié)物與酶分子的調(diào)節(jié)部位結調(diào)節(jié)物與酶分子的調(diào)節(jié)部位結合之后合之后, ,引起酶分子構象的改變引起酶分子構象的改變, ,從而提高從而提高或降低酶的活性或降低酶的活性 第六節(jié)第六節(jié)變構酶、同工酶、誘導酶變構酶、同工酶、誘導酶 及抗體酶及抗體酶變構酶具以下特征：變構酶具以下特征： 1、含有多個亞基、含有多個亞基(寡聚酶寡聚酶)、酶分子、酶分子有活性中心、有活性中心、 調(diào)節(jié)部位調(diào)節(jié)部位, 這兩個部位可這兩個部位可位于同

24、一亞基或不同亞基。位于同一亞基或不同亞基。 2、具有變構效應、具有變構效應, 調(diào)節(jié)物與酶結合調(diào)節(jié)物與酶結合后，改變酶分子構象影響酶活性。后，改變酶分子構象影響酶活性。 變構激活劑、變構抑制劑變構激活劑、變構抑制劑 3、動力學特征不遵循米氏方程,而成S曲線。SV非調(diào)節(jié)酶變構酶 4、系列反應系統(tǒng)的第一個酶，或分支代謝的第一個E。 5、分子量大、結構復雜,與一般酶性質(zhì)不同, 某一些別構酶在0不穩(wěn)定, 室溫穩(wěn)定。 如：大腸桿菌的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶（ATCase）汞化物完整的酶分子完整的酶分子（活性形式）（活性形式）催化亞基催化亞基（三聚體）（三聚體）調(diào)節(jié)亞基調(diào)節(jié)亞基（二聚體）（二聚體）CO2 + Gl

25、u + ATP氨甲酰磷酸AspPiATCase氨甲酰天冬氨酸CTP激活抑制 1 1、同工酶：同工酶：能催化相同化學反應，但酶能催化相同化學反應，但酶PrPr本本身的分子結構、理化性質(zhì)不完全相同的一組身的分子結構、理化性質(zhì)不完全相同的一組E E。 如：乳酸脫氫酶同工酶（如：乳酸脫氫酶同工酶（LDHLDH）是）是19591959年年發(fā)現(xiàn)的第一個同工酶，由發(fā)現(xiàn)的第一個同工酶，由4 4個亞基組成，亞基個亞基組成，亞基分為分為M M型（骨骼肌型）和型（骨骼肌型）和H H型（心肌型）型（心肌型） 2 2、分離鑒定、分離鑒定 用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離。聚丙烯酰胺用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離。聚丙烯酰胺由丙烯

26、酰胺由丙烯酰胺( (AcrAcr) )和甲叉雙丙烯酰胺（和甲叉雙丙烯酰胺（BisBis）聚）聚合而成。通過合而成。通過電場效應和分子篩效應電場效應和分子篩效應使酶分開。使酶分開。二、同工酶（寡聚酶）二、同工酶（寡聚酶） 三、誘導酶三、誘導酶 誘導酶：一般不存在有誘導物時大量產(chǎn)生的一類酶。如：NR、大腸桿菌的-半乳糖苷酶四、抗體酶四、抗體酶 抗體酶：又稱催化性抗體，具有抗體的識別、結合專一性，又具有催化功能的蛋白質(zhì)。其本質(zhì)是免疫球蛋白，但在易變區(qū)具有酶的性質(zhì)。 1986年Schultz與Lerner兩個實驗室同時在美國Science雜志發(fā)表論文，報道他們成功地得到了具有酶催化活性的抗體，標志著抗

27、體酶的研究進入了一個新階段。 Schultz等人從對硝基苯酚磷酸膽堿酯（羧酸二酯水解反應的過渡態(tài)類似物）作為半抗原誘導產(chǎn)生的單克隆抗體中，篩選到一株抗體酶，可以使水解反應速率加快1.2104倍，Km值為208mol/L。 意義及應用前景： 為酶的過渡態(tài)理論提供有力證據(jù) 對特定的肽鍵進行水解，研究蛋白質(zhì)結構，在醫(yī)學上用來破壞病毒蛋白及心血管病人血管壁上的血液凝塊第七節(jié)第七節(jié) 酶的分離純化及酶工程酶的分離純化及酶工程 (自學自學)了解以下問題了解以下問題: :1 1、酶分離純化應注意的事項、酶分離純化應注意的事項2 2、掌握幾個概念、掌握幾個概念 酶工程酶工程 化學酶工程化學酶工程 固定化酶固定化

28、酶 生物生物酶工程酶工程 一、酶的分離純化一、酶的分離純化 目的： 研究酶的理化特性 作為生化試劑和藥物 工作： 把酶從很大體積濃縮到較小體積 除去酶制劑中的雜蛋白及其它大分子物質(zhì) 衡量指標： 總活力的回收和比活力提高的倍數(shù) 分離純化蛋白質(zhì)的方法原則上適用于酶，但應注意以下幾點： 1、選材 選擇酶含量豐富的新鮮生物材料。應在取材后立即提取酶，否則應低溫保存（-20-700C） 2、破碎 動物組織：研磨器、勻漿器、高速組織搗碎機 微生物及植物細胞：超聲波、凍溶、溶菌酶、某些化學試劑（甲苯、去垢劑）等 在低溫下，以水或低鹽緩沖液抽提。 提取介質(zhì)常加入少量EDTA（金屬離子鰲合劑）；巰基乙醇、DTT（二硫蘇糖醇）（保護巰基酶）等 4、分離及提純應盡量減少酶活性損失，操作條