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文檔簡介

1、FACSAri a流式細胞儀上樣準備（一）上樣時需要準備的物品漂白水 3-5L75%酒精 5L無菌 PBS或生理鹽水 5-10L（二） FACSAri a 分選時需自備的質控品Accudrop beads （分選時液滴延遲校準） ：貨號 345249，貨期需 4 周，如需分選要提前訂購。注：做分選時需自備，如無自備亦可上樣，但不保證分選效果。（三）上樣時，樣品的準備保證細胞活性：需4冰上保存保證樣品為單個細胞，不黏連：反復吹打，用尼龍膜過濾分選時，需再次培養(yǎng)的，收集管內需裝至少1/2 培養(yǎng)基。建立實驗模板1.在軟件界面左側 Browser 面板下，依次點擊 New Folder、Experim

2、ent、Specimen（均可重命名），單擊 Specimen左側“ +”符號，顯示下方的 Tube，點擊左側灰色指示箭頭，使之變成綠色。2. 在軟件 Cytometer 面板上，點擊 Parameters選項卡，選擇實驗所需熒光通道（按 Ctrl 鍵可多選），并刪除多余通道。選擇熒光素名稱、信號放大類型（ log/lin ）、信號脈沖類型（ H/A/W ），3. 在右側 worksheet 頁面中，畫出實驗所需模板：選擇點圖（雙參數(shù)）或直方圖（單參數(shù)），在圖中選擇參數(shù)，并建立所需“門” （多邊形、矩形、十字象限形、 線形，根據(jù)實驗情況而定） 。利用鼠標右鍵 Show Populations選

3、項建立圖之間的聯(lián)系。4.至此，一個簡單的實驗模板基本建成。 現(xiàn)在可以將樣本管放在上樣臺上，點擊上樣面板的 load，此時 Acquire Data 自動被激活或手動點擊采集控制面板上的 Acqire data 按鈕，儀器開始獲取樣本數(shù)據(jù)。5.調整 Cytometer 面板中各通道電壓， 使 FSC/SSC 中信號位于利于觀察的位置。調整閾值（Threshold），去除碎片和噪音信號。 調整上樣速度 （FlowRate）。6.在 FSC/SSC中調整門的位置、 大小和形狀， 使之圈住感興趣細胞群。 調節(jié)熒光通道的電壓，使熒光信號位于合適的位置。7.在鼠標右鍵中打開數(shù)據(jù)顯示，觀察實驗的實時結果。8.實驗條件調整完畢后，在上樣

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