FISH技術(shù)在血液腫瘤中的應(yīng)用主題講座課件(共40張)

1、vFISH-目前新興的分子遺傳學(xué)技術(shù)分子遺傳學(xué)技術(shù)，原理是采用熒光標(biāo)記的采用熒光標(biāo)記的DNA探針探針，利用探針與檢測(cè)樣本中DNA堿基對(duì)的互補(bǔ)性，在探針與標(biāo)本的DNA雜交后，通過熒光顯微鏡檢測(cè)熒光信號(hào)而得出結(jié)果，從而檢測(cè)細(xì)胞、組織樣本中的染色體和基因異常。熒光原位雜交熒光原位雜交Fluorescence In Situ Hybridization, FISH探針DNA加入熒光標(biāo)記解螺旋，雜交樣本預(yù)處理樣本預(yù)處理探針、樣本變性探針、樣本變性探針樣本雜交探針樣本雜交雜交后洗滌雜交后洗滌結(jié)果觀察結(jié)果觀察FISH基本實(shí)驗(yàn)過程基本實(shí)驗(yàn)過程根據(jù)標(biāo)記顏色的不同，常用探針主要有：根據(jù)標(biāo)記顏色的不同，常用探針主要

2、有：v單色探針單色探針（single color probe, SC）v雙色探針雙色探針（dual color probe, DC）v三色探針三色探針（triple color probe, TC）v雙色分離探針雙色分離探針（ dual color, break apart probe, DC, BCR）v雙色單融合探針雙色單融合探針（ dual color, single fusion probe, DC, SF Trans）v額外信號(hào)探針額外信號(hào)探針（extra signal, ES）v雙色雙融合探針雙色雙融合探針（ dual color, dual fusion probe, DC, D

3、F Trans）v單色探針單色探針（SC）：v雙色探針雙色探針（DC）：v三色探針三色探針（ TC）：D7S486CEP7CEP18YX正常正常正常正常正常正常異常異常異常異常異常異常vFISH檢測(cè)在臨床上主要應(yīng)用于：檢測(cè)在臨床上主要應(yīng)用于：血液系統(tǒng)疾病：白血病、血液系統(tǒng)疾病：白血病、MDS、MM等；等；實(shí)體瘤：乳腺癌、膀胱癌等；實(shí)體瘤：乳腺癌、膀胱癌等；產(chǎn)前遺傳篩查：唐氏綜合癥（產(chǎn)前遺傳篩查：唐氏綜合癥（21三體）等三體）等v臨床意義：臨床意義：從遺傳學(xué)角度檢測(cè)從遺傳學(xué)角度檢測(cè)染色體和基因染色體和基因的異常的異常輔助診斷，判斷預(yù)后，療效檢測(cè)及微小殘留檢測(cè)輔助診斷，判斷預(yù)后，療效檢測(cè)及微小殘留

4、檢測(cè) 血液系統(tǒng)腫瘤是我國十大高發(fā)腫瘤之一。大量研究表明，不同類型的血液血液腫瘤往往有其特異的染色體異常腫瘤往往有其特異的染色體異常，對(duì)腫瘤分型、診斷、治療和預(yù)測(cè)用預(yù)后都具有重要意義。常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)分析（CC）方法只能分析中期染色體，而對(duì)間期細(xì)胞、復(fù)雜核型細(xì)胞和染色體微缺失無法進(jìn)行診斷。FISH技術(shù)彌補(bǔ)了CC在這方面的不足，因此被廣泛應(yīng)用于血液腫瘤的研究、診斷等方面。FAB分型分型細(xì)胞遺傳學(xué)異常細(xì)胞遺傳學(xué)異常分子異常分子異常M0核型異常常見且復(fù)雜，常累及核型異常常見且復(fù)雜，常累及5、7、8和和13染色體染色體M1t(9;22), inv(3)M2t(8;21), t(6;9),t(12p)AML

5、1-ETOM3t(15;17)PML-RARAM4+4, 11q23重排，重排， M4Eo inv(16)/t(16;16)MLL-AF9M5t(11q), t(8;16)Pre-B/B-ALL(L1/L2)t(9;22)(q34;q11)BCR-ABLB-ALL(L3)t(8;14)(q24;q32)MYC-IGH白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)異常白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)異常v臨床上對(duì)血液腫瘤的臨床上對(duì)血液腫瘤的FISH檢測(cè)主要集中在以下幾個(gè)方面：檢測(cè)主要集中在以下幾個(gè)方面：染色體易位形成的融合基因檢測(cè)染色體易位形成的融合基因檢測(cè)：如CML的BCR-ABL、M3的PML-RARA、M2b的AML1-ETO融合

6、基因等；基因缺失檢測(cè)：基因缺失檢測(cè)：如CLL的P53基因缺失提示患者預(yù)后很差，而13q單一缺失則提示預(yù)后較好；對(duì)異性間造血干細(xì)胞移植的植入狀態(tài)檢測(cè)：對(duì)異性間造血干細(xì)胞移植的植入狀態(tài)檢測(cè)：通過性染色體計(jì)數(shù)探針動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)供/受者混合性嵌合體比例變化對(duì)異性間異基因造血干細(xì)胞移植后植入狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)測(cè)；微小殘留病灶（微小殘留病灶（MRD）的檢測(cè)：）的檢測(cè)：通過對(duì)腫瘤細(xì)胞特異的染色體異常進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè)，預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展和有無復(fù)發(fā)跡象。疾病名稱疾病名稱探針名稱探針名稱漿細(xì)胞疾病漿細(xì)胞疾病多發(fā)性骨髓瘤（MM）GLP P53，GLP RB1 ，GLP D13S319 GLP IGH ，GLP 1q21白白血血病病慢性淋巴

7、細(xì)胞白血?。–LL）GLP P53 GLP RB1 GLP D13S25 GLP ATM CSP 12 慢性粒細(xì)胞白血病（CML）GLP BCR/GLP ABL；GLP ASS急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋML-M3）GLP PML/GLP RARA 急性原始粒細(xì)胞白血病部分分化型（AML-M2）GLP AML1/GLP ETO粒單核細(xì)胞白血病 (AML-M4)GLP CBFB小兒急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）GLP 4/10,GLP 17, GLP BCR/GLP ABL,GLP MLL GLP TEL/AML1MDS骨髓增生異常綜合癥GLP CSF1R/ GLP D5S23，D5S721GLP E

8、GR1/ GLP D5S23，D5S721GLP D7S486/CSP7;GLP D7S522/CSP7;GLP D20S108/CSP8 ;CSP X/CSP Y；性染色體錯(cuò)配骨髓移植CSP X/CSP Y 淋淋巴巴瘤瘤B細(xì)胞淋巴瘤GLP IGH濾泡性淋巴瘤（FL）GLP IGH/GLP BCL2套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）GLP IGH/GLP CCND1彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）GLP BCL6伯基特淋巴瘤（BL）GLP C-MYC粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤（MALT）GLP MALT1GLP MALT1/GLP API2vMM常涉及多種染色體異常，主要為數(shù)目異常，分為超二倍體（+3、+5

9、、+7、+9等）和非超二倍體（-8、-13、-14、-17等）；染色體結(jié)構(gòu)異常較少見，主要有1號(hào)（1p、1q，部分缺失或1q三體）、13q-、14q（多為與14q32有關(guān)的幾種互補(bǔ)易位）等。vMM FISH檢測(cè)位點(diǎn)：P53、RB1、D13S319、IGH基因及基因及1q21位點(diǎn)位點(diǎn)。v推薦樣本：骨髓v適用人群：已確診為已確診為MM，需評(píng)估預(yù)后、進(jìn)行個(gè)體化治療的患者，需評(píng)估預(yù)后、進(jìn)行個(gè)體化治療的患者v以p53探針模式圖為例，17號(hào)染色體1區(qū)3帶1亞帶包含p53的區(qū)域標(biāo)記了一段含綠色熒光的260kb DNA序列；D13S319指13號(hào)染色體上獨(dú)一無二的編號(hào)319的DNA片段，標(biāo)記了一段含紅色熒光的

10、220kb DNA序列。正常情況下顯示2R2G信號(hào)，發(fā)生D13S319位點(diǎn)缺失時(shí)顯示1R2G。vIGH的探針在基因的兩端分別標(biāo)記了紅色和綠色熒光，正常情況下顯示紅色綠色重疊信號(hào)或黃色信號(hào)，當(dāng)IGH發(fā)生易位時(shí)顯示為紅色和綠色的分離熒光信號(hào)。P53/D13S319探針探針（雙色探針：（雙色探針：D13S319紅紅/ P53綠）綠）D13S319P53正常正常異常異常IGH探針（雙色分離探針）探針（雙色分離探針） 14161416v判斷生存期判斷生存期預(yù)后較差：P53缺失（24.7個(gè)月） 1q21 擴(kuò)增（21.9個(gè)月） IGH發(fā)生t(4;14)，t(14;16)易位（24.7個(gè)月） 預(yù)后中等（42.

11、3個(gè)月）：RB1缺失 D13S319缺失 預(yù)后較好（50.5個(gè)月）：IGH發(fā)生t(11；14)易位或者其他遺傳改變v指導(dǎo)臨床用藥（個(gè)體化治療）指導(dǎo)臨床用藥（個(gè)體化治療）：MM的初治治療多選用化療，包括MP方案（馬法蘭、潑尼松）、VAD方案（長春新堿、多柔比星、地塞米松）等；對(duì)于難治和復(fù)發(fā)的多發(fā)性骨髓瘤，多采用聯(lián)合化療和沙利度胺進(jìn)行治療；干擾素主要用于維持治療，對(duì)上述治療方法無效者可進(jìn)行造血干細(xì)胞移植。對(duì)于預(yù)后好的患者，使用干擾素、環(huán)磷酰胺或聯(lián)合化療沒有明顯的區(qū)別；對(duì)于預(yù)后中等的患者，使用干擾素治療反而會(huì)縮短患者總生存期?？梢?，多發(fā)性骨髓瘤基因異常的檢測(cè)對(duì)臨床有效開展個(gè)性化治療提供了重要依據(jù)。1

12、、 慢性淋巴細(xì)胞白血?。粤馨图?xì)胞白血?。–LL）檢測(cè)）檢測(cè)v檢測(cè)位點(diǎn)：檢測(cè)位點(diǎn)： P53、RB1、D13S25、ATM基因以及基因以及12號(hào)染色體號(hào)染色體。v推薦樣本：推薦樣本：外周血v臨床意義：臨床意義：判斷生存期：判斷生存期：預(yù)后差，P53缺失（32個(gè)月） 預(yù)后較差， ATM缺失（79個(gè)月） 預(yù)后中等， CSP 12三體（114個(gè)月） 預(yù)后較好，RB1缺失、 D13S25缺失（133個(gè)月）指導(dǎo)臨床用藥（個(gè)體化治療）指導(dǎo)臨床用藥（個(gè)體化治療）v7-11%CLL伴有P53缺失，預(yù)后不良，漂吟類似物治療無效，應(yīng)選用不涉及p53信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的藥物；vATM位于染色體11q22-23，11q22

13、.3缺失是CLL另外一個(gè)預(yù)后較差的核型異常，發(fā)生率12-20%，ATM缺失與CLL進(jìn)展密切相關(guān)；v+12是最早發(fā)現(xiàn)的B-CLL常見染色體異常，發(fā)生率15-35%，常伴有其他核型異常；v13q缺失是CLL最常見的染色體異常，40-60%的CLL出現(xiàn)該異常。RB1和D13S25位于此位點(diǎn)，單純del(13q14)預(yù)后較好，若伴有+12、11q-等其他染色體異常，則預(yù)后通常較差。2、 慢性粒細(xì)胞白血?。粤＜?xì)胞白血?。–ML）檢測(cè)）檢測(cè)v檢測(cè)位點(diǎn)：檢測(cè)位點(diǎn)： BCR/ABL融合基因、融合基因、ASS基因基因。v推薦樣本：推薦樣本：骨髓v適用人群：適用人群：CML初診及治療監(jiān)測(cè)的患者慢性粒細(xì)胞性白血

14、病是一種發(fā)生在早期多能造血干細(xì)胞上的惡性骨髓增慢性粒細(xì)胞性白血病是一種發(fā)生在早期多能造血干細(xì)胞上的惡性骨髓增生性疾病（獲得性造血干細(xì)胞惡性克隆性疾?。?。生性疾病（獲得性造血干細(xì)胞惡性克隆性疾?。?。對(duì)對(duì)CML的檢測(cè)主要針對(duì)的檢測(cè)主要針對(duì)BCR/ABL融合基因，這種融合基因是通過（融合基因，這種融合基因是通過（9；22）號(hào)染色體的基因重排及易位而形成的。）號(hào)染色體的基因重排及易位而形成的。 vBCR/ABL融合基因檢測(cè)融合基因檢測(cè)BCR/ABL融合基因通過t(9;22)號(hào)染色體易位而形成。9號(hào)染色體上原癌基因(ABL)的斷裂點(diǎn)比較恒定，22號(hào)上斷裂點(diǎn)簇集區(qū)(BCR)的斷裂點(diǎn)不恒定。BCR-ABL-

15、210見于95的CML(主要斷裂點(diǎn)斷裂形成)，BCR-ABL-190見于17%-30%的成人急性淋巴細(xì)胞白血病和2%-6%的兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(次要斷裂點(diǎn)斷裂形成)，但從染色體組型與慢性粒細(xì)胞白血病的費(fèi)城染色體在形態(tài)上看不出區(qū)別，F(xiàn)ISH檢測(cè)BCR/ABL融合基因可以區(qū)分。v檢測(cè)探針：檢測(cè)探針：額外信號(hào)探針（ES ）：可區(qū)分BCR/ABL融合基因形成于主要斷裂點(diǎn)（M-BCR位點(diǎn)）或次要斷裂點(diǎn)（m-BCR位點(diǎn)） 。雙色雙融合探針（DF） ：只可檢測(cè)是否有BCR/ABL融合基因，不能區(qū)分主次斷裂點(diǎn)。1. ES探針探針 可區(qū)分BCR/ABL融合基因形成于主要斷裂點(diǎn)或次要斷裂點(diǎn)，用于初診和指導(dǎo)格列

16、衛(wèi)用藥。異常結(jié)果顯示為兩紅、一綠、一黃熒光信號(hào)。在典型的陽性細(xì)胞中，如果有在典型的陽性細(xì)胞中，如果有BCR/ABL融合基因且融合基因且BCR斷裂位點(diǎn)為斷裂位點(diǎn)為M-BCR，其信，其信號(hào)類型體現(xiàn)為號(hào)類型體現(xiàn)為2R1G1F；斷裂位點(diǎn)為；斷裂位點(diǎn)為m-BCR，其信號(hào)類型體現(xiàn)為，其信號(hào)類型體現(xiàn)為1R1G2F（其中一（其中一個(gè)融合信號(hào)中的綠點(diǎn)相對(duì)較小）；無個(gè)融合信號(hào)中的綠點(diǎn)相對(duì)較小）；無BCR/ABL融合基因，其信號(hào)類型體現(xiàn)為融合基因，其信號(hào)類型體現(xiàn)為2R2G。 2. DF探針探針 只可檢測(cè)是否有BCR/ABL融合基因，不能區(qū)分主、次斷裂點(diǎn)，可用于治療效果監(jiān)測(cè)及用藥指導(dǎo)。異常結(jié)果顯示為一紅、一綠、兩黃熒

17、光信號(hào)。vBCR/ABL融合基因檢測(cè)意義融合基因檢測(cè)意義輔助診斷輔助診斷CML NCCN腫瘤學(xué)臨床實(shí)踐指南（2010年第二版）指出，BCR/ABL融合基因陰性的患者不是CML。這些患者的預(yù)后比BCR/ABL融合基因陽性的患者明顯差。因此，對(duì)于BCR/ABL融合基因陰性的患者需要進(jìn)一步考慮其他疾病。指導(dǎo)格列衛(wèi)使用指導(dǎo)格列衛(wèi)使用 格列衛(wèi)是在研究出CML患者高表達(dá)BCR/ABL融合基因蛋白產(chǎn)物的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研發(fā)出的特異性抑制BCR/ABL融合基因產(chǎn)物的分子靶向藥物。采用FISH技術(shù)對(duì)CML患者BCR/ABL融合基因進(jìn)行檢測(cè)，一旦確定了BCR/ABL融合基因的存在，就可以考慮使用格列衛(wèi)進(jìn)行治療。藥物

18、使用效果評(píng)估藥物使用效果評(píng)估骨髓移植效果評(píng)估骨髓移植效果評(píng)估鑒別診斷：鑒別鑒別診斷：鑒別CML急變和急變和AL BCR/ABL融合基因檢測(cè)顯示，AL的BCR/ABL融合基因由次要斷裂點(diǎn)斷裂形成，CML急變患者的BCR/ABL融合基因由主要斷裂點(diǎn)斷裂形成。檢測(cè)BCR/ABL融合基因，區(qū)別其主要斷裂點(diǎn)和次要斷裂點(diǎn)，達(dá)到鑒別診斷的目的。vASS基因異常檢測(cè)基因異常檢測(cè) ASS為精氨基琥珀酸合成基因,位于9q34.1。vASS基因檢測(cè)意義：評(píng)估基因檢測(cè)意義：評(píng)估CML患者預(yù)后患者預(yù)后 9-28CML患者伴有含ASS基因的9q34區(qū)段的缺失，此種患者預(yù)后差，慢性期易急變。 3、急性原始粒細(xì)胞白血病部分分

19、化型（、急性原始粒細(xì)胞白血病部分分化型（M2）檢測(cè)）檢測(cè)v檢測(cè)位點(diǎn)：檢測(cè)位點(diǎn)： AML1/ETO融合基因融合基因。v推薦樣本：推薦樣本：骨髓 AML1/ETO融合基因：競爭性抑制融合基因：競爭性抑制AML1靶基因的活化，干擾細(xì)胞正常的增靶基因的活化，干擾細(xì)胞正常的增殖與分化。殖與分化。AML1ETOvAML1/ETO融合基因檢測(cè)意義融合基因檢測(cè)意義輔助診斷輔助診斷M2型型AML AML1/ETO融合基因可見于92%的M2型AML患者中，特別是和我國首先提出的M2b型密切相關(guān)。判斷預(yù)后判斷預(yù)后 AML1/ETO融合基因陽性是預(yù)后好的標(biāo)志，患者對(duì)治療反應(yīng)佳，完全緩解率可達(dá)90%，5年無病生存可達(dá)5

20、0%-70%。4、急性早幼粒細(xì)胞白血?。ā⒓毙栽缬琢＜?xì)胞白血?。∕3）檢測(cè)）檢測(cè)v檢測(cè)位點(diǎn)：檢測(cè)位點(diǎn)：PML/RARA融合基因融合基因。v推薦樣本：推薦樣本：骨髓PML基因：早幼粒細(xì)胞白基因：早幼粒細(xì)胞白血病基因，位于血病基因，位于15號(hào)染色號(hào)染色體上。體上。RARA基因：維甲酸受體基因：維甲酸受體基因，位于基因，位于17號(hào)染色體上。號(hào)染色體上。15號(hào)染色體和號(hào)染色體和17號(hào)染色體發(fā)生特異位點(diǎn)的斷裂易位，形成號(hào)染色體發(fā)生特異位點(diǎn)的斷裂易位，形成PML/RARA融合基因，融合基因，此融合基因可以抑制正常的此融合基因可以抑制正常的RAR 基因功能，從而阻斷早幼粒細(xì)胞的進(jìn)一步分化基因功能，從而阻斷早

21、幼粒細(xì)胞的進(jìn)一步分化成熟，產(chǎn)生大量幼稚的早幼粒細(xì)胞，發(fā)生腫瘤。成熟，產(chǎn)生大量幼稚的早幼粒細(xì)胞，發(fā)生腫瘤。vPML/RARA融合基因檢測(cè)意義融合基因檢測(cè)意義輔助診斷急性早幼粒細(xì)胞白血病輔助診斷急性早幼粒細(xì)胞白血病 PML/RARA融合基因可見于90以上的APL中，成為APL的一個(gè)特異標(biāo)志。指導(dǎo)全反式維甲酸（指導(dǎo)全反式維甲酸（All trans-retinoic acid，ATRA）用藥）用藥ATRA治療APL的主要機(jī)制是靶向降解PML/RARA融合蛋白，促進(jìn)阻滯在早幼粒細(xì)胞階段的白血病細(xì)胞分化成熟。ATRA是治療APL的首選藥物,緩解率能達(dá)90% 。5、粒、粒-單核細(xì)胞白血病檢測(cè)單核細(xì)胞白血病檢

22、測(cè)v檢測(cè)位點(diǎn)：檢測(cè)位點(diǎn)： CBFB基因斷裂重組基因斷裂重組。v推薦樣本：推薦樣本：骨髓CBFB基因（Core binding factor ，CBFB）：核心結(jié)合因子 ,位于16號(hào)染色體上。CBFB也是早期造血所必需的轉(zhuǎn)錄因子，通過與也是早期造血所必需的轉(zhuǎn)錄因子，通過與AML1的的Runt同源結(jié)構(gòu)域同源結(jié)構(gòu)域結(jié)合，由結(jié)合，由AML1將其帶至胞核，增強(qiáng)將其帶至胞核，增強(qiáng)AML1與與DNA的結(jié)合能力，使的結(jié)合能力，使AML1依依賴的基因轉(zhuǎn)錄得以進(jìn)行。賴的基因轉(zhuǎn)錄得以進(jìn)行。vCBFB基因斷裂重組檢測(cè)意義基因斷裂重組檢測(cè)意義輔助診斷輔助診斷M4型型AML CBFB基因斷裂重組是AML的特征性染色體異常

23、，占總AML患者的5%-10%和23的M4患者，通常見于AML-M4E0亞型。現(xiàn)在認(rèn)為CBFB基因斷裂重組是M4E0特征性的遺傳學(xué)改變。評(píng)估預(yù)后評(píng)估預(yù)后 CBFB基因斷裂重組的AML患者對(duì)化療敏感、預(yù)后較好。 6、小兒急性淋巴細(xì)胞白血病檢測(cè)、小兒急性淋巴細(xì)胞白血病檢測(cè)v急性淋巴細(xì)胞白血病是兒童中發(fā)病率最高的惡性腫瘤，我國l5歲以下小兒白血病的發(fā)病率為2.73/10萬。v兒童急性淋巴細(xì)胞白血病在兒童白血病中占75%之多，是兒童白血病中最常見的類型。v探針介紹：序序號(hào)號(hào)檢測(cè)探針檢測(cè)探針標(biāo)記顏標(biāo)記顏色色探針定位探針定位異常染色異常染色體體1GLP 4/GLP 10綠/紅GLP 4: 4p11.1-q

24、11.1GLP 10: 10p11.1-q11.1+4，+102GLP 17紅GLP 17: 17q11 +173GLP TEL/GLP AML1紅/綠GLP AML1：21q22GLP TEL：12p13 t(12;21)4GLP MLL紅綠GLP MLL：11q23t(11;v)5GLP BCR/GLP ABL(DF)綠/紅GLP BCR: 22q11.2GLP ABL: 9q34t(9;22)v4、10、17號(hào)染色體檢測(cè)號(hào)染色體檢測(cè)兒童ALL約25%有染色體數(shù)目增加，以4、10、17號(hào)染色體受累較為多見。4、10和17染色體三體是獨(dú)立的預(yù)后良好的指標(biāo)，這類患者7年EFS大于90%。vTE

25、L/AML1融合基因檢測(cè)融合基因檢測(cè)TEL/AML1在兒童ALL中的發(fā)生率高達(dá)20-25，是目前兒童ALL最常見的染色體重排。但由于t(12;21)十分微小，不易被常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)現(xiàn)。大多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)TEL/AML1陽性的兒童ALL治療效果很好，5年EFS和總生存率達(dá)到89和97，是預(yù)后良好的指標(biāo)之一。vMLL基因斷裂重組檢測(cè)基因斷裂重組檢測(cè)MLL基因改變?cè)诩毙园籽≈械陌l(fā)生率約為510，在嬰兒ALL中則高達(dá)79，是預(yù)后不良的標(biāo)志。vBCR/ABL融合基因檢測(cè)融合基因檢測(cè)BCR/ABL融合基因占兒童ALL的35，是最重要的預(yù)后不良因素之一。一旦檢測(cè)出BCR/ABL融合基因，患兒需接受更為強(qiáng)烈的化

26、療或造血干細(xì)胞移植。但大多數(shù)患兒仍會(huì)治療失敗，5年EFS只有28.6。v臨床意義臨床意義預(yù)后評(píng)估預(yù)后評(píng)估TEL/AML1基因融合或4、10、17號(hào)染色體三體的患者預(yù)后較好；MLL基因重排的患者預(yù)后較差；BCR/ABL基因融合的患者預(yù)后非常差。美國兒童腫瘤組（Children oncology group, COG）根據(jù)發(fā)病年齡、初診白細(xì)胞數(shù)、染色體和融合基因、初診時(shí)CNS或睪丸白血病以及誘導(dǎo)化療的骨髓原始幼稚細(xì)胞比例或MRD水平，將兒童ALL分為低危t(12;21)/TEL-AML1或4、10、17號(hào)染色體三體、標(biāo)危、高危（MLL重排）和高高危t(9；22)/BCR-ABL4組。v骨髓增生異常

27、綜合征（MDS）是一組起源于造血干細(xì)胞，以血細(xì)胞病態(tài)造血、高風(fēng)險(xiǎn)向急性白血病轉(zhuǎn)化為特征的難治性血細(xì)胞質(zhì)、量異常的異質(zhì)性疾病。v發(fā)病率：3/10萬 v分類：難治性貧血（RA） 難治性貧血伴環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞（RARS） 難治性血細(xì)胞減少伴多系發(fā)育異常（RCMD） 難治性貧血伴原始細(xì)胞增多（RAEB） 骨髓增生異常綜合征，無法分類（MDS，U） 5q-綜合征（MDS，5q-）MDS亞型亞型臨床癥狀臨床癥狀中位生存期中位生存期白血病轉(zhuǎn)化率白血病轉(zhuǎn)化率RA、RAS貧血為主、病情進(jìn)展緩慢3-6yr5%-15%RAEB、RAEB-t貧血、出血、感染、病情進(jìn)展快12mo(RAEB)5mo(RAEB-t)40%(

28、RAEB)60%(RAEB-t)CMML 貧血為主、可有感染、出血20mo30%20%的MDS患者死于感染預(yù)后預(yù)后染色體核型染色體核型好5q-、20q- 、-Y、正常核型中其它異常差-7/7q-,復(fù)雜染色體核型異常(3種異常)MDS MDS 染色體核型預(yù)后分組染色體核型預(yù)后分組vMDS染色體及基因異常染色體及基因異常FISH檢測(cè)探針檢測(cè)探針序號(hào)序號(hào) 檢測(cè)探針檢測(cè)探針標(biāo)記顏色標(biāo)記顏色 探針定位探針定位異常染色體異常染色體1GLP CSF1R/GLPD5S23,D5S721紅/綠CSF1R：5q33D5S23，D5S72：5p15-5/5q-2GLP EGR1/GLPD5S23,D5S721紅/綠

29、EGR1：5q31D5S23，D5S72：5p15-5/5q-3GLP D7S486/CSP7紅/綠D7S486：7q31CSP7：7p11-q11-7/7q-4GLP D7S522/CSP7紅/綠D7S522:7q31CSP7:7p11-q11-7/7q-5GLP D20S108/CSP8紅/綠D20S108:20q12CSP8：8p11-q1120q-、+86CSP X/CSP Y紅/綠CSP X：Xp11-q11CSP Y：Yp11-q11-Y適用人群：適用人群：臨床經(jīng)常規(guī)檢測(cè)排除常見原因?qū)е碌呢氀杞?jīng)骨穿進(jìn)一步診斷的患者。需借助細(xì)胞遺傳學(xué)異常確診的可疑MDS患者臨床已經(jīng)診斷為MDS，

30、需結(jié)合遺傳學(xué)異常判斷預(yù)后的患者。v臨床意義臨床意義鑒別診斷鑒別診斷染色體異常是MDS與其他非克隆性血液系統(tǒng)疾病所致貧血如再生障礙性貧血、缺鐵性貧血、巨幼細(xì)胞貧血等鑒別診斷的主要依據(jù)之一。 輔助診斷輔助診斷MDSMDS患者存在的克隆性染色體異常多為缺失性改變， 40%-70%的MDS患者可有細(xì)胞遺傳學(xué)異常，以-5/5q-、-7/7q-、+8、20q-最為常見。染色體異常是MDS維也納診斷標(biāo)準(zhǔn)的三大確定標(biāo)準(zhǔn)之一。根據(jù)建議，MDS診斷滿足兩個(gè)必要標(biāo)準(zhǔn)和一個(gè)確定標(biāo)準(zhǔn)即可。預(yù)后評(píng)估，指導(dǎo)臨床個(gè)體化治療預(yù)后評(píng)估，指導(dǎo)臨床個(gè)體化治療正常核型、5q-、20q-、-Y的MDS患者預(yù)后較好；-7/7q-、復(fù)雜異常

31、的MDS患者預(yù)后差；低危組MDS采用促進(jìn)造血、誘導(dǎo)分化和生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑;高危組MDS采用AML的聯(lián)合化療方案和造血干細(xì)胞移植。 v用于監(jiān)測(cè)異性異基因造血干細(xì)胞移植效果用于監(jiān)測(cè)異性異基因造血干細(xì)胞移植效果男性患者骨髓移植前 男性患者骨髓移植后探針：探針：CSP X/CSP Y淋巴瘤類型淋巴瘤類型探針名稱探針名稱涉及基因涉及基因發(fā)生率發(fā)生率臨床意義臨床意義B細(xì)胞淋巴瘤GLP IGHIGH50%-85%鑒別B細(xì)胞惡性淋巴瘤和淋巴組織良性增生性病變?yōu)V泡性淋巴瘤GLP IGH/GLP BCL2IGH/BCL290%輔助診斷濾泡性淋巴瘤套細(xì)胞淋巴瘤GLP IGH/GLP CCND1IGH/CCND1 95

32、%輔助診斷套細(xì)胞淋巴瘤彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤GLP BCL6BCL640%輔助診斷彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤伯基特淋巴瘤GLP C-MYCC-MYC100%輔助診斷伯基特淋巴瘤粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤GLP MALT1MALT110%-20%輔助診斷MALT淋巴瘤GLP API2/GLP MALT1API2/MALT140%指導(dǎo)抗HP治療間變性大細(xì)胞淋巴瘤GLP ALKALK60%-80%評(píng)估預(yù)后異常模式異常模式異常例數(shù)異常例數(shù)陽性率陽性率5q-/-587.07%7q-/-787.07%+887.07%20q-1311.5%-Y21.77%-821.77%FISH-MDS在113例MDS確診病例中，F(xiàn)I

33、SH檢測(cè)發(fā)現(xiàn)26例存在染色體異常改變MDS（FISH）檢測(cè)報(bào)告單）檢測(cè)報(bào)告單 姓名： 年齡： 性別： 病例號(hào)： 申請(qǐng)單號(hào)： 科別： 標(biāo)本種類： 臨床診斷： 送檢時(shí)間： CSFIR/D5S23探針 EGR1/D5S23探針 D7S486/CSP7探針（5q33紅/5p綠） (5q31紅/5p綠) （7q31紅/CSP7綠） D7S522/CSP7探針 X/Y探針 D20S108/CSP8探針（7q31紅/CSP7綠） （X綠/Y紅） （20q12紅/CSP8綠）v結(jié)果分析：本次試驗(yàn)分別計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，各異常細(xì)胞百分比分別為：GLP CSFIR探針： 50%，GLP D5S23探針：0%；GLP EGR1探針： 50%，GL