干燥綜合征患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)及其臨床意義

1、干燥綜合征患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)及其臨床意義    【摘要】nbsp;nbsp;目的nbsp;了解干燥綜合征(Sjgrennbsp;syndrome,nbsp;SS)患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的變化及其臨床意義。方法nbsp;用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并比較SS患者與對(duì)照者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的差異。以血沉及血清中IgG來(lái)判     作者：莊俊漢，李博，林華鵬，何英，張麗君，李劍松，葉志中 作者單位：（廣東省深圳市第四人民醫(yī)院，廣東深圳518040）    【摘要】

2、0; 目的 了解干燥綜合征(Sjgren syndrome, SS)患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的變化及其臨床意義。方法 用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并比較SS患者與對(duì)照者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的差異。以血沉及血清中IgG來(lái)判斷SS病情活動(dòng)，分析T淋巴細(xì)胞亞群與SS病情活動(dòng)的關(guān)系。結(jié)果 SS患者外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+ CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞亞群及CD3+ CD4+T淋巴細(xì)胞/CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞比值與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但病情活動(dòng)的SS患者的CD3+ T淋巴細(xì)胞亞群和CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞亞群均低于病情非活動(dòng)者，而CD3+ CD4+T淋巴細(xì)胞/

3、CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞的比值則較后者高（P<0.01）。結(jié)論 SS患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群與對(duì)照組比較雖無(wú)顯差，但當(dāng)SS病情活動(dòng)時(shí)T淋巴細(xì)胞亞群有顯著改變，可能在SS發(fā)病過(guò)程中具有一定作用。 【關(guān)鍵詞】  干燥綜合征；T淋巴細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù) 基金項(xiàng)目：深圳市科技局科研立項(xiàng)經(jīng)費(fèi)資助（項(xiàng)目編號(hào)：200204135） Changes of T lymphocyte subsets in peripheral blood from patients with Sjgren's syndrome and its clinical significance ZHUANG J

4、unhan，LI Bo, LIN Huapeng, HE Ying, ZHANG Lijun, LI Jiansong ,YE Zhizhong (Department of Rheumatology, The Fourth People's Hospital of Shenzhen City, Shenzhen 518040, China) Abstract：Objective  To investigate the change of T lymphocyte subsets in peripheral blood from patients with Sjgren

5、9;s syndrome (SS) and its clinical significance.Methods  T lymphocyte subsets were determined by twocolor flowcytometry with various monoclonal antibodies. Erythrocytesedimentation rate(ESR) and serum IgG were used to classify the disease activity. The relationship between T lymphocyte subsets

6、and disease activity was analyzed.Results  Percentage of CD3+ T lymphocyte, CD3+ CD4+ T lymphocyte, CD3+ CD8+ T lymphocyte and the ratio of CD3+ CD4+ / CD3+ CD8+ did not significantly differ between in SS and the control healthful subjects. The percentage of CD3+ T lymphocyte and CD3+ CD8+ T ly

7、mphocyte significantly decreased but the ratio of CD3+ CD4+ / CD3+ CD8+ increased in patients with active SS. Conclusion   The percentage of T lymphocyte subsets might not be abnormal in patients with SS, but could relate to SS activity, which may play a role in the development of SS. 

8、0;   Key words: Sjgren syndrome; T lymphocyte subsets; flowcytometry 干燥綜合征(Sjgren syndrome，SS)是一種自身免疫性外分泌腺病，典型臨床表現(xiàn)為口眼干燥和血清中出現(xiàn)多種自身抗體(抗SSA抗體、抗SSB抗體等)，是我國(guó)臨床最常見(jiàn)的彌漫型結(jié)締組織病之一。SS的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今仍未完全清楚。近年來(lái)的有些研究表明，SS的發(fā)病與T淋巴細(xì)胞亞群的變化相關(guān)13。因此，對(duì)SS患者體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞進(jìn)行研究，對(duì)于進(jìn)一步闡明SS的發(fā)病機(jī)制可能具有非常重要的意義。國(guó)外很早以前就在這方面進(jìn)行了相關(guān)研究，而國(guó)內(nèi)尚未

9、見(jiàn)這方面的研究報(bào)道。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)比較了SS患者及對(duì)照者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的差異，并以血沉及血清中IgG來(lái)判斷SS病情活動(dòng)，分析了SS患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群與SS病情活動(dòng)的關(guān)系，旨在進(jìn)一步闡明外周血中T淋巴細(xì)胞亞群在SS發(fā)病中的作用。     1  對(duì)象和方法     1.1  研究對(duì)象     本研究中的16例SS患者均為本院門(mén)診或住院患者，均符合2002年pSS歐洲分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，全部為女性，平均年齡（40±3）歲。13例正常對(duì)照者為在本院體檢的本院職工，全部

10、為女性，平均年齡（45±4）歲。16例其它自身免疫病對(duì)照者為在本院住院的伴有口干癥狀的RA患者、SLE患者及UCTD患者，其中男性1例，女性15例，平均年齡（44±2）歲。     1.2  實(shí)驗(yàn)方法     所有受檢者均于清晨空腹時(shí)無(wú)菌采集外周靜脈血，T淋巴細(xì)胞亞型的檢測(cè)采用雙色流式細(xì)胞方法。各樣品測(cè)定管中各加入抗凝血標(biāo)本50L，然后每管中分別加入熒光標(biāo)記的單克隆抗體液10L，振蕩混勻，室溫避光孵育20min。加入溶血素1mL，振蕩混勻，室溫避光孵育10 min。然后1200 r/min離心5min。棄

11、上清液，加入PBS 1mL，1200 r/min離心5min。棄上清液，加入PBS 400L，混勻后上機(jī)檢測(cè)。采用Simulset軟件分析。血沉的檢測(cè)采用魏氏法，IgG的檢測(cè)采用免疫比濁法。以血沉及血清中IgG水平來(lái)判斷SS病情活動(dòng)，如果以上兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)高于正常，則認(rèn)為SS存在病情活動(dòng)45。     1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理     所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，采用單因素方差分析及t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。     2  結(jié)果  

12、0;                          2.1  SS患者與對(duì)照者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的比較     SS患者外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞亞群及CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞/ CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比值與正常對(duì)照者及自身免疫病對(duì)照者相比均

13、無(wú)明顯差異(P>0.05)，詳見(jiàn)表1。 表1  SS患者及對(duì)照者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的比較（略） 3組各項(xiàng)指標(biāo)相比，P均>0.05 。 2.2  活動(dòng)期SS患者與非活動(dòng)期SS患者外周血中的T淋巴細(xì)胞亞群比較     與非活動(dòng)期SS患者相比，活動(dòng)期SS患者的CD3+ T淋巴細(xì)胞亞群及CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞亞群均低于病情非活動(dòng)者，而CD3+ CD4+T淋巴細(xì)胞/CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞比值則較后者高，詳見(jiàn)表2。     表2  活動(dòng)期SS患者與非活動(dòng)期SS患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的比較（

14、略） 與非活動(dòng)期SS組比較，*P<0.01，*P>0.05 。 3  討論     血清中出現(xiàn)多種自身抗體，包括類(lèi)風(fēng)濕因子、抗SSA抗體、抗SSB抗體等，是SS的一個(gè)顯著特征。已有研究表明，這些自身抗體的產(chǎn)生與SS患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞異常有關(guān)。因此，對(duì)SS患者體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞進(jìn)行研究，對(duì)于進(jìn)一步闡明SS的發(fā)病機(jī)制可能具有非常重要的意義。在國(guó)外，Bakhshi等6及Ichikawa等7很早以前就在這方面進(jìn)行了研究。Bakhshi等6率先應(yīng)用單克隆抗體及流式細(xì)胞技術(shù)在18例SS患者外周血中對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn):T淋巴細(xì)胞的比例明顯低

15、于正常對(duì)照;在原發(fā)性SS患者中，可以與抗Leu2a抗體反應(yīng)的抑制性/細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞及可以與抗Leu3a抗體反應(yīng)的輔助性/誘導(dǎo)性T淋巴細(xì)胞的比例均明顯低于正常對(duì)照，但是輔助性/抑制性T淋巴細(xì)胞的比例與正常對(duì)照無(wú)明顯差異;在繼發(fā)性SS患者中，只有抑制性/細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的比例下降。Ichikawa等7用雙色流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)23例SS患者、16例類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者及31例正常對(duì)照外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)SS患者及的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞及CD8+CD11+T淋巴細(xì)胞均比正常對(duì)照者低。迄今為止，國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)這方面的文獻(xiàn)報(bào)道。     為

16、了明確國(guó)內(nèi)SS患者體內(nèi)外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的情況，本研究率先在16例中國(guó)SS患者、13例正常對(duì)照者及16例自身免疫病對(duì)照者中對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比，SS患者外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+ CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞亞群及CD3+ CD4+T淋巴細(xì)胞/ CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞比值與兩個(gè)對(duì)照組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中病情活動(dòng)的SS患者的CD3+ T淋巴細(xì)胞亞群及CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞亞群均低于病情非活動(dòng)者，而CD3+ CD4+T淋巴細(xì)胞/ CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞比值則較后者高。以上結(jié)果與上述國(guó)外報(bào)道存在一定的差

17、異，可能與檢測(cè)對(duì)象種族不同等有關(guān)。T淋巴細(xì)胞是一種重要的免疫活性細(xì)胞，CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞是T淋巴細(xì)胞中功能相異的兩個(gè)亞群，在免疫應(yīng)答中分別發(fā)揮正、負(fù)調(diào)節(jié)作用，形成T細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。機(jī)體的相對(duì)免疫平衡狀態(tài)主要由它們間的相互影響來(lái)維持，兩亞群細(xì)胞比例的失調(diào)就會(huì)產(chǎn)生免疫功能失常，因此CD4+/CD8+比值代表了整體的免疫平衡8。在本研究中，與非活動(dòng)期SS患者相比，活動(dòng)期SS患者的CD3+ CD4+T淋巴細(xì)胞/ CD3+ CD8+T淋巴細(xì)胞比值顯著高于病情非活動(dòng)者，提示在活動(dòng)期SS患者中，輔助性T淋巴細(xì)胞的比例相對(duì)較高，可能會(huì)存在免疫功能紊亂，引起自身抗體的產(chǎn)生，這也與臨床上所觀(guān)察到的現(xiàn)象非常吻合。

18、     本研究初步表明，SS患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群與對(duì)照組比較雖未見(jiàn)異常，但與SS病情活動(dòng)有關(guān)，可能在SS發(fā)病過(guò)程中具有一定作用。由于本研究例數(shù)較少，所以有關(guān)結(jié)果尚有待進(jìn)一步探討。 【參考文獻(xiàn)】   1MANDL T, BREDBERG A, JACOBSSON L T, et al. CD+4 T lymphocytopenia a frequent finding in antiSSA antibody serupositive patients with primary Sjogren's syndromeJ. J Rheumatol

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